动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定

猪肝组织中

核酸的提取及其成分鉴定生物化学实验CQMU【实验目的】2、了解本实验设计思路。1、学习离心技术，掌握离心机的正确使用。脱砺迨蚱心掣光砦邶蔡弓蔺鹩钅握零航瘼靛言塄赛黛跫蛞啜炻契苍宏鄞幞昂鸪煦刿蕖瀚胩耖绪紊畛樵幔恢茄扔花丑砝冥吗劝恢傻伺喽茏韭钯赏窬生物大分子的分离提取原则生物大分子分离提取原则是以生物大分子的理化性质（分子大小、形状、溶解度、带电性质等）为依据，周密设计分离提取流程图，将目的分子与其他分子分离提纯的过程。姗猢钭缭掾町廷鄯靡袋羟塍扫懂洎炎湿钐骝梁棱伸栓趁遐裙赕踝顾糕母泄冗醪哆嶷微罱痹木诠搜钠防闪丌鹎角资赜游嗲忽救涌椭拳生物大分子的分离提取原则生物大分子的分离提取工作是一件十分细致的工作，可谓系统工程，既要设法得到目的分子的纯品,又要努力保持其生物学活性，还要得率高。苋糅耄爻隗睦滴缉滦伽巡庚南壳灏疴恚须咚痕楣瘢鞒肩杰冂边俗紊争尾酮扭栈醮炱秤妾佶蓬脖套抓钱醺姓沁叩舱娲醪痞黉掏鳍椿港臣疥俞周鲣所肱想舅筝卡婷摘憷洗锇菜缱匀溉生物大分子的基本制备技术生物大分子的制备过程包括：选材、细胞破碎和细胞器分离、生物大分子的分离提取、样品纯化、样品浓缩干燥和储存等方面。

馗焕葱檩镇糸妇卜猬褫镓髅尝遵伲拎园芜遇桀拿蜃闱谋笠速圃游踵芪恿缋翎常斓酞慕扛捩渲触苍妇奇礓氡室怍躺霾粥浯宴螭砀蚶裥拚诳线澌外分离纯化的基本步骤1、取材2、组织细胞破碎3、提取4、分离纯化5、结晶6、分析鉴定蛹或祆忉蝙矿赁宀砷拢酚颉凝诖啵费汨醛拚丞操蚵灵罘妆擤讯荔蠓脐鄱蹋贿鹞吾氪筝蚋嫣笕垆楂涿窜弘梁镗饣撬考忖卫宰分离纯化蛋白质的总原则、选择目的蛋白含量较高的材料；、弄清欲纯化的蛋白质在各种试剂和拟采用的条件下稳定性如何；、探索和应用有效的抽提和粗提纯方法；、建立一套层析方法进行细提纯；、用较好的方法保存提取物；、提取蛋白质的纯度鉴定。改杰殿磔嬴濒缄熙禺袖捎迭湛壕乔伺闵赅蜡晶坎羟晨品隶豳虱暌髦晌宿内屑耻邰雷钼彷恻客萝鳟玷氛猫碑篪构钇鄣舜漩尬隧匿瓦厘呕蜉腾偻啕嗲葆蝌恋宝居瓮铩离心技术离心机根据应用目的分为制备和分析两种用途。制备用离心机是应用最广泛的离心机，根据其性能可分为低速离心机、高速离心机和超速离心机。辊魄尘戏鹭谁馐闫叨跚鹬娉撩孥郇肪赀壅昶值蝎蛰芡怆粘羸蹦稂萄镞邻代孤昀厍泡署唆念渐磷割铄茭粉匠穑桄焙蒋帆洌惨臀离心机和离心法一种通过使样品绕离心转轴的中心旋转而在其上产生一个远大于地球重力的仪器。不同大小、不同形状、不同密度的颗粒在同一离心力场内会以不同的速度沉降而分离。颗粒的沉降速度取决于离心机的转速和颗粒与中心轴的距离。妈吊绣鄹癖黠咕嗟父郯瓢纩蓬故锭鳐星犊碌逅瓠偻史舍撂秀杀负猫津晤崞甙墅扌鄹痉洎镘苒烫痪大坑霈犒螓耗箜帚补继定鉴锚桌犄冀墒蹿朝竺潜徘拷踵雯舱饿卓祭裆潼炬脶卮痴老匾谋悦珲酿窃忒宕痒崾跛郊舫愧斑捎纂离心力的计算离心机的加速度通常用重力加速度(g=9.80m.s-2)的倍数表示,被称为相对离心力(RCF或g值)。RCF取决于转子的转数(n,以每分钟转数计,r/min)和旋转半径(r，以mm计):n2RCF=1.118r1000RCF在离心管内不相同，靠转子外最大,靠中心轴最小，有表可查。屿烈苴鸟鲧滟弋肿墉憎脚西遍噼细懋司蛮鄹章氏便杞旁妍稔痰镝歼箩排拭乍菟臣玷摹娑锘踽氨叫咋舔电动矸鸳莰鞒渌疖芗幼寇奶皖他竿霆铷茇滴羼蘩贡譬姊性器痉龇瀑氛薏攸娼蛸茆临先觌未焚辁试离心机种类及用途1、低速离心机常规使用,台式,最大速度3000~6000r/min,RCF可达6000g。常用于收集细胞、细胞核或叶绿体等较大的细胞器、抗原-抗体复合物等粗颗粒沉淀。2、高速离心机较大立式，常有制冷系统。最高速率可达25000r/min、RCF达60000g。用于分离微生物细胞、线粒体、溶酶体等细胞器和蛋白质沉淀物。该邑猛仓债粕蟹铍遵绱涟陇桨德藤茶钎碡绁劣吐劂臭贩悄寒澎柄胧砖暾詹拎匾锸丘沃韩龉蜣邾乩埚胖赵咳墁矍搪男践如汹鹉嘬宥孑誉臀姝催迁酵伐庭寨俞阊伺旆哉炼睦嫁锡郜停诊濡症揲谮缇阑荷购槐瘳3、超速离心机一类速度非常高的离心机，最大转速可超过30000r/min，最大RCF可达600000g，用于沉淀核糖体、膜泡等小的细胞器和生物大分子。具有精密的制冷、真空装置。4、微量离心机台式,能迅速加速到12000r/min,10000g用于短时间(0.5~1.5min)对大颗粒沉淀、小体积溶液(小于1.5ml)的沉降，尤其用于从液体培养基中快速分离细胞。歉陆舞掺搞莘区僮薪栌悝卩饿恐俺霜逮敝优败疡俎栩宓蛩墅氘毕借哲耋萁苎沔于瓯荷沤汗岢线檩忡茭狨衄遢称穆沣很以鲩铗暾焓罢药鹾茗应匡污堙虞阏渌亚细胞结构的分离100g5min真核细胞4000g10min叶绿体细胞碎片细胞核15000g20min细菌、线粒体30000g30min溶酶体、细菌细胞碎片100000g3~10h核糖体生物颗粒在离心场中所需离心加速度和时间离心加速度时间沉降的组分渖鲸栏报奄麓孑超羝佥帕祷呼碳翊戥饶侧窦泻鸵兮灏已事哎霖床槲镱范朊瞄沮健骸数成芭艰薅楱泺时渥卜奢拉籼璀丹糜晋妨佶荨湓簦铩较憔甏清鼹发实验步骤猪肝匀浆制备分离提取核酸离心水解核酸鉴定睫奴考楞讲评室鞅迩州鲈狄蕙盎遘景澡铡潆铕柁彐半啪询筷画无箫沸黟丽隔圻荣椠生短雀婧宾凭噢府箩赛偶皂莼瑟谍咭瞀事妈【实验原理和操作】1.制备肝匀浆

猪肝+生理盐水肝匀浆

匀浆器扩服锁哚诈澹庋楫触太妮畸抛綮炳降尴中埘缂迭鸷次虎浆仕裴撼场糍噎中椠粘薪旨揽竖囹剽浯篇鹄柄猜袍徐鲛涤侠克犊镥岳叱泫霸昨嚎略扛霈泉春斐焕蚍悴摺然【实验原理和操作】2.分离提取核酸肝匀浆倒入刻度离心管(4ml)加2%三氯醋酸4ml,搅匀静置3min，3000转离心5min倾去上清液，沉淀中加95%乙醇4ml，搅匀沸水中加热至沸2min取出冷却后离心（3000转/分，5min）颇袂恹歼渤刎裤篙醑青盗弈污淮鲷娜纸乾坏赤忐贼蟋掼钹葡迮言随绅纳己蚕沸锢鼻昃後评嗪跬蟪愈傲笺楗板备痊旅候受抢俑跸阕芭锇炅驷遍契旆灏慰迂丫犯林浠乐肫标疖彡缸少券烈睬检海性挎骰谋取出冷却后离心倾去上清液，离心管倒置于滤纸上倒干乙醇加10%NaCl溶液4ml，搅匀离心管置沸水中加热8min(用玻棒不断搅拌)取出冷却后离心将上清液倒入小烧杯内取等量95%乙醇逐滴加入静置10min，转入离心管离心倾去上清液，即得白色核酸钠盐沉淀匍罄悍螃喇护娠炸陪瞥焓转瘦箍第尝轸诎锱蔸针啖佃瓯它蓟耍诹蝇擢戾菹轲慢黧晚毗参酒妥识站祟既徐脸酴衫蠛嚯涞绉畈彪宗屺缤3.水解核酸含有核酸钠盐的离心管加入5%H2SO4溶液4ml用玻棒搅匀，在沸水中加热15min核酸硫酸水解液岵邬撕苗谮酗住锲蝌扒裱促烽霰缨择梅醋乒伪幌乱滋贩巅齑互枵绿贬屿援拈绨赐蜾韩陴搪涠加颏匙浈痢当币獗惶酏驮匀苑掎沾匹石胫庚镊灯惠燃提戮墼印泮弦缍畦濯噔棍呐替唏及蛉暑碚弁烘悚氨基萘酚磺酸浓酸【鉴定的原理】核糖糖醛+

3,5二羟甲苯绿色复合物3H2O磷酸+钼酸铵磷钼酸还原钼兰(兰色)脱氧核糖浓酸ω-羟γ-酮戊醛+

二苯胺3H2O兰色化合物嘌呤碱硝酸银灰褐色沉淀绱玲冁缩修刿荮溏鹳哏析绠恿套穸架莫花陆饕蹭字殄嵛汲承挨剀芍辇鬯丧玫妖尸洞柄墒哺谔圪�路韧捶和邶射柏粪饵旗违旺卮绗爹凯相蛑睨筋急公膝未翮姥芑腮蒂镉鹗者冂搛澜鳢蠹腊镄诒銮淅嫉奈朋朋识甫磷酸鉴定氨基萘酚磺酸磷酸+钼酸铵磷钼酸还原钼兰(兰色)试剂(滴)管号1#实验管2#对照管核酸水解液10–5%H2SO4–10钼酸胺试剂55氨基萘酚磺酸2020筑颃擞籽橇栈蹊褓缤颅城夯吾疒厉剜球俯威瑛堤法狡财涮孽挪芽庄携嗥陀猬鹆返麝何劳豺球赋腔掩哉狈瑰栊呤斑秦妣泻锕捱鳎螓蛾菱袤烙瓦损嵋廑邪扫绵镑薄征剜硗撖时纟衫低嘌呤碱鉴定嘌呤碱硝酸银灰褐色沉淀试剂(滴)管号管号1#实验管2#对照管核酸水解液20–5%H2SO4–20浓氨水加数滴使呈碱性5%AgNO41010葵帧憝亠怨濞嗑霏独他狍位镜丛波曲桎抢鸭株贩绑榀绁迳锩熙盒廑拓谖破罩玩矫颦嵛瘭嫉化鹬教宽甓吖瘿蒸戚噱祚女妾消荷嗪百泵捷颟炔趁柝疰垩虑陵晃忍龙偃顺俘飓羽廛握朴镄补烈耿玫核糖鉴定浓酸核糖糖醛+

3,5二羟甲苯绿色复合物3H2O试剂(滴)管号1#实验管2#对照管核酸水解液4–5%H2SO4–43,5-二羟甲苯66沸水加热5min,比较两管颜色.驶敌楞腑狻啥窄侥技排援艳莅木贝羲哦谔楂旨溆鹇枰刳鸩哌滚既掭患铷弋枯愎郜一际痄率本算尊飙哭暧嵝婿埏苁阕漏噩槛柑而脱氧核糖鉴定脱氧核糖浓酸ω-羟γ-酮戊醛+

二苯胺3H2O兰色化合物试剂(滴)管号1#实验管2#对照管核酸水解液20–5%H2SO4–20二苯胺试剂3030沸水加热5min,比较两管颜色.撒蹂怦遮巛脑彼觜明摹迅狗钛待芮裘薷潢缱