振明正生合剂对裸鼠抗肿瘤作用的实验研究

振明正生合剂对裸鼠抗肿瘤作用的实验研究

在临床初步观察中，中药复明正生合用对各种人的肿瘤有生长抑制作用。笔者采用经典的人肿瘤细胞裸鼠移植瘤模型,观察了该药物体内对人肺癌、大肠癌、神经胶质瘤、肝癌和乳腺癌的生长抑制作用,并做了急性毒性试验,评估了该药的安全性,报道如下。1实验数据1.1实验动物及试剂中药复方振明正生合剂(批号:20071018、20080901,规格100mL/瓶),由北京立国之路科技有限公司提供,主要成分为藏红花、西藏秦韭、昆明鸡血藤、千里光、黑胡桃、啤酒花、诃子、臭草等。常规培养试剂:国产小牛血清及1640培养液,DMEM培养液。铯源照射装置:美国BD公司。振明正生浓缩药物(用于急性毒性试验):原液浓缩6倍。1.2病理细胞库和细胞系人肺癌细胞系A549、人大肠癌细胞系SW480、人神经胶质瘤细胞系Ln229、人肝癌细胞系L7402和人乳腺癌细胞系MB231均为中国医学科学院血液学研究所病理细胞库保存并提供。1.3动物1.3.1裸鼠Balb/c裸鼠购自中国医学科学院实验动物研究所、北京维通利华有限公司,饲养于中国医学科学院血液研究所SPF级实验动物中心。1.3.2昆明老鼠10只,雌雄各半,体质量18～21g,购自中国医学科学院实验动物研究所。1.4实验方法1.4.1动物分组、给药及观察指标1.4.1.1肿瘤细胞系常规培养人肺癌、大肠癌、肝癌、乳腺癌细胞系在含10%小牛血清的RPMI1640培养液中培养,人神经胶质瘤细胞系在含10%小牛血清的DMEM(高糖)培养液中培养。培养条件为常规37℃,5%CO2孵箱培养。5种细胞均用0.25%的胰蛋白酶消化传代。1.4.1.2裸鼠接种及分组Balb/c裸鼠4～5周龄,雌性。全身照射3Gy,于照射当天皮下接种肿瘤细胞2×106只-1。接种后随机分为实验组和对照组,每组5或6只裸鼠。1.4.1.3治疗接种后24h开始给药,实验组每天口服振明正生合剂0.2mL/只,对照组每天口服生理盐水0.2mL/只。均连续4周。1.4.1.4观察指标1.4.1.4.1肿瘤体积每周用游标卡尺测量2组动物肿瘤大小,肿瘤体积按照下列公式计算:V=1/2长径×短径。肿瘤生长抑制率=(对照组肿瘤体积-实验组肿瘤体积)/对照组肿瘤体积。1.4.1.4.2肿瘤质量给药后4周活杀动物,剥离肿瘤,称质量,计算抑制率。肿瘤生长抑制率=(对照组肿瘤质量-实验组肿瘤质量)/对照组肿瘤质量。1.4.2急性中毒试验按照每只小鼠灌胃最大容量,口服振明正生浓缩药物0.6mL/20g,观察24h,计算药物LD50。1.5统计处理成组数据比较采用t检验。2结果2.1肺癌细胞系统浅棕色大鼠移植肿瘤的体积抑制经过3周的治疗,振明正生合剂对肺癌模型的体积抑制率为41%(见表1及图1)。2.2有2.2回复突变器经过4周的治疗,振明正生合剂对大肠癌模型的体积抑制率为64%(见表2及图2)。对照组肿瘤质量(294.0±146.4)mg,实验组肿瘤质量(116.0±54.13)mg,抑制率为61%,2组比较有显著性差异(P<0.05)。见图3。2.3肿瘤体积抑制率经过4周的治疗,振明正生合剂对人神经胶质瘤细胞系Ln229裸鼠移植瘤肿瘤体积抑制率为54%(见表3及图4)。对照组肿瘤质量(180.0±54.3)mg,实验组肿瘤质量(55.0±45.2)mg,抑制率为69%,2组比较有显著性差异(P<0.05),见图5。2.4人体肝肿瘤细胞系统瘤的体积抑制该试验分别在2008年3月及2009年1月重复做了2次,2次试验中振明正生合剂用的是同一批号:20071018。2.4.1实验组液设计将振明正生合剂原液静置48h以上,取沉淀液为实验组1,取上清液为实验组2。经过4周的治疗,实验组1肝癌模型体积抑制率为80%(见表4及图6),对肝癌模型的质量抑制率为80%(见表5及图7),各组人肝癌细胞系L7402裸鼠移植瘤体积的动态观察见图8。2.4.2组积抑制率振明正生合剂用原液。经过4周的治疗,振明正生合剂对肝癌模型的肿瘤体积抑制率为76%(见表6及图9),对照组肿瘤质量(120.0±173.8)mg,实验组肿瘤质量(24.5±8.8)mg,抑制率为80%,2组比较有显著性差异(P<0.05),见图10。2.5组患者肿瘤质量比较经过4周的治疗,振明正生合剂对乳腺癌模型的体积抑制率为94%(见表7、图11)。对照组肿瘤质量(540.0±159.4)mg,实验组肿瘤质量(32.0±34.7)mg,抑制率为94%,2组比较有极显著性差异(P<0.01),见图12。各组裸鼠移植瘤体积的动态观察见图13。2.6裸鼠治疗剂量选择小鼠无一死亡。试验剂量相当于每只20g体质量的小鼠一次口服原药3.6mL/20g,即180mL/kg,为裸鼠治疗剂量的18倍。这样大的剂量仍然没有导致动物死亡,证明本品为无毒/低毒(LD50>1g/kg或者1mL/kg为无毒或低毒)。3振明正生小制剂在中药治疗肿瘤的生长和疗效综上所述,振明正生合剂对5种肿瘤细胞系裸鼠移植瘤均有明显抑制肿瘤生长作用。经过3～4周的治疗,该中药对肺癌模型的体积抑制率达到41%(P<0.05),对大肠癌模型的质量抑制率超过60%(P<0.05),对神经胶质瘤模型的质量抑制率为69%(P<0.05),对肝癌模型的质量抑制率超过79%(P<0.05),对乳腺癌模型的质量抑制率达到94%(P<0.01)。同时,振明正生合剂组方药材均为无毒可食植物,无毒副作用,安全性良好。间隔近1a时间重复的人肝癌模型试验结果显示:振明正生合剂质量及疗效稳定性良好,不同剂量疗效相同。传统中药治疗肿瘤的研究大体走过了3个阶段。第1个阶段是从民间验方筛选抗肿瘤单方或复方;第2阶段是在验方研究的基础上进行了大量的中药单体研究;第3阶段是近年来又开始进行的抗肿瘤复方研究。对于中药抗肿瘤的机制,以往主要是从中医传统理论出发,从扶正培本、软坚散结、清热解毒等方面阐述;近年来研究发现,中药抗肿瘤的机制也可以通过诱导细胞分化(如三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病)、促进细胞凋亡、免疫调节作用(如参芪注射液、参芪扶正等均可以活化巨噬细胞,促使B细胞产生抗体,调节T细胞亚群,提高NK细胞、LAK细胞活性,诱生IL-2、INF杀伤瘤细胞)、杀伤瘤细胞、抗多药耐药(如汉防己甲素、川芎嗪等逆转耐药细胞株抗药性)、抗侵袭转移(如川芎嗪可有效控制黑色素瘤的肺转移)、抗肿瘤血管生成、调节相关基因表达、影响细胞信号传导通路等途径,发挥抗肿瘤作用。实际上,由于中药复方成分复杂,其抗肿瘤效果很可能是多机制共同发生的作用。笔者将人的肿瘤细胞系接种给免疫缺陷小鼠,使人的肿瘤细胞在小鼠身上生长,建立了多种人的肿瘤体内模型。该模型可以在体内观察抗肿瘤药物对人肿瘤细胞的作用,是筛选新的抗癌药物或者复方、研究药物作用机制的良好体内模型。本实验观察到,振明正生合剂对人肺癌、大肠癌