家和顺家脾胃水提物抗炎抗炎作用研究

家和顺家脾胃水提物抗炎抗炎作用研究

世家独裁菜msativi是指十字花科和独立煎剂科的独立煎剂。m，干燥成熟的种子。这是尼泊尔的传统药物之一。维尔维斯的药物被称为saurontertiz。据文献报道本品有扩张冠状动脉、解毒、理肺杀虫、广谱抗菌、利尿助阳、促进伤口愈合等作用。可行水消肿、镇咳平喘、健脾胃,用于治疗气管炎、消化不良、腹泻及伤口不愈等疾病,但其具体的有效成分及药效作用很少见报道。前期仅探讨了家独行菜子水浸液的抗实验性胃溃疡、促进溃疡愈合、抑制小肠运动及镇痛作用。本文对家独行菜子各组份进行初步的分离,探讨其水提物的镇咳、抗炎作用,并观察其水提物、醇提物的抑菌作用,以期为家独行菜子的进一步研究提供依据。1材料和机器1.1药物供试,供试药物动物:ICR小鼠60只(清洁级),♀♂兼用,体重(20±2)g,由新疆医科大学实验动物中心提供。受试药物:家独行菜子(SemenLepidiμmSativi)原植物药用种子部分,购于维吾尔药材市场。实验病菌:枯草芽孢杆菌(P63501)、大肠杆菌(P44102)、金黄色葡萄球菌(P26003)、铜绿假单孢菌(P10104),购于新疆医科大学菌种保存中心。1.2混悬液的配制联邦止咳露:深圳致君制药有限公司,批号070913。阿司匹林肠溶片:新疆华康药业有限责任公司,批号:070107,用1%阿拉伯胶配成混悬液,浓度为5mg·ml-1。头孢曲松钠钠:悦康药业集团有限公司,批号0705061。用注射用水配制成2μg·ml-1,1μg·ml-1。其他常用试剂均为国产分析纯。1.3循环水式反渗透水系统shb-iiiRE-52B旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);HFsafe-1200生物安全柜(上海申力科学仪器有限公司);常规手术用具等。2方法2.1工作原理法取原生药250g粉碎,依次加入以下溶剂:①石油醚:向原生药中加入石油醚500ml,超声提取30min,滤出滤液,滤渣再加入石油醚500ml重复提取,合并两次滤液,于旋转蒸发仪中(45℃,50r/min)浓缩,得成分Ⅰ(体积比为100∶7)。②乙醚:将①中滤渣加入乙醚500ml,超声提取30min,取滤液,于旋转蒸发仪中(30℃,50r/min)浓缩,得成分Ⅱ(体积比为100∶3)。③氯仿:将②中滤渣加入氯仿500ml,超声提取30min,取滤液,于旋转蒸发仪中(50℃,50r/min)浓缩,得成分Ⅲ(体积比为50∶27)。④丙酮:将③中滤渣加入丙酮500ml,超声提取30min,取滤液,于旋转蒸发仪中(45℃,50r/min)浓缩,得成分Ⅳ(体积比为100∶1)。⑤95%乙醇:将④中滤渣加入95%乙醇500ml,超声提取30min,取滤液,于旋转蒸发仪中(60℃,50r/min)浓缩,得成分Ⅴ(体积比为25∶1)。⑥甲醇:将⑤中滤渣加入甲醇500ml,超声提取30min,取滤液,于旋转蒸发仪中(55℃,50r/min)浓缩,得成分Ⅵ(体积比为50∶3)。⑦蒸馏水:将⑥中滤渣加入蒸馏水1000ml,超声提取30min,取滤液,于旋转蒸发仪中(78℃,50r/min)浓缩,得成分Ⅶ(体积比为100∶7)。2.2给药及大鼠一般情况ICR小鼠30只,♀♂各半,随机分成3组:NS组[0.2ml·(10g)-1]、联邦止咳露组[0.2ml·(10g)-1]及家独行菜子水提物组[0.1ml·(10g)-1]。每组10只,每日定时ig给药,连续7d。于末次给药1h后将小鼠置于1L玻璃钟罩内喷氨雾,观察记录各组小鼠咳嗽潜伏期(从放入罩内到第一次咳嗽的时间)以及1min内的咳嗽次数。结果见表1。2.3膨胀度测定和小鼠右耳片水肿抑制率测定ICR小鼠30只,♀♂各半,随机分成3组:NS组[0.2ml·(10g)-1]、阿斯匹林组[0.4ml·(10g)-1]及家独行菜子水提物组[0.1ml·(10g)-1]。每组10只,每日定时ig给药,连续7d。各组小鼠于末次给药1h后用乙醚麻醉,在右耳的前后两面涂布二甲苯作致炎剂(0.05ml/只)。4h后,将小鼠处死,剪下双耳用6mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片,称重,小鼠右耳片重量减去左耳片重即为肿胀度并计算肿胀抑制率。结果见表2。肿胀抑制率(%)=(NS组平均肿胀率-用药组平均肿胀率)/NS组平均肿胀率×100%。2.4家：时间-杀菌曲线取无菌装有LB液体培养基(8ml)的试管若干支,分为4组:即枯草芽孢杆菌组、大肠杆菌组、金黄色葡萄球菌组、铜绿假单孢菌组。每组中加入对应的实验病菌(100μl),每种实验病菌组再分5组,分别加入家独行菜子水提物(1ml/管)、乙醇提物(1ml/管)、甲醇提物(1ml/管)、头孢曲松(1ml/管,2μg·ml-1)及无菌水(对照组,1ml/管),每个加药试管设3个平行对照。将各组菌液置于37.8℃振荡培养(250r·min-1),分别于0,4,8,12,16,20h在波长600nm下测量各组菌液的吸光值(A)值。制作家独行菜子水提物和醇提物对4种实验菌的时间-杀菌曲线(KCs)。结果见图1～4。2.5抗抑菌剂的制备药敏试纸的制备:将6mm的药敏纸片,分别浸于家独行菜子水提物、甲醇提物、乙醇提物、头孢曲松(2μg·ml-1)、头孢曲松(1μg·ml-1)溶液中浸泡24h,干燥备用。平板法接种4种实验菌,将上述5种药敏试纸贴于各实验菌琼脂表面,置于37.8℃孵育16h后检测各平板的抑菌圈大小,观察其抑菌效果。结果见表3。2.6统计处理实验数据均以t检验进行统计学处理,分析实验结果。3结果3.1联邦躁露组与ns组输注后数减少的比较表1镇咳结果见表1。家独行菜子水提物组与NS组比较,咳嗽潜伏期延长、每分钟咳嗽次数减少(P<0.05);联邦止咳露组与NS组比较,有极显著统计学差异(P<0.01);结果显示家独行菜子水提物具有镇咳作用,可以延长由氨水所致的小鼠潜伏期,减少小鼠每分钟咳嗽次数,但与联邦止咳露相比,镇咳效果还有一定差距。3.2降低水肿率抗炎作用结果见表2。家独行菜子水提物组与NS组比较,能够抑制小鼠鼠耳肿胀,降低肿胀率(P<0.05);阿斯匹林组与NS组比较,有极显著统计学差异(P<0.01)。结果显示家独行菜子水提物对二甲苯所致小鼠鼠耳肿胀具有抑制作用,具有抗炎功效,但与非甾体类解热镇痛药阿司匹林相比,抑制效果还有一定的差距。3.3单个蔬菜中的水提取物时间和醇提取物时间的杀菌曲线kcs3.3.1家：菜子乙醇提物+乙醇提物对枯草芽孢杆菌的杀菌效果,家见图1。与头孢曲松和空白对照组相比,家独行菜子乙醇提物对枯草芽孢杆菌的杀菌效果较好,甲醇提物杀菌效果次之,水提物的杀菌效果较差。3.3.2对幽门杆菌的抗菌曲线kc见图2。与头孢曲松和空白对照组相比,家独行菜子甲醇提物对大肠杆菌的杀菌效果较好,乙醇醇提物杀菌效果次之,水提物的杀菌效果较差。3.3.3不同种类植物的杀菌效果见图3。与头孢曲松和空白对照组相比:家独行菜子乙醇提物对金黄色葡萄球菌的杀菌效果较好,甲醇提物杀菌效果次之,水提物的杀菌效果最差。3.3.4单胞铜绿假菌的杀菌曲线kec见图4。与头孢曲松和空白对照组相比,家独行菜子水提物、乙醇提物对铜绿假单胞菌的杀菌效果较好,甲醇提物的杀菌效果最差。3.4国内独特的蔬菜水提取物和醇提物的抗菌效果抑菌圈大小(见表3)。数据显示,家独行菜子水提物、乙醇提物和甲醇提物对4种实验菌均有抑制作用。但抑菌效果因菌因药而异。4家：水提物对二甲苯所致小鼠呼吸术后并发症的影响家独行菜子的具体有效成分及药效作用很少见报道,本实验室前期仅仅做了家独行菜子水浸液的有关抗实验性溃疡、抑制小肠蠕动和镇痛的研究。本文进一步用生药的提取方法对家独行菜子组份进行了初步的分离,对其水提物和醇提物进行了镇咳、抗炎及抑菌的研究。镇咳实验结果表明,家独行菜子水提物在一定剂量下对实验动物具有明显镇咳作用,能够明显的延长咳嗽的潜伏期,可减少每分钟咳嗽次数。结果显示,水提物有解除平滑肌痉挛,扩张气管平滑肌作用。抗炎实验结果表明家独行菜子水提物对二甲苯所致小鼠鼠耳肿胀具有明显的抑制作用,能降低小鼠耳肿胀度,提示其对急性非特异性炎症具有抑制作用。这可能与其存在具有局部镇痛、消炎作用的苷类等有效成分有关,其具体有效成分及作用机理有待进一步深入研究。抑菌实验表明,家独行菜子水提物、乙醇提物及甲醇提物对4种实验菌均有抑制作用,其KCs曲线和抑菌圈因菌而异,各有不同。本文仅就一种浓度进行了抑菌实验,但其最佳抑菌浓度还需进一步进行探