铁蛋白操作规程SOP

文件编号：YHBE-JYK-MYS-003标准操作规程铁蛋白测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：9-12页铁蛋白测定标准操作规程1检验申请单独检验项目申请：铁蛋白测定（缩写FERR）；组合检验项目申请：贫血检查组合或肿瘤标志物检查组合；临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本米集2.1.1常规静脉采血约2ml,不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本米集后，在检验申请单上填写标本米集时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对于测定和吸样有干扰的标本：如近期使用鼠源性单克隆抗体诊断后米取。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清，避免溶血。离心必须达到4000rpmX15min，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。标本保存时间：室温（15〜25°C）下可稳定8h，普通冰箱中（2〜8°C）稳定48h。需较长时间保存应将血清存放于-20C。冰冻标本仅可冻融一次。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2〜8C冰箱内保存7d。2.3标本采集的注意事项2.3.1米血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。2.3.2米血后应使血液充分凝固，不建议使用抗凝的血液标本。3方法原理铁蛋白测定采用双位点加心化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：第一步：将标本与包被着抗FERR抗体的超顺磁性磁珠以及抗FERR抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵化，标本中的FERR和包被在磁珠上的抗FERR抗体结合，同时FERR抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中FERR另一位点结合。反应完成后，磁场吸附磁珠，洗去未结合的物质。第二步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD）被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量。所产生光子数与样本内铁蛋白的浓度成正比。样本内分析物的量油校准曲线来确定。文件编号：YHBE-JYK-MYS-003标准操作规程铁蛋白测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：9-12页4试剂及其他用品4.1试剂：迈瑞专用铁蛋白测定试剂盒，由公司出品。未打开的试剂包保存于2〜8°C避光保存稳定保存18个月，不可冻存。开启的试剂包载入系统中可使用28d。4.2试剂盒组分试剂1(Ra):组分：包被着抗FERR抗体的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂。试剂2(Rb)：组分：抗FERR抗体-碱性磷酸酶标记物稀释于缓冲液，含防腐剂。试剂3(Rc)组分：样本处理液，含防腐剂。4.3其他试剂与用品4.3.1化学发光底物4.3.2清洗缓冲液、反应杯等。5校准品与校准模式5.1校准品：深圳迈瑞公司提供的FERR校准液，需贮2〜8C。5.2校准类型和校准点数目：非线性模式，6个校准点。5.3校准周期：在同一批号试剂的使用效期内校准曲线有效，但在间隔28d后需要重新校准。每当：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。5.4校准液重建方法：液体试剂，直接使用。6质控品与室内质控规则6.1质控品：采用深圳迈瑞公司提供配套的质控品。6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。6.4质控规则：采用L-J质控图，以土3s为失控限。标准差由本室实验数据得出。6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。7适用仪器深圳迈瑞公司CL-1200i自动发光免疫分析仪。8标本检测步骤装载试剂…进行校准…进行质控…输入标本检测项目…加载标本f标本测定…结果复核…报告9主要分析参数无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分析。标本量15此。10结果计算仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果。测定结果单位以ng/mL表示。11检验结果的报告及范围11.1结果的报告文件编号：YHBE-JYK-MYS-003标准操作规程铁蛋白测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：9-12页11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：12.00〜135.00ng/ml，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能精密度：批内CVV4.0%。分析范围：0.5~1500ng/ml。灵敏度：0.5ng/ml。方法的有限性及干扰因素：胆红素W5mg/L、TGW9g/L、HbW3g/L在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。13参考范围及医学决定水平参考值（血清）：成年：12〜135ng/mL14临床意义14.1铁蛋白分子是由一个分子量为45000的蛋白质外壳和含铁的核心组成。肝实质细胞和肝、脾、骨髓的红细胞再生中心（日£细胞）存在高浓度铁蛋白，在这些组织中的铁蛋白是人体中过多铁的主要储存场所和红细胞再生中心，可防止高浓度游离铁的蓄积和中毒。铁蛋白也存在于人血浆中，血清铁蛋白浓度变化与人铁贮存有关，是检测人体铁代谢的良好参考指标。14.2正常成人的血清铁蛋白水平为100~300ng/ml，但因性别和年龄而不同。女性的铁蛋白水平与年龄有明显的正相关，但男性无这种关系。男性血清铁蛋白的平均浓度一般是育龄期女性的三倍。14.3血清铁蛋白水平是缺铁性贫血的敏感指标，可早期检出缺铁性贫血。血清铁蛋白浓度低于10ng/mL或15ng/mL为缺铁性贫血评价标准。浓度高于300ng/mL或400ng/mL为铁超负荷诊断标准。典型血色沉着病患者血清铁蛋白浓度在1000ng/mL到5000ng/mL之间。14.4血清铁蛋白水平还是一个铁剂治疗疗效的评价指标。14.5血清铁蛋白水平升高还可见于急、慢性肝病，慢性肾功能衰竭，和某些肿瘤时。受损肝脏细胞释放出的铁蛋白、血浆铁蛋白清除系统受到破坏、肿瘤细胞合成的铁蛋白和血细胞生成导致的铁贮存增加都会促使血清铁蛋白水平的升高。15结果审核以及与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：与其他贫血相关指标如RBC、HCT、HB以及EPO、叶酸等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因16有关引用程序与文件16.1 CL-1200i自动发光免疫分析仪仪器标准操作规程。16.2免疫检验室内质控标准操作程序。16.3检验结果审核程序。文件编号：YHBE-JYK-MYS-003标准操作规程铁蛋白测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：9-12页16.4标本送检和接收程序。17参考文献17.1陆永绥，张伟民主编.临床检验管理与技术规程.杭州:浙江大学出版社，2004.17.2铁蛋白测定试剂说明书。17.3叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程（第三版）.东南大学出版社