林蛙油成分分析与鉴别研究进展

林蛙油成分分析与鉴别研究进展

中国云杉岭雌青蛙的干制剂可用于药物，如哈士曼油或哈士曼油，也被称为“田鸡油”，一种稀有的动物材料。由于最近几年林蛙的野外资源逐渐减少,市场需求却不断扩大,目前林蛙产品价格不断上涨,市场上鱼目混珠、以次充好的情况逐渐严重起来,对林蛙养殖产业造成巨大的冲击。本文通过对林蛙鉴别方法的研究现状进行总结,希望能促进林蛙油质量监督体系的形成。中国林蛙油的传统鉴定主要包括基源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定等。目前,研究主要集中在林蛙油几个主要伪品之间的差异。最近几年遗传、指纹图谱方面对林蛙油的鉴定已经有了部分研究,但还处于摸索阶段,尚不成熟。1基本起源检测1.1林蛙体形态特征中国林蛙为蛙科、卵生两栖动物,外形很像黑斑蛙。雌蛙体长约7～9cm,雄蛙较小;头长宽相等或略宽,扁平;吻端钝圆略突出于下颌,吻棱较明显;鼓膜显著,明显大于眼径之半;前肢较粗短;指端圆,指较细长;皮肤上细小疣粒很多,口角后端颌腺十分明显,背侧褶在颞部不平直而成曲折状,在鼓膜上方侧褶略斜向外侧,随即又折向中线,再向后延伸至胯部;两侧褶间有少数分散的疣粒,在肩部排成“∧”形;腹面皮肤光滑,皮肤颜色随着季节的不同而变化,秋季和冬季为褐色,夏季为黄褐色。霜降前后林蛙体肥油足,捕捉最好。雌蛙腹内有油(输卵管)而雄蛙腹内无油,故应注意辨别:雌蛙腹部肥满,雄蛙则形体瘦小,腹部小,下部尖形。1.2设备与神经皮内地装色黑龙江林蛙为蛙科动物,形状与中国林蛙相似。雌蛙体长6～7cm,皮肤粗糙,呈黑褐色和黑色。背侧褶在颞部成曲折状。背侧褶及背部疣上或附近多有黑色斑点,鼓膜上的三角形黑色斑点大而显著。四肢背面有黑横纹。咽、喉及腹部有鲜艳的朱红色与深灰色花斑;四肢腹面间有少量朱红色小点。黑龙江林蛙与中国林蛙同生活于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古。所以中国林蛙商品中有时会夹杂一些黑龙江林蛙。1.3确保了“法律上的确保”黑斑蛙为蛙科动物,背面的基色为黄棕色或深绿色或带灰棕色,具有不规则的黑斑,背中央常有一条宽窄不一的浅色的纵脊线;四肢背面有黑色横斑。股后方无纵纹,而只有几条横纹。腹面白色无斑。此种为我国常见的蛙类,常栖于池塘、水沟或小河内,产卵季节为3～6月。1.4性别异形文化的特点中华大蟾蜍为蟾蜍科动物,俗称癞蛤蟆。形似蛙而较大,躯干粗短,无尾,头宽大于长,头部无骨质棱,鼓膜显著;皮肤极粗糙,背部密布瘰疣,腹部疣粒较小,头部较光滑,两侧有大而长的耳后腺。体色随季节和性别不同而变化,生殖季节雄性背部多黑绿色,体侧浅色斑纹;雌性背部颜色较浅,瘰疣乳黄色,腹部乳黄色,有棕色或黑色细花纹,雄性较小,内侧3指有黑色婚垫,无声囊,广泛分布于我国暖温带、亚热带地区。干燥原只哈士蟆的真伪鉴别只要掌握好此四种动物的原有特征,就能将正品中国林蛙与其类似品黑龙江林蛙、伪品黑斑蛙、中华大蟾蜍区别开来。2评估的价值2.1指甲色显示的病理输卵管较粗长而重,长为体长的4～8倍,重量为体重的20%～26%,呈不规则块状或片状,弯曲重叠大小不一,大者长约1.5～2cm,厚1.5～3cm,小的同米粒或豆粒。黄白色,微透明显脂肪样光泽,可见明显的毛细血管,偶有带灰白色薄膜状干皮和黑色卵,质硬而脆,用指甲掐之,则出白色裂痕或碎块。折断面整齐多棱角,呈不规则弯曲团块状,输卵管呈脑样回沟状镶嵌排列,相互重叠成特有的凹窝状为不规则弯曲、相互重叠的厚块,略呈卵形。外表色白或黄白色,显脂肪样光泽,摸之有滑腻感,有不规则的裂纹,用手指甲可划出痕迹。一般左右各一块,当中由皮膜连接。质硬脆,易碎成小块,折断面整齐多棱角,碎块间常有灰白色薄膜牵连。气特殊,味微甘,嚼之黏滑。以块大、肥厚、黄白色、有光泽、不带皮膜、无血筋和卵子者为佳。2.2黑龙江省林青蛙油与正品哈蟆油性状极其相似,个体稍小些。输卵管粗细也均匀,白色或黄白色,也有油脂样光泽。质脆易碎,手摸之有润滑感。2.3左右片色,或形成不对称的小球色形状与哈蟆油非常相似,也由粗细均匀的管状输卵管呈镶嵌状弯曲排列。色白或黄白,也具哈蟆油一样的油脂样光泽。只是通常不左右成对出现,而且左右两片形状不对称。整个形状呈扁平无凹窝或稍有浅凹窝。皮膜灰黑色,少见“味辛辣,麻嘴,粘牙”。2.4哈蟆油的特性形状呈盘旋扭曲状(形似鸡肠)或压成块状和块片状,无哈蟆油特有的凹窝状。其输卵管粗细不均,表面淡黄色至黄棕色,无油脂样光泽,半透明,质较硬,不易碎裂手摸之润滑感,具特异腥臭,遇水膨胀慢,膨大体不呈棉絮状,膨胀后仍较硬,嚼之有脆性,与正品哈蟆油较易区别。2.5干皮色密度带绿色干皮本品呈不规则块状连接体,大小不等,长2～3cm,厚1.8～4cm,有的一侧带绿色干皮。表面黄白色有脂肪样光泽,手摸也有滑腻感,质硬而脆.2.6杏仁加工本品呈不规则扁块状,大小不等,边缘有刀痕,表面灰白半透明,角质样,质坚硬,不易折断。2.7甘薯加工表面暗棕黄色,半透明角质样。2.8水浸液的制备本品呈团状、块状等,表面灰白稍透明,质轻有弹性,有光泽,不易破碎和断裂。温水浸泡呈明胶状,有韧性。煮沸溶化,冷后凝固,可与蛤蟆油明显的区别。3轻微检测3.1状态组织,见表1显微镜下呈金黄色,腺体细胞肥大,呈长椭圆形,排列整齐,细胞壁明显。本品以个大肥厚色白,有光泽,无黑色卵子,无皮膜者为佳。3.2体国林蛙的体核型碘酒染色后显微镜观察腺体细胞较短,方圆形,细胞核不明显,腺体较窄,约中国林蛙腺体细胞的3/4,腺体内腔宽度约为蛤蟆油腺体细胞的1/2,腺体纹理较少。3.3付款产品碘酒染色显微镜观察腺体宽而短,呈三角形,腺体细胞形态不一,排列不整齐,细胞壁不明显。4物理和化学评价4.1肉的干燥、燃烧温水浸泡会膨胀,膨胀度可达90%以上。膨大体质地软呈棉团状,气腥,味微甘,嚼之有粘滑感,膨胀时输卵管壁破裂;24h后呈白色棉絮状。加热煮沸不溶化,手捏不粘手。脱水干燥后可恢复原样,但失去光泽。蛤士蟆油遇火易燃烧,离火自熄;燃烧时发泡,并有噼啪之响声,无烟,有焦糊气不刺鼻。荧光反应采用直接观察法,进行荧光观察,其结果表明在一定的范围内荧光是稳定的。4.2墨水中土黄、哈蟆油的吸水黑龙江林蛙油鉴别:油的性状与蛤蟆油基本相同,但形状小,扁,色泽为土黄或棕黄色,稍有脂肪样光泽,摸之稍有滑腻感,在温水中吸水后膨胀较哈蟆油小,体积增长约15倍左右。水浸后易散碎,呈不规则的扁片状,水易混浊不清,气微或腥,膨胀体比蛤蟆油少絮状物,能整块的被勺子勺起4.3受害者为青稞油遇水膨胀速度比哈蟆油稍逊,增大8～12倍。膨胀时输卵管壁破裂成棉絮状。黑斑蛙剥出的油与哈摸油商品有通一性,由此确定此为黑斑蛙油,俗称青蛙油。由于其成本低廉,利润空间大,性状又与正品林蛙油不易区分,所以好多不法商贩用它来冒充正品林蛙油。4.4管坚不破裂,生长特性蟾蜍油习称癞蛤蟆油,蟾蜍油遇水稍膨胀,增大4～5倍。输卵管管坚不破裂,只见粉条状物加粗,但形态不变,遇水虽变软,但不能将其拉直,断裂处呈狮子头样膨胀,但不呈棉絮状。遇火燃烧,与蛤士蟆油相似。此品不入药。4.5明太鱼巢用水浸泡,体积膨胀0.5～1倍,味咸微苦,遇水乳白色,使之混浊,水表面出现油滴漂浮,煮沸不熔化呈凝固状,有鱼腥气。4.6杏仁加工温水浸泡稍有膨胀,表面为灰白色颗粒状,手摸之则脱落,内部仍有硬块,气微而味甘淡,加碘呈蓝色。4.7甘薯加工温水浸泡表面膨胀较厚,手摸之有软滑感,有甜味,加碘呈蓝黑色。4.8琼脂加工温水浸泡呈明胶状,有韧性。煮沸溶化,冷后凝固,可与蛤蟆油明显的区别。5对药材鉴定技术的应用以上这些鉴定特征均为生物体的遗传性表现型。它们不仅受到遗传因素的影响而且与生长发育阶段、环境以及人类活动如引种、驯化、加工炮制等有着密切关系,具有很大的变异性和可塑性,因而传统生药鉴定难免存在主观性强、重复性和稳定性差等缺点。尤其对复方及成品药采用常规形态鉴定显微鉴定、理化鉴定等手段已难以胜任多来源、多组织、多产品鉴定的需要。随着分子生物学技术和中药材鉴定技术的结合,可以解决中药材鉴定的难题。李津明等2005年对林蛙油的指纹图谱方面进行了研究。在色谱:DimonsilC18分析柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温:25℃,流动相:乙腈-水(50∶50),分析时间60min条件下,测10份不同林蛙油商品完整药材的丙酮提取物的HPLC图谱,可以检出17个相应位置稳定的共有峰,可作为确定鉴定林蛙油的指标峰。为建立一种稳定、可靠的鉴别和控制林蛙油质量的方法进行了必要的尝试。另外郭立宏在分子水平上通过五对引物对四个物种进行PCR扩增,看四个物种扩增产物的区别,从而对其进行分子鉴别。6林蛙产品质量标准化(1)要尽快实现林蛙油鉴定的客观化、简单化目前林蛙油鉴定方法多数主观性比较强,在市场上多年以来一直采用的是经验性的鉴定方法,这些方法不能快速的被人掌握,所以对于真假产品的分辨就十分困难。采用先进的技术方法使产品鉴定客观、快捷是现阶段此项研究的主要目标。(2)尽快建