妇血安薄膜衣片的质量控制

妇血安薄膜衣片的质量控制

女性血安膜片是广东德鑫制药有限公司开发的具有特定疗效的中药。它主要由12味中药组成：贞子、当归和母字。具有活血化瘀、抗瘀、益肝肾、止血调经、止血调经的功效。用于血瘀期的延长治疗。妇血安片原剂型为糖衣片(国药准字Z20010123)。为了提高产品质量,本试验拟定了妇血安薄膜衣片的质量标准,优化了三七、女贞子、丹参和白术的TLC鉴别方法,增加了仙鹤草、党参的定性鉴别,并优化了当归中阿魏酸(ferulicacid,1)的含量测定方法。1自制规格、预制板规格HP1100型高效液相色谱仪,配备HPG1311A型四元梯度泵,HPG1313A型自动进样系统,HPG1315A型二极管阵列检测器,HPG1313型真空在线脱气机,HPG1316A型柱温箱及HPChemStation6.0色谱工作站(美国Agilent公司)。薄层色谱硅胶G(青岛海洋化工有限公司,自制规格10cm×10cm,厚度0.5mm);预制板(青岛海洋化工厂分厂,规格10cm×10cm,厚度0.25mm)。妇血安薄膜衣片(规格0.25g/片,批号小试-1、小试-2、小试-3、B090601、B090602和B090603)和所有阴性对照样品均来自广东德鑫制药有限公司;丹参对照药材(批号120923-200509)、女贞子对照药材(批号121041-200302)、白术对照药材(批号120925-200708)、三七对照药材(批号120941-200807)、仙鹤草对照药材(批号120966-200505)、党参对照药材(批号121057-200805)、1对照品(批号0773-9910)、原儿茶醛(2)对照品(批号110810-200506)、三七皂苷R1(3)对照品(批号110745-200617)、人参皂苷Rb1(4)对照品(批号110704-200921)和人参皂苷Rg1(5)对照品(批号110703-200726)均购自中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。2方法和结果2.1氯甲烷-甲醇-水3-三甲基”-3-甲基苯磺酸酯的合成取本品5片,研细,加70%甲醇30ml,超声(功率120W,频率40kHz,下同)45min,过滤。滤液蒸干,剩余物加水30ml使溶解,用水饱和的正丁醇(20ml×3)提取,合并正丁醇液,用0.2%氢氧化钠溶液洗涤(20ml×3),将正丁醇液蒸干,剩余物加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。取三七对照药材1g,加70%甲醇20ml,超声处理45min,过滤,滤液蒸干,剩余物加乙醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。取3、4、5对照品,加乙醇制成浓度均为1mg/ml的混合溶液,作为对照品溶液。取三七阴性对照样品2.5g,同法制成阴性对照溶液。照TLC法(中国药典2010年版一部,附录ⅥB,下同),分别吸取上述溶液各5uf06dl,点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13︰7︰2)的下层溶液为展开剂,展开至8cm,取出,晾干,日光下检视,供试品色谱在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。结果见图1。2.2女贞子的tlc法按“2.1”项下方法制备供试品溶液。取女贞子对照药材1g,加70%乙醇20ml,超声处理30min,过滤,滤液水浴蒸干,剩余物加乙醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。取女贞子阴性对照样品2.5g,同法制成阴性对照溶液。照TLC法,分别吸取上述溶液各5uf06dl,点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-三氯甲烷-甲醇(4︰3︰1)为展开剂,展开,取出,喷10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,日光下检视,供试品色谱在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的紫红色斑点。结果见图2。2.3氯甲烷-丙酮-甲醛对照品溶液的制备取本品5片,研细,加70%乙醇25ml,超声处理30min,过滤,滤液蒸干,剩余物加水10ml使溶解,通过AB-8型大孔吸附树脂柱(1.5cm×8cm),用水40ml洗脱,取洗脱后的水溶液备用。再用20%乙醇40ml洗脱(流速3ml/min),收集洗脱液,蒸干,剩余物加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。取丹参对照药材0.5g,加水20ml,加热回流30min,离心(2000r/min)10min,取上清液,用乙酸乙酯提取(15ml×2),取乙酸乙酯层,蒸至2ml,作为对照药材溶液。取2对照品,加无水乙醇制成浓度为50uf06dg/ml的溶液,作为对照品溶液。取丹参阴性对照样品2.5g,同法制成阴性对照溶液。照TLC法,分别吸取上述溶液各5uf06dl,点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-丙酮-甲酸(8︰2.2︰1.3)为展开剂,展开,取出,喷以新鲜配制的2%三氯化铁-1%铁氰化钾(1︰1)溶液,在日光下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的蓝色斑点。结果见图3。2.4对照药材和阴性对照样品的制备取“2.3”项下的水溶液,用乙酸乙酯(25ml×3)提取,合并乙酸乙酯液,蒸干,剩余物加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。取白术对照药材0.5g和阴性对照样品2.5g,同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。照TLC法,分别吸取上述溶液各10uf06dl,点于同一硅胶G薄层板上,正己烷-三氯甲烷(4︰8)为展开剂,另一槽放5ml氨水,展开,取出,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘至斑点显色清晰,在紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。结果见图4。2.5仙皇草的tlc法取本品5片,研细,加70%乙醇25ml,超声处理30min,过滤,滤液蒸干,剩余物加水30ml使溶解,用乙酸乙酯提取(15ml×3),合并乙酸乙酯液,用0.2%氢氧化钠溶液提取(20ml×3),合并碱液,加稀盐酸调至pH中性,再用乙酸乙酯(30ml×2)提取,合并乙酸乙酯液,蒸至2ml,作为供试品溶液。取仙鹤草对照药材1g,加70%乙醇20ml,超声处理30min,过滤,滤液蒸干,剩余物加乙醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。取仙鹤草阴性对照样品2.5g,同法制成阴性对照溶液。照TLC法,分别吸取上述溶液各5uf06dl,点于同一硅胶G薄层板上,正己烷-乙酸乙酯-甲酸(9︰3︰0.5),展开,取出,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘至斑点显色清晰,在紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。结果见图5。2.6样品的制备和鉴别取本品5片,研细,加水40ml,加盐酸4ml,加热回流30min,过滤,滤液用石油醚(bp30~60℃)洗涤(20ml×2),再用二氯甲烷(20ml×3)提取,合并二氯甲烷液,蒸干,剩余物加二氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液。取党参对照药材1g,加水20ml,加盐酸2ml,加热回流1h,过滤,滤液同法制成对照药材溶液。取党参阴性对照样品2.5g,同法制成阴性对照溶液。照TLC法,分别吸取上述溶液各5uf06dl,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10︰4︰1)为展开剂,展开,取出,晾干,在紫外灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。结果见图6。2.71重量测定2.7.1对照品溶液和试品溶液的制备对照品溶液:精密称取1对照品10mg,置100ml量瓶中,加甲醇溶解并定容,摇匀,作为对照品贮备液(0.1mg/ml),备用。精密量取1对照品贮备液2ml,置10ml量瓶中,加甲醇定容,摇匀即得20uf06dg/ml的1对照品溶液。供试品溶液:取本品20片,研细,精密称取细粉5g,置具塞锥形瓶中,精密加入5%甲酸甲醇溶液100ml,称重,超声处理30min,用5%甲酸甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,过滤,精密量取续滤液50ml,蒸干,剩余物加水20ml使溶解,用乙酸乙酯提取(30ml×3),收集乙酸乙酯液,蒸干,剩余物加适量甲醇使溶解,并转移至10ml量瓶中,加甲醇定容,摇匀,即得。阴性对照溶液:取当归阴性对照样品5g,同法制成阴性对照溶液。2.7.2流动相-1%冰乙酸溶液uf06d色谱柱KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5uf06dm);流动相甲醇-1%冰乙酸(33︰67);流速1.0ml/min;柱温25℃;检测波长330nm;进样量10uf06dl。理论板数按1峰计算不低于3000,方中其他成分不干扰测定。见图7。2.7.3标准曲线及线性回归法分别取对照品贮备液0.5、1、2、4、6和8ml,置10ml量瓶中,加甲醇定容,摇匀,制成系列浓度1对照品溶液。分别进样,记录色谱图,以峰面积A为纵坐标、以进样量m为横坐标,进行线性回归,得回归方程。A=5027.25m+1.48,r=0.9999。结果表明1在5~80uf06dg/ml范围内线性关系良好。2.7.4稳定性试验取1对照品溶液,重复进样5次,计算得RSD为1.02%。取同一供试品溶液,分别在放置0、2、4、8、10和12h时进样,依法测定,结果RSD为0.79%,表明供试品溶液在12h内稳定。取同批样品,按“2.7.1”项下方法制备供试品溶液,连续平行操作6份,分别进样测定。结果,本品1的平均含量为0.146mg/g,RSD为1.49%。2.7.5加样回收率试验取1对照品,加甲醇配成1mg/ml的溶液,备用。取本品20片(批号B090601),研细,精密称取细粉2.5g,共6份,各置具塞锥形瓶中,分别精密加入上述1对照品溶液0.4ml,加5%甲酸甲醇溶液100ml,按“2.7.1”项下制备供试品溶液,分别进样测定,结果平均回收率为98.9%,RSD为1.12%(n=6)。2.7.6供试品溶液取3批样品,各2份,按“2.7.1”项下方法制备供试品溶液,分别进样测定,结果1含量分别为(75.92±0.18)、(68.38±0.06)和(67.86±0.26)uf06dg/片。3高效液相色谱图当归为方中君药,1为其主要药效成分。原糖衣片