黄芪中皂苷类成分的薄层特征图谱检查方法研究

黄芪中皂苷类成分的薄层特征图谱检查方法研究

黄鼠尾是蒙古植物。蒙古黄色的种子。蒙古黄色的种子。蒙古-黄色的种子。干燥的根主要包括肥皂、异黄酮、糖和氨基酸。具有补气升阳、固表止汗、托毒排脓、利水消肿、敛疮生肌之功效。查阅《中国药典》2005年版、中药成方制剂标准、新药转正标准等,发现涉及黄芪中皂苷类成分的薄层鉴别共140个标准。本试验归纳总结各检查方法,并进行试验比较,最终确定特征薄层色谱鉴别方法,为黄芪药材及含黄芪药材的成药鉴别提供试验依据。1仪器和试剂盒1.1动点样器系统CAMAGLINOMAT5半自动点样器;CAMAGREPROSTAR3数码成相系统;薄层板为硅胶G、GF254(青岛海洋化工厂)。1.2药品、试剂及仪器对照品黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所,批号:110781-200613,即黄芪皂苷Ⅳ),黄芪皂苷Ⅰ(上海同田生物科技有限公司,批号:E-0129)、Ⅱ(上海同田生物科技有限公司,批号:E-0130)、Ⅲ(上海同田生物科技有限公司,批号:E-0131),试剂均为分析纯,黄芪药材样品见表1。2方法和结果2.1溶液的制备2.1.1大孔树脂不碱化病毒检测法查阅《中国药典》2005年版、中药成方制剂标准、新药转正标准,涉及黄芪中皂苷类成分的薄层鉴别方法共140个相应标准,归纳供试品制备方法如下:方法一(参照新药转正标准:参芪鹿茸口服液等)甲醇回流正丁醇萃取不碱化:取本品粉末3g,加甲醇20mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水10mL使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,即得样品1。方法二(参照《中国药典》2005年版一部:调经促孕丸等)甲醇回流正丁醇萃取碱化:取本品粉末3g,加甲醇20mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水10mL使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次(20mL、20mL),弃去氨试液,将正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,即得样品2。方法三(参照《中国药典》2005年版一部:颈复康颗粒等)大孔树脂不碱化:取本品粉末3g,加甲醇20mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水10mL使溶解,通过AB-8大孔树脂柱(大孔树脂5g,内径1.5cm),用水100mL洗脱,弃去洗脱液,继续用40%乙醇50mL洗脱,弃去洗脱液,再用70%乙醇50mL洗脱,收集70%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加水10mL使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇提取液,将提取液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,即得样品3。方法四(参照中药成方制剂标准:调玉屏风颗粒等)大孔树脂碱化:取本品粉末3g,加甲醇20mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水10mL使溶解,通过AB-8大孔树脂柱(大孔树脂5g,内径1.5cm),用水100mL洗脱,弃去洗脱液,继续用40%乙醇50mL,洗脱,弃去洗脱液,再用70%乙醇50mL,洗脱,收集70%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加水10mL使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次(20mL、20mL),弃去氨液,将正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,即得样品4。方法五(参照《中国药典》2005年版一部:黄芪药材)氧化铝柱纯化、不碱化:取本品粉末3g,加甲醇20mL,加热回流1h,滤过,滤液加于中性氧化铝柱(100～120目,5g,内径为10～15mm)上,用40%甲醇100mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加水30mL使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇液,用水洗涤2次,每次20mL,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,即得样品5。方法六(参照新药转正标准:益心康泰胶囊)氧化铝柱纯化、碱化:取本品粉末3g,加甲醇20mL,加热回流1h,滤过,滤液加于中性氧化铝柱(100～120目,5g,内径10～15mm)上,用40%甲醇100mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加水30mL使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次,每次20mL,再用水20mL洗1次,弃去氨试液及水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,即得样品6。2.1.2对照溶液的制备分别取黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ置量瓶,加甲醇稀释定容至刻度,制成浓度为0.5mg·mL-1的对照品溶液。2.2薄展开条件2.2.1荧光点简介照薄层色谱法(《中国药典》2005年版附录ⅥB)试验,吸取对照品5μL、供试品10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,按表2中展开条件分别展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇显色后,365nm下检视荧光斑点。结果见图1。由结果可知:①4个展开条件下,条件4可使各斑点分离良好,且背景干扰小,故选择此薄层展开条件。②6个供试品处理方法中,经甲醇提取正丁醇萃取的样品与过氧化铝柱的样品无明显差别,但背景颜色都较深;经大孔树脂处理的样品背景干扰小,且碱化处理前后各斑点均能看到,碱化处理前斑点更清晰,故选择经大孔树脂不碱化处理的方法三。2.2.2蒙古黄芪的降解有文献报道,黄芪皂苷在碱性条件下黄芪皂苷Ⅳ含量增高。因此在选定的薄层条件下比较碱化处理对黄芪皂苷的影响,采用薄层条件正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)的上层-甲醇(10∶1),将蒙古黄芪及膜荚黄芪样品分别置于碱性条件(氨饱和的展开缸内)和非碱性条件下展开,见图2。由结果可知,在碱性环境下,黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ向黄芪皂苷Ⅳ转化。为了保留更多的特征成分,最终确定展开时不采用碱化处理。2.3中黄芪皂苷类化学成分的测定按照选定方法对13批样品进行测定,结果见图3。由结果可知,在1～13号样品中均能检出黄芪皂苷Ⅰ～Ⅳ,所选定的成分对于黄芪中皂苷类成分的鉴别有一定代表性,可以作为特征成分进行测定;6号样品为野生黄芪,试验发现薄层色谱上