《临床微生物学检验实验》

《临床微生物学检验实验》（供四年制医学检验技术专业（临床检验方向）使用）教学大纲实验教学管理中心基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室2021年10月前言基本信息课程名称：临床检验微生物学实验学时学分：共64学时，4学分适用专业：四年制医学检验技术先修课程：临床检验微生物学二、课程简介《临床微生物学检验实验》是在检验实验医学领域中应用的一门重要学科，在医学基础研究、临床诊断及研究中起着重要作用，也是致力于从事医院检出工作的医学检验系专业学生的一门重要的专业实验课。近年来，随着全球公共卫生事件的不断发生，新的传染病的流行，微生物学检验受到极大重视。通过《临床微生物学检验实验》，要求学生加深对实验原理的理解，建立生物安全的理念，无菌观念，掌握无菌操作的基本技术，常见临床微生物检验的基本技术，了解国家生物安全的相关政策和微生物学检验方法的进展，学会自主分析试验结果。培养学生的动手能力、分析及解决实际问题的能力和创新的思维，为毕业后从事临床微生物学检验工作打下良好的基础。三、课程目标1.思想道德与职业素质目标通过本课程学习，培养学生尊重科学、实事求是、热爱医学事业、不惧艰苦、求知务实的探索精神和为医学健康服务的献身精神和良好的医学职业素养及高尚的思想品德。2.知识目标通过本课程的学习，使学生掌握原临床微生物的基本特点，熟悉生物安全规则，熟悉无菌操作技术，根据所学的临床微生物学实验知识应用于临床微生物检查工作。3.技能目标通过本课程的学习，掌握临床生物学实验特有的基本操作技术，最终达到培养学生理论联系实际、基础联系临床的思维能力，并具有自主学习能力，为后续的临床检验工作打下良好的基础。四、教学要求根据课程教学大纲及目标，确保课程教学内容、教学过程（环节）、知识与能力目标的达成，同时，对学生自主学习能力进行培养。五、考核方式课程考试方式采用形成性评价方式，一般为平时成绩30%，期末成绩70%。平时成绩包括考勤、平时作业、课堂表现、操作考核、实验报告等。参与人（排名不分先后）：张光媛，邓西川，陈婷婷，刘佳执笔人（排名不分先后）：张光媛审定人：何永林教材、教辅用书与参考书目一、教材选用教材为楼永良《临床微生物学检验技术实验指导》，人民卫生出版社，2015.该教材是为本课程量身定制，完全符合本课程需要。二、教辅用书及参考书目1.刘运德，楼永良.《临床微生物学检验技术》，人民卫生出版社，2015.2.陈东科，孙长贵.《实用临床微生物学检验与图谱》,人民卫生出版社，2011.3.周庭银，倪语星，胡继红，苏建荣，徐应春等.《临床微生物标准化操作》（ISO15189认可指导书）第三版，上海科技出版社，2015.目录实验一细菌基础培养基的制备……7实验二细菌培养的接种方法………7实验三细菌培养物的观察…………8实验四真菌的检验…………………8实验五细菌的药敏试验…………9实验六病原性球菌的检验…………10实验七分枝杆菌的检验……………11实验八肠道杆菌的检验……………11实验九非发酵革兰阴性菌的检验…………………12实验十尿液标本的细菌学检查……13实验十一血液标本的细菌学检查…………………14实验十二临床标本的细菌学检验实验设计………15实验十三粪便标本的细菌学检查…………………15教学时数分配表（共64学时）实验序号实验题目实验学时实验类型实验一细菌基础培养基的制备3基本方法实验二细菌的接种方法3基本方法实验三细菌培养物的观察2基本方法实验四真菌的检验2验证型实验五细菌的药敏试验6综合型实验六病原性球菌的检验6综合型实验七分枝杆菌的检验2综合型实验八肠道杆菌的检验8综合型实验九非发酵革兰阴性菌的检验8综合型实验十尿液标本的细菌学检查8综合型实验十一血液标本的细菌学检查6综合型实验十一临床标本的细菌学检查讨论2综合型实验十三粪便标本的细菌学检查8综合型合计64实验一细菌基础培养基的制备【实验类型】基本实验方法【目的要求】1.掌握细菌基础培养基制备所需器材的准备和灭菌；2.掌握细菌基础培养基制备的方法和技巧。【实验学时】3学时【实验内容】1．根据学生数量分组，在烧杯内融化培养基粉末，并加入适量琼脂分别制作：肉膏汤培养基、半固体培养基、琼脂斜面培养基、普通琼脂培养基（制备两瓶，一瓶用于下次血平板制备，一瓶用于普通平板制备）。2．倾倒制备肉膏汤管、半固体管、琼脂斜面管。普通琼脂培养基倾倒盐水瓶。3.包装完毕，将各培养基在高压蒸汽灭菌器内消毒灭菌。备注：每组做一种培养基；每人需肉膏汤培养基、半固体培养基各1支（2ml），普通琼脂斜面1支（3ml），普通琼脂固体培养基20ml，用于后续实验。【实验分组】2-4人/组实验二细菌的接种方法【实验类型】基本实验方法【目的要求】掌握细菌在液体培养基、半固体培养基、琼脂斜面、普通琼脂平板上的接种方法。【实验学时】3学时【实验内容】1．录像：细菌的人工培养2.练习平板分区划线接种：空白琼脂练习3．制备普通琼脂平板(小组作)，用自制的液体培养基、半固体培养基、琼脂斜面、普通琼脂平板分别接种大肠杆菌，枯草杆菌。4.将培养基放于37℃孵箱孵育18-24H。备注：每实验组接种一种菌。【实验分组】2-4人/组实验三细菌培养物的观察【实验类型】基本实验方法【目的要求】1.掌握细菌在各种培养基上/中的生长现象，细菌在琼脂平板上的菌落的特点；2.掌握革兰染色方法；3.掌握辅助判定细菌染色性的方法(拉丝实验)；【实验学时】2学时【实验内容】平板、斜面、液体、半固体等培养物的观察，记录。培养物的革兰染色镜检。拉丝实验：3%KOH与细菌混合同时接种环拉丝。【实验分组】2-4人/组实验四真菌检验【实验类型】经典验证型【目的要求】掌握真菌三种菌落形态；掌握新生隐球菌、白假丝酵母菌的形态特征；掌握皮肤真菌的形态特征。【实验学时】3学时【实验内容】录像：真菌的检验三种真菌菌落形态观察（示教）新型隐球菌墨汁染色图片形态观察（示教）白假丝酵母菌形态观察（示教）霉菌涂片观察：直接压片法，高倍镜观察真菌孢子和菌丝。皮肤真菌的检察（小组作）。【实验分组】2-4人/组实验五细菌的药敏试验【实验类型】综合型实验【目的要求】掌握细菌药物敏感性试验K-B法和微孔板稀释法的操作方法和结果判断。熟悉细菌药物敏感性试验的方法和临床意义；熟悉麦氏比浊管的使用方法了解药敏试验的质量控制和新方法。【实验学时】共6学时二次课，3学时与3学时【实验内容】麦氏比浊法制备0.5麦氏浓度的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌菌液。K-B法测定分别测定青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星四种抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的药物敏感性。微孔稀释法测定庆大霉素对大肠埃希菌的MIC。微孔稀释法测定青霉素对金葡菌的MIC。讨论药敏实验的质量控制和新方法。【实验分组】2-4人/组实验六病原性球菌的检验【实验类型】综合型实验【目的要求】熟悉病原性球菌的分离鉴定程序及临床意义；掌握血琼脂平板的制备方法；掌握3种葡萄球菌、草绿色链球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌、淋球菌的形态特点和鉴定方法；熟悉鉴定细菌的动物实验。【实验学时】共6学时二次课，3学时与3学时【实验内容】第一次实验1.录像：病原性球菌2.制备血琼脂平板（小组作,每人一个血平板）3.空白琼脂练习分区划线。4.金葡、表葡、腐葡、草绿色链球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌血琼脂平板分区划线，培养。肺炎链球菌Optochin敏感试验5淋球菌形态特点观察（示教片）第二次试验1细菌菌落观察，记录。2.培养物涂片革兰染色显微镜观察细菌形态排列和染色性3.培养物生化试验：触酶试验(玻片法)，凝固酶实验（玻片法)，胆汁溶菌试验（平板法）4.葡萄球菌检验方法讨论。【实验分组】2-4人/组实验七分枝杆菌的检验【实验类型】综合型实验【目的要求】掌握结核分枝杆菌的形态与染色性特征；掌握结核分枝杆菌的菌落特征；掌握肺结核患者痰标本抗酸染色检查的方法及临床意义。【实验学时】2学时【实验内容】1.录像：结核病的防治2.肺结核患者痰标本抗酸染色镜检3.热触酶实验：浓细菌悬液置于68℃水浴20分钟，然后再加H2O2。非结核分枝杆菌为阳性，有气泡产生。我增加了一个热触酶实验，不知可否。我增加了一个热触酶实验，不知可否。4.结核分枝杆菌菌落形态观察（示教）【实验分组】2-4人/组实验八肠道杆菌的检验【实验类型】综合型实验【目的要求】1.熟悉肠道杆菌的分离鉴定程序及临床意义；2.掌握肠道杆菌的生化反应特点和数值鉴定方法；3.掌握鉴定肠道杆菌的生化反应试验和血清学试验的操作方法和结果分析。【实验学时】共8学时三次课，3+3+2学时【实验内容】第一次实验1.录像：肠道杆菌2.革兰染色观察细菌形态排列染色性。三节课，我增加了革兰染色的内容三节课，我增加了革兰染色的内容3.制备Mac琼脂平板，SS琼脂平板。每人倒平板。4.空白琼脂练习分区划线。4.大肠埃希菌、变形杆菌接种Mac琼脂平板；乙型副伤寒沙门菌、福氏志贺菌接种SS琼脂平板第二次实验1.细菌培养后观察菌落形态；2.培养物涂片革兰染色显微镜观察细菌形态排列和染色性；3.培养物氧化酶试验，KIA、MIU（2人一套），微量生化管接种第三次实验1.观察试验结果，查编码手册鉴定；2.沙门菌及志贺菌的血清学鉴定3.下结论，练习出实验报告【实验分组】2-4人/组实验九非发酵革兰阴性菌的检验【实验类型】综合型实验【目的要求】1.熟悉非发酵革兰阴性菌的分离鉴定程序及临床意义；2.掌握非发酵革兰阴性菌的形态、生化反应特点和数值鉴定方法；3.掌握鉴定非发酵革兰阴性菌生化反应试验的操作方法和结果分析。【实验学时】共8学时三次课，3+3+2学时【实验内容】第一次实验1.倒普通琼脂平板，每人一个。2.铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和鲍曼不动杆菌增加鲍曼不动杆菌接种普通琼脂平板。增加鲍曼不动杆菌第二次实验1.菌落形态观察2培养物涂片革兰染色镜检3培养物氧化酶试验、接种OF培养基，接种微量生化管第三次实验1观察试验结果2查编码手册鉴定3出实验报告【实验分组】2-4人/组实验十尿液标本的细菌学检查【实验类型】综合型实验【目的要求】1.熟悉尿液标本细菌学检查的基本程序；2.掌握尿液标本细菌定量检查的方法和临床意义；3.掌握尿液标本细菌分离培养鉴定的方法和临床意义。【实验学时】共8学时三次课，3+3+2学时【实验内容】第一次课1.制备普通平板（小组作，实验室准备培养基，学生倒平板，每人需一个平板）2.含金葡、表葡、大肠埃希菌、绿脓杆菌的模拟尿液标本直接涂片染色镜检。3.尿液标本定量接种环法，定量培养。（接种环法）4.尿液标本倾注平板法三节课，增加倾注平板法，学生自己稀释菌尿液液倾倒。，定量培养。三节课，增加倾注平板法，学生自己稀释菌尿液液倾倒。第二次课1接种环法和倾注平板法，琼脂平板上菌落计数，比较。2培养物革兰染色镜检3培养物触媒酶实验、氧化酶实验、血浆凝固酶试验4培养物接种KIA、MIU第三次课1培养结果观察；2培养物血清学鉴定3出实验报告【实验分组】2-4人/组实验十一血液标本的细菌学检查【实验类型】综合型实验【目的要求】1.熟悉血液标本细菌学检查的基本程序；2.掌握血液标本细菌分离培养鉴定的方法和临床意义。血液标本方法和临床意义；【实验学时】共6学时二次课，3+3学时【实验内容】第一次实验1含金葡菌、肺炎链球菌、草绿色链球菌、铜绿假单胞菌的模拟已增菌血标革兰染色镜检2标本接种血琼脂平板第二次试验1培养物形态学检查；2生化反应：触酶试验、凝固酶试验、胆汁溶菌试验、氧化酶试验鉴定【实验分组】2-4人/组实验十二临床标本的细菌学检验实验设计【实验类型】设计型实验【目的要求】1.掌握临床粪便标本检出的流程，所需器材和试剂。2.扩展粪便标本相关检验知识，练习文献查询，提高创新性。【实验学时】2学时【实验内容】1.学生根据粪便标本的临床检验程序，自主设计未知粪便标本的病原菌检出。列出标本检验所需准备器材、培养基等。2.分组准备粪便标本相关内容的课件，可为临床病例，可为最新检验技术，可为最新文献。【实验分组】2-4人/组实验十三粪便标本的细菌学检查【实验类型】设计型实验【目的要求】1.学生根据提供的临床标本，和自己设计实验所准备的器材和培养基，将未知粪便标本分离培