消化呼吸生理

实验二十反刍动物腮腺分泌的观察

[目的]观察反刍动物唾液分泌特征及其饲喂的影响。

[原理]反刍动物的腮腺是连续性分泌唾液，液体呈碱性，含较多的尿素，分泌量很大，在进食和反刍时分泌加强；颌下腺与舌下腺仅在进食时分泌。唾液腺的分泌主要受植物性神经支配，拟胆碱药物（如：毛果云香碱）及胆碱能受体阻断剂（如：阿托品）对唾液分泌分别具有促进和抑制作用。

[实验对象]山羊

[实验材料]消毒医药塑料管（内径1mm，外径2mm），手术器械及其手术辅助材料和药品，固定架，计算机生物信号采集系统或生理记录仪，计滴器，刻度试管，青草，干草，精料。

[实验方法及步骤]

1．实验准备—山羊腮腺瘘管的制备

①山羊腮腺的局部解剖特点：腮腺呈三角形，位于下颌支和寰椎翼之间。上部为部分颞肌，外面为腮腺筋膜，皮肌和腮耳肌等覆盖，颈静脉斜着经过它的中部，颌外静脉横过它的下缘，颈动脉的终部在它的内面。腮腺导管在颌外静脉上约2-3cm处离开腺体，横过胸头肌腱的外面前行，过翼内肌内面，绕过下颌角的血管切迹，向上至第3上臼齿处对侧颊粘膜开口于腔内。

②手术操作过程：动物侧卧固定，剃去颊部的毛，用0.3%普鲁卡因局部浸润麻醉；然后由咬肌前端向内眼角方向切开皮肤约2-3cm，分开创口，在颜面静脉后方找出腮腺导管，仔细分离，注意切勿损伤腮腺神经。在腮腺导管下方穿三条丝线，纵行切开导管壁约5mm，分别于管的两端插入准备好的大小适合的塑料细管（该塑料管的前段事先扎有丝线），用两边的两条丝线分别结扎插入腮腺导管内的两条塑料细管，再用中间的丝线扎紧两条塑料细管及腮腺导管，然后将塑料管上的丝线与这些丝线再分别结扎，这样可防止滑脱。两条塑料细管外端之间，再套上一较粗的塑料管和橡皮管形成体外吻合。这时唾液将由近腺体的细管流出，经吻合管和远端导管流入口腔。缝合皮肤，待创口愈合后，即可进行实验。

2．仪器的连接

将计滴器插入计算机生物采集系统或生理记录仪输入端，进行测定；也可利用秒表直接计滴。

3．实验项目

①将装有腮腺瘘管的动物站立在固定架上，拆开体外吻合管，装置好计滴器，观察唾液流出10-15min，记录3-5min内唾液分泌的滴数和份量。

②给动物分别喂以青草、干草、混合饲料、水，观察和记录唾液分泌的变化情况。

③以1%醋酸溶液1-2滴注入羊口腔内，观察对唾液分泌的影响。

④如实验羊装有瘤胃瘘管，经瘘管向瘤胃内注入3%醋酸10mL，对唾液分泌有何影响？

⑤待唾液分泌恢复至正常水平时，皮下注射0.1%毛果芸香碱0.5-1.0mL，持续观察约30min，唾液分泌是否显著增加？

⑥唾液分泌恢复至原水平时，给动物皮下注射1%阿托品1mL，唾液分泌是否显著减少。

[注意事项]实验前做好腮腺瘘管的制备及护理工作。实验中应保持周围环境的安静，减少对动物的惊扰。每个测定项目完成后都应等待动物唾液分泌有所恢复，记录同期对照水平，然后再进行新的实验测定。[思考题]为什么反刍动物的腮腺分泌是连续的，而单胃动物的腮腺分泌是间断的？反刍动物的腮腺分泌活动会受到哪些因素的影响？实验二十一反刍活动的观察

[目的]观察反刍的发生与抑制，了解其产生的机理。

[原理]反刍为一复杂的反射动作，饲料的粗糙部分机械刺激网胃、瘤胃前庭与食管沟的粘膜，引起反刍；而饲料充满瓣胃与皱胃，则刺激压力感受器而抑制反刍。

[实验对象]羊或牛

[实验材料]咀嚼描记器，计算机生物信号采集系统或生理记录仪，呼吸换能器，连有橡皮管的气球，瘤胃瘘管，手术器械。

[实验方法及步骤]

1．实验准备—瘤胃瘘管手术操作

实验动物瘤胃瘘管手术:羊全身麻醉后，右侧卧固定在手术台上；牛腰椎旁传导麻醉，站立手术。按外科手术要求常规处理术部，然后无菌手术操作，在左肋部肌窝处沿最后肋骨平行切开皮肤长约5-6厘米；切断皮下肌、结缔组织和斜腹肌，分离纵腹肌，切开腹膜。以左手提起瘤胃壁，与皮肤作4-6处临时缝合，并在胃壁浆膜层作两道荷包缝合线。在缝合线正中进行切口。安置装有塞子的瘤胃瘘管和垫片，收紧第一道荷包线后，重新进行术部消毒，再收紧第二道荷包缝合线，拆去临时缝合线。进行切口的关闭缝合，创口分两层缝合，内层包括腹膜与斜肌层，连续缝合，外层以纽扣状或结节缝合皮肤与皮下肌层。

创口边缘涂以碘酊与凡士林。术后一周拆线，即可进行实验。

2．实验装置

令动物站立在固定架上，启开瘘管塞；将橡皮球经瘘管纳入瘤胃，吹入适量气体，通过呼吸换能器与计算机生物信号采集系统或生理记录仪连接；安装好咀嚼描记器，借空气传导装置，能记录颊部运动，即可开始实验。

3．实验项目

①记录瘤胃运动曲线，并进行分析。

②用右手经瘘孔向前下方触摸网胃粘膜，观察有否出现反刍？记录反刍情况，注意食团的咀嚼次数。如果用羊做实验，瘘管较小不能用手伸入，可用一根硬橡皮管，通过瘘管向网胃和瘤胃前庭方向连续刺激，可以引起反刍反应。

③待动物静止后，刺激食管沟粘膜，动物有何反应？

④正在反刍期间，吹胀放置在瓣胃内的气球，能否抑制反刍？

[注意事项]在瘤胃瘘管安装手术前，应禁食24h；手术过程中，应严格按照无菌手术规程进行，正确选择瘤胃瘘管的安装部位。应检查气球与橡皮管是否漏气。实验环境保持安静，避免各种外界因素对动物的惊扰。[思考题]反刍对瘤胃消化有何生理学作用？周期性反刍是如何发生的？哪些因素会影响反刍活动？实验二十二反刍动物咀嚼与瘤胃运动的描记

[目的]观察反刍动物的咀嚼与瘤胃运动情况，同时掌握其记录方法。

[原理]反刍动物的瘤胃体积很大，占据腹腔左侧的极大部分，当瘤胃运动时，瘤胃内发生压力变化，可用装有瘤胃瘘管的动物将气球经瘘管放入瘤胃内，通过呼吸换能器与计算机生物信号采集系统或生理记录仪连接进行描记；也可利用张力换能器与瘤胃上皮直接连接，通过计算机生物信号采集系统或二道生理记录仪将运动的情况描记出来。

在动物颊部笼头上安置一咀嚼描记器，借空气传导装置，能记录颊部运动。

[实验对象]装有瘤胃瘘管的羊或牛

[实验材料]固定架，瘤胃运动描记装置，咀嚼描记器，橡皮管，计算机生物信号采集系统或生理记录仪。

[实验方法及步骤]

1．实验准备

①方法1：将实验羊或牛保定于固定架上，启开瘘管塞；将橡皮球经瘘管塞入瘤胃，以便于吹气；橡皮管联接呼吸换能器，通过计算机生物信号采集系统或生理记录仪记录。

②方法2：活体瘤胃运动直接测定装置及安装方法

将实验羊或牛保定于固定架上，松开瘤胃瘘管，以绳系住推入瘤胃内，用手轻拉瘤胃壁背囊处上皮翻至瘘口，在其上缝合一针结扎固定缝线的一端，瘤胃壁复位后将线的另一端穿过瘤胃瘘管，通过0.1kgf/cm2张力换能器联接至计算机生物信号采集系统或生理记录仪输入端，将瘘管复位并固定张力换能器于瘘管支架上，即可进行活体瘤胃运动测定。

测定参数建议为，时间常数：DC、滤波：1K、灵敏度：0.1mv/cm、走纸速度：25mm/min、标记：10S。可用100g砝码校正肌肉张力，即：将50g砝码悬挂于0.1kgf/cm2张力换能器上，仪器所显示的电压相等于100g瘤胃平滑肌收缩力。

③在动物颊部笼头上安置一咀嚼描记器，借空气传导装置，能记录颊部运动，然后开始实验。

2．观察项目

①记录正常瘤胃运动10分钟，观察蠕动次数，分布情况及收缩强度。

②喂以干草5分钟，观察瘤胃运动有何变化？

③静止时喂以清水，有否影响瘤胃运动。

④反刍时瘤胃运动情况。

[注意事项]

1．采用方法1时，应检查橡皮球及橡皮管等是否漏气。

2．采用方法2时，应调整好张力换能器前负荷，调整好二道生理记录仪各参数。

3．咀嚼描记器应与所测定部位的皮肤密切接触，但也不宜太紧，以免动物有不舒服感而影响实验的正常进行。

[思考题]瘤胃运动是怎样进行的？对瘤胃消化有何生理学意义？哪些因素会影响瘤胃运动？咀嚼与瘤胃运动有何相关联系？实验二十三瘤胃内容物在显微镜下的观察

[目的]了解饲料在瘤胃内的变化及纤毛虫的活动情况

[原理]饲料在瘤胃微生物的作用下发生很大的变化。瘤胃微生物包括纤毛虫和细菌，它们将纤维素、淀粉及糖类发酵并产生挥发性脂肪酸等，同时分解植物性蛋白质合成自身的蛋白质。

[实验对象]牛或羊

[实验材料]显微镜，载玻片，盖玻片，玻皿，注射器，滴管，甘油碘溶液。

[实验方法及步骤]

1．从瘤胃瘘管或用食管导管抽取瘤胃内容物约100g，放入玻皿内，观察其色泽、气味等性状。

2．用滴管吸取瘤胃内容物少许，滴一滴在载玻片上，覆以盖玻片，先以低倍显微镜下检查，继而改用中倍镜观察。

3．找出淀粉颗粒及残缺纤维片，注意观察纤毛虫的运动。

4．加一滴甘油碘溶液于载玻片，观察经染色后的变化，注意纤毛虫体内及饲料的淀粉颗粒呈蓝黑色。

附甘油碘溶液配置：

福尔马林生理盐水2份，卢哥（Lugol）氏碘液5份（碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水300ml），30%甘油3份，混合而成。

[注意事项]

纤毛虫对温度很敏感，观察纤毛虫活动应在适宜的室温或保温条件下进行。

[思考题]

1．瘤胃内纤毛虫主要分为哪几类？各有何形态学特征？

2．瘤胃纤毛虫对瘤胃消化起哪些作用？实验二十五猪胃液的分泌

[目的]观察胃液分泌情况及了解其神经体液调节。

[原理]胃液分泌受神经及体液因素调节，进食及食物对胃壁的机械刺激，通过神经反射，以及食物与胃黏膜作用产生激素—促胃液素兴奋胃腺的分泌活动。

[实验对象]猪

[材料与设备]手术器械，胃瘘管（大小型各一），计滴器，计算机生物信号采集系统或生理记录仪，固定架，量筒，气球，橡皮管，酸度计或广泛pH试纸，饲料，组织胺。

[实验方法及步骤]

1．实验准备—隔离小胃的手术操作

要获得纯粹胃液，可以制备隔离小胃。装置猪隔离小胃的方法有多种，海氏小胃与大胃完全分离，大小胃之间仅保持血液联系而不存在神经联系，虽能从小胃获得纯粹胃液，但并不能反映大胃内消化活动的情况。经典的巴氏小胃，大小胃之间基本上保持血液和神经的联系，不过手术复杂。下面介绍一个简单易做，效果颇好的改良巴氏小胃方法。

按照常规将猪麻醉仰卧保定并切开腹腔后，拽出猪胃一半于腹腔外，在胃体部欲制备隔离小胃的部位，用两把胃钳平行夹住胃壁，中间相距约1.5-2.0cm。在两胃钳中间切开一侧胃壁及对侧胃壁的黏膜，沿黏膜切口稍作剥离，然后先缝合小胃两侧的黏膜切口，取下小胃的胃钳。再缝合大胃两侧的黏膜切口，取下大胃的胃钳，于是便形成了互不相通的两胃。拽一小块大网膜夹在大小胃之间，然后再缝合切开的胃壁肌层（包括浆膜）。在大小胃分别安置瘘管，并通过腹壁固定。术后第二天大小胃的瘘管可在体外接桥，在不进行实验时小胃分泌的胃液经体外可流入大胃，以维持大胃内的正常消化和机能健康。实验时打开接桥，可收集小胃分泌的纯粹胃液，进行各种研究分析。用这种方法制备的隔离小胃，只有黏膜与大胃完全隔开，而保留大部分的肌肉和浆膜正常联接，大小胃的神经联系基本上未受影响，因此，小胃的活动能较真实地反映大胃内消化活动的情况。

2．仪器连接

观察胃液分泌时，可将计滴器与计算机生物信号采集系统或生理记录仪输入端相联。

3．实验项目

①胃液的自动性分泌：动物静立于固定架上，打开接桥并塞上大胃瘘管塞子；用量筒（或刻度管）收集小胃流出的胃液，每5min计量一次，并测定胃液酸度，连续进行约20min。

②饲喂的影响：以饲料逗引，胃液分泌有无变化？喂料历时5-10min，观察胃液分泌量与性状的变化，并持续观察1-2h。

③待胃液分泌基本恢复正常水平时，打开大胃瘘管塞子，放入连有橡皮管的气球，吹胀气球（注入500-1000ml空气），对大胃壁进行压力刺激，观察小胃分泌有无变化？

④待胃液分泌正常后，静脉（或皮下）注射组织胺0.1mg，观察经过多少时间后，胃液分泌显著增多。

[注意事项]

1．选择健康的猪，体重一般在30-40斤为宜。

2．术前禁食18-24h。

3．术后小胃瘘管不要用塞子（大胃瘘管须塞住），让其内容物流出，第二天检查是否有血块堵塞，护理后与大胃瘘管作体外接桥，精心护理，每天拆开接桥清洗一次，以防堵塞。

4．因大小胃瘘管的管径不同，接桥套管可用相应直径的大小管配之，以耐酸橡皮管为宜。

[思考题]单胃胃腺能分泌哪几种消化液？各有何生理作用特点？影响胃酸分泌的因素有哪些？说明其分泌的原理。组织胺、氨甲酰胆碱、阿托品对胃液分泌有什么影响？试说明其作用机制。实验二十六胃肠运动的直接观察

[目的]观察动物在麻醉状态下胃肠的运动情况及其影响因素。

[原理]胃肠肌肉属于平滑肌，所以胃肠道具有平滑肌运动的特性，由于胃肠道平滑肌结构不同，因此胃运动呈蠕动及紧张性收缩；而肠运动的主要方式为蠕动、分节运动及摆动。在有机体中，其运动主要受神经系统支配（受迷走神经和内脏神经调节）。化学性刺激也影响胃肠道运动。

[实验对象]兔

[材料与设备]手术台，戊巴比妥钠，手术器械，注射器，生理多用仪或生理电刺激器，保护电极，丝线，生理盐水，电炉。

[实验方法及步骤]

1．实验操作

以戊巴比妥钠溶液静脉注射，使家兔麻醉。将动物仰卧固定于手术台上，剪去颈部与腹部被毛；然后自颈部中间将皮肤纵行切开，细心分开肌肉组织，在气管一侧找到颈动脉。与颈动脉平行共有三条神经（迷走神经、减压神经、交感神经），三者都很细，其中最粗一条即为迷走神经。小心地将迷走神经分离，并于其下穿一提线，以备随时刺激之用。

另从腹部中线剖开腹腔，并将腹腔中脏器推至右侧，然后在左侧肾上腺附近找出内脏神经，其下亦穿一提线。

手术完毕后，将兔体腹部创口两侧皮肤用四把止血钳拉起，形成皮兜，敞开腹腔，充满37℃生理盐水，以便于观察。

2．实验项目

（1）胃肠的正常运动情况：胃肠有无运动？各有何种运动（用文字或图记下）？频率如何？

（2）神经因素的影响：

①刺激一侧迷走神经离中断，胃肠运动有何变化？

②刺激内脏神经，胃肠运动有何变化？

③切断内脏神经，胃肠运动有何变化？

（3）机械性因素的影响（肠肌反射）：以镊子轻夹肠的任何一处，观察有何现象发生？

[注意事项]在实验前2-3h时将动物喂饱则效果较好。实验过程中尽量减少对胃肠平滑肌的机械损伤，保持应有的兴奋性。[思考题]内脏大神经在腹腔中的解剖位置有何特征？小肠运动主要有哪几种形式？胃肠运动受哪些因素影响？实验二十七离体肠段运动的描记

[目的]观察在离体情况下肠的运动情况以及某些因素对肠运动的影响。

[原理]肠平滑肌具有自动性节律性收缩的特性，并且受肠壁内神经从与外来植物性神经的支配。离体肠段虽然失去外来神经的支配，但在适宜的条件下，仍能保持平滑肌收缩的特性及肠壁神经丛的作用。离体肠段运动的装置，还可以用来研究各种化学因素对平滑肌的影响。

[实验对象]兔

[实验材料]离体器官测定仪、张力换能器，计算机生物信号采集系统或生理记录仪，丝线、0.1%肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、台氏生理盐溶液、手术器械。

[实验方法及步骤]

1．实验准备取一只兔子，以手抓住后腿使头下垂，用木棒猛击后脑部致死。然后沿着腹白线迅速剖开腹腔，取出全部小肠放入冷的台氏液中，以降低代谢和氧耗量，充分洗去肠内容物，切取3-4cm的肠段（十二指肠或空肠），用缝针在肠壁之两端各穿上一条丝线，一端固定于平滑肌肌槽的通气管上，另一端通过张力换能器与计算机生物信号采集系统输入端连接。

平滑肌肌槽内台氏液的温度为38-39℃，并不断地通气至台氏溶液中。离体肠段的运动有时不立即开始，可能要经过10-30min才开始运动。

2．仪器连接将离体器官测定仪上的张力换能器与计算机生物信号采集系统或生理记录仪的输入端相联。

3．实验项目

①记录离体肠段自动性收缩5min。

②温度对肠运动的影响：逐渐降低台氏液的温度至30℃，观察肠段运动有否改变？

③温度恢复正常水平后，加入0.1%肾上腺素数滴于平滑肌肌槽内，观察对肠段运动的影响。然后用台氏溶液（38-39℃）冲洗。

④待肠段运动恢复至原来情况时，加0.01%乙酰胆碱数滴，这时肠平滑肌有何反应？

[注意事项]实验兔先禁食24h，在实验前一小时喂给饲料，可提高小肠平滑肌兴奋性。敲击实验兔延髓致死后，应立即剖开腹腔取出十二指肠肠段，放入冷的台氏液中，以降低代谢和氧耗量，然后取两段小肠放入离体器官测定仪中，维持39℃，适度充氧，可保持小肠较好的兴奋性。3、应使用新鲜的台氏液进行小肠体外实验。

[思考题]离体小肠的运动有何特点？影响小肠运动的因素有哪些？实验二十八胆汁和胰液的分泌

[目的]观察胆汁和胰液的分泌，了解胆汁和胰液分泌的神经体液因素调节原理。

[原理]动物的胰液和胆汁分泌都受神经体液因素的调节。促进分泌的神经纤维主要存在于迷走神经内，内脏神经也含有少量这类纤维。在小肠黏膜内产生的促胰液素，胆囊收缩素-促胰酶素，促胃液素是促进胆汁和胰液分泌的主要体液因素。在正常情况下，狗的胆汁连续不断地由肝脏生成，不过仅在进食等条件下胰液和胆汁才输入十二指肠。而猪、牛、羊等动物的胰液和胆汁不断生成和输入十二指肠内。

[实验对象]兔或狗或猪

[实验材料]乙醚，氯醛糖（或戊巴比妥钠，氨基甲酸乙酯），手术台，手术器械，促胰液素，0.4%盐酸，阿托品，量筒，塑料插管，计滴器，计算机生物信号采集系统或生理记录仪。

[实验方法与步骤]

1．手术操作

如用兔实验，可用戊巴比妥钠或氨基甲酸乙酯静脉注射麻醉。剖开腹腔找出十二指肠后，在距幽门约30—40cm处提起小肠对着光线可以找到胰导管。在胰导管和十二指肠处细心分离胰导管约0.6—0.8cm，于其下穿以丝线；在靠近十二指肠端剪一小孔，插入充满生理盐水的医用塑料管，结扎丝线。然后在十二指肠起始部找出总胆管，也同样插入塑料管用丝线结扎，固定后可进行实验。

狗用氯醛糖和乙醚（或戊巴比妥钠）麻醉以后，仰卧固定于手术台上，剪去其颈部被毛，然后切开颈部皮肤，分离肌肉组织，找出并切开气管，装上气管套管。找出两侧迷走交感神经干，穿以生理盐水浸湿的丝线，以备以后切断和刺激迷走神经用。颈部手术完毕后，以温湿纱布覆盖。

在狗的后肢大腿内侧面，切开皮肤，找出股静脉，插入塑料管，连以输液装置。最后于狗的腹部中线切开皮肤，剖开腹腔后，翻开网膜，找出十二指肠，其旁即为胰腺。在胰尾部之上1—3cm处，细心分离（注意此处血管较多，易出血），找出胰导管，于其下穿过丝线后，剪破之，插入充满生理盐水的塑料管，用线缚结。此外，找出总胆管，也插入塑料管，并将两套管游离端引置于腹外，接以电动计滴器，以备记录之用。作完腹部手术后，应以止血钳夹拢创口皮肤，上覆温热湿纱布，以避免实验动物大量散热，引起不良后果。

如用猪作为实验动物，切开颈部皮肤，沿气管两侧找出最粗的神经即为迷走神经。引出胰导管的手术也有改变：使猪左侧卧，剪去右侧腹部被毛，在倒数第三肋骨处，切开皮肤，分离肌肉。将倒数第三肋骨下端用骨剪切除一段，长约3cm。然后剖开腹膜，找出十二指肠。在胰尾与十二指肠相连处，就可找到胰导管。插管的方法与狗相同。总胆管紧靠幽门处，也以同样方法插入塑料管。

2．仪器连接

将计滴器与计算机生物信号采集系统或生理记录仪输入端相连，或使用秒表直接计数。

3．实验项目

（1）胰液和胆汁的自动分泌：记数胰液和胆汁在不予刺激情况下每分钟分泌滴数，连续5—10min，并计算其每分钟平均滴数。

（2）体液性（或化学性）因素影响下的分泌：

①注射稀盐酸的影响：向十二指肠内注射30—50mL（兔为20mL）0.4%盐酸（37℃），在5—10min内有无反应？以后记数每分钟胰液和胆汁的滴数，直至恢复正常为止（约经10—20min）。

②注射毛果芸香碱的影响：在股静脉注入0.1%毛果芸香碱（匹鲁卡品）1-2mL（兔0.5-1mL皮下注射），胰液