广藿香油的气相色谱指纹图谱鉴别研究

广藿香油的气相色谱指纹图谱鉴别研究

广茉3430；香散。具有润香健脾、消食止吐、解暑的功效。除了配方使用外,广藿香还是30余种中成药如“藿香正气丸(水)”、“抗病毒口服液”和“藿胆丸”等的重要组成药物。其挥发性成分广藿香油(patchoulioil)由水蒸气蒸馏而得,是抗菌的有效成分,此外广藿香油还可以作为化妆品、定香剂和杀虫剂等的生产配料。广藿香油作为提取物首次收载于2005年版《中国药典》,并规定百秋李醇(patchoulialcohol)含量不得少于26%。但是,广藿香油中还含有广藿香酮(pogostone)、丁香烯(caryophyllene)、广藿香烯(patchoulene)、愈创木烯(guaiene)等,据文献报道广藿香酮对白色念珠菌、新型隐球菌、黑根霉菌等具有明显的抑制作用,对金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌等细菌亦具有抑制作用,是很好的药物成分,且已有研究表明广藿香酮含量高的药材,与传统方法评价优质广藿香药材结果相吻合,表明广藿香酮也是评价广藿香及广藿香油质量的重要指标,但缺乏相应的鉴别方法。本文利用气相指纹图谱方法,建立了广藿香油的专属性鉴别方法,为广藿香油的质量评价提供了科学依据。1药品、试剂与仪器Agilent6890GC气相色谱仪,AgilentFID检测器,AgilentDB-5GC色谱柱(0.25mm×30m,0.25μm),AT201型电子天平。纯氮气,正己烷(色谱纯),百秋李醇对照品(中国药品生物制品检定所,98%,批号110772-200404),广藿香酮对照品(自制,纯度98%)。广藿香油样品S11和S12按《中国药典》2005年版挥发油测定甲法制备,药材采自广东高要;样品S1-S10分别来自6家制药公司,批号分别为070316,080116,080306,070401,071201,080303,080322,080422,081001,090108。2指纹图谱检测2.1气相色谱指纹图谱的测定2.1.1色谱条件AgilentDB-5GC色谱柱(0.25mm×30m,0.25μm);载气为高纯氮气(N2),进样量1μL,分流比10∶1,检测器温度280℃,气化室温度250℃,柱前压8.77Pa,尾吹气流量30.0mL·min-1,氢气流量40.0mL·min-1,空气流量450mL·min-1;升温程序初温80℃,保持2min,以5℃·min-1升温至200℃,保持2min,再以8℃·min-1升温至280℃,保持5min。2.1.2供试品溶液制备精密称定广藿香挥发油提取物0.1g置于10mL的量瓶中,用正己烷定容作为供试品溶液。2.1.3对照品溶液的制备取百秋李醇对照品适量,加正己烷配制成每1mL含2mg的溶液,作为对照品溶液。2.1.4精密度试验取同一份广藿香油供试品溶液连续进样6次,比较共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积,各共有指纹峰的相对保留时间RSD<0.08%,相对峰面积RSD<4.6%,符合指纹图谱的检测要求,表明该仪器的精密度良好。2.1.5稳定性试验取同一份广藿香油供试品溶液,分别在制备后0,4,8,16,24h进样,比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积,各共有峰的相对保留时间RSD<0.14%,相对峰面积<4.3%。表明该样品溶液在24h内稳定。2.1.6重复性试验取同一批广藿香油样品6份按供试品溶液制备方法分别制备,比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积,相对保留时间RSD<0.64%,相对峰面积RSD<4.5%,表明该方法重复性良好。2.1.7GC指纹图谱的测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL,按2.1.1项下分析条件注入气相色谱仪,考察80min内供试品溶液的分离情况,记录60min内色谱图,见图1。2.1.8指纹图谱相似性评价以百秋李醇为参照物,测定并记录12批样品色谱图,见图2。根据12批广藿香挥发油提取物样品的共有性和各色谱峰相对保留时间的一致性,共确定了12个共有峰。tR=47.94min的峰为百秋李醇,其面积较稳定,且分离度好,设为参照峰S,将各共有色谱峰保留时间和峰面积与同一图谱中参照峰的保留时间和峰面积相比,其比值为各共有峰的相对保留时间和相对峰面积,见表1。可以看出,相对含量较高的组分除11号峰外,还有1,5,6,7,9号峰。采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似性评价系统A”对所得的广藿香油提取物GC指纹图谱全谱进行相似度计算,结果表明,12批广藿香油提取物相似度均超过了0.9。3广封式指纹图谱的建立广藿香油提取物GC指纹图谱中可以分离出30多个主要峰,经比较12批样品的指纹图谱后,从中选定12个共有峰作为可以构成广藿香油提取物指纹图谱的稳定特征峰,标准指纹图谱见图2,为易于辨认和分析,可将指纹图谱分为3个区,主峰区(Ⅰ区):出现6个特征峰(1～6号峰),均达到基线分离,其中有4个主峰,最强峰为5号峰,其次1,4,6号峰为次强峰,从时间上看该6个峰占了指纹图谱的前半段。特征峰区(Ⅱ区):该区有5个特征峰(7～11号峰),其图谱的特征性很直观,第7号峰与它周围的小峰连接紧密,未完全分离,构成了形似佛手瓜的“五指峰”峰群。指纹区(Ⅲ):在图谱上位于特征峰区以后,主要为一些细小的指纹峰,广藿香酮在该区(12号峰),但是不同的样品含量有很大的差别。本研究在测试条件方面经过大量的实验摸索,通过系列方法学考察建立了广藿香油GC色谱特征指纹图谱,方法简单,可操作性强,从相似度分析12批样品相似度很接近,可用于广藿香油提取物的鉴别;同时广藿香药材中含有多种萜类和酮类成分,在相同的色谱条件下,这些成分的色谱峰顺序和相对保留时间在一定的时间范围内是固定的,因此可以很好的鉴别广藿香油的真伪优劣,为广藿香药材的质量控制提供了科学依据,也为含广藿香油制剂制定指纹图谱奠定基础。作为中药色谱指纹谱,其测定的方法不仅要简单、准确,同时要尽可能多地反映出药品的内在信息,以便能从整体上把握其特征,从而