黄芪中氨基酸、异黄酮类成分的特征薄层图谱研究

黄芪中氨基酸、异黄酮类成分的特征薄层图谱研究

黄鼠尾是蒙古黄色的一个蒙古黄鼠尾。作为一个分生根，它主要含有肥皂、异黄酮、糖和氨基酸。具有补气升阳、固表止汗、托毒排脓、利水消肿、敛疮生肌之功效。查阅《中国药典》2005年版、中药成方制剂标准、新药转正标准等,发现涉及黄芪中黄酮类成分的薄层鉴别共7个标准,涉及氨基酸类成分的薄层鉴别共6个标准。本试验归纳总结各检查方法并进行试验比较,最终确定特征薄层色谱鉴别方法,为黄芪药材及含黄芪药材的成药鉴别提供试验依据。1试剂及仪器CAMAGLINOMAT5半自动点样器;CA-MAGREPROSTAR3数码成相系统;薄层板为硅胶G、GF254(青岛海洋化工厂)。黄芪药材样品见表1。对照品精氨酸(中国药品生物制品检定所,批号:110872-200505),丙氨酸(中国药品生物制品检定所,批号:140680-201002),脯氨酸(中国药品生物制品检定所,批号:140677-200405),芒柄花素(中国药品生物制品检定所,批号:111703-200602),毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷(中国药品生物制品检定所,批号:111920-201001),毛蕊异黄酮(上海同田生物科技有限公司,批号:E-0156),芒柄花素-7-O-葡萄糖苷(上海同田生物科技有限公司,批号:E-0573),试剂均为分析纯。2方法和结果2.1氨基酸化合物2.1.1溶液的制备2.1.1.中药成方制剂的制备查阅《中国药典》2005年版、中药成方制剂标准及新药转正标准等,涉及黄芪中氨基酸类成分的薄层鉴别方法共6个标准,归纳供试品制备方法如下:方法一(参照中药成方制剂标准:童康片、力加寿片标准):取本品粉末3g,加70%乙醇50mL,水浴回流2h,滤液浓缩至20mL,放冷,加活性炭0.2g,摇匀,滤过,滤液蒸干,残渣加70%乙醇1mL使溶解,即得。方法二(参照中药成方制剂标准:产复康颗粒标准):取本品粉末3g,加水15mL,超声30min,滤过,滤液蒸干,残渣加70%乙醇1mL使溶解,即得。2.1.1.2.对照溶液的制备称取对照品精氨酸(3.72mg)、脯氨酸(2.77mg)、丙氨酸(3.7mg),置5mL量瓶,加70%乙醇定容至刻度,即得。2.1.2不同方法展开胶g薄层板上过水照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅣB)试验,吸取按方法一与方法二制备的样品各1.5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,按以下展开条件分别展开((1)乙醇-浓氨-水(7∶1∶2),(2)正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1),(3)苯酚-水(5∶3)),取出,晾干,喷以0.5%茚三酮,105℃加热显色,见图1。由结果可知:方法一与方法二处理后的样品主要斑点无明显差别,故选择方法二,简便易行;展开剂条件1与2均不能使样品各斑点得到良好的分离,条件3基本可行。2.1.3薄层板法试验按供试品制备方法二制备1~13号样品,照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅣB)试验,吸取对照品5μL、供试品1.5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以薄层条件3进行展开,结果见图2。由结果可知,样品中均可检出脯氨酸、丙氨酸及精氨酸,其中由于精氨酸Rf值较低需要液相色谱法进一步确认。2.2黄酮类化合物2.2.1溶液的制备2.2.1.运行用降糖片制备本品溶液查阅《中国药典》2005年版、中药成方制剂标准及新药转正标准等,涉及黄芪中黄酮类成分的薄层鉴别方法共7个标准,归纳供试品制备方法如下:方法一(参照《中国药典》2005年版黄芪药材):取本品粉末2g,加乙醇30mL,加热回流20min,滤过,滤液蒸干,残渣加0.3%氢氧化钠溶液15mL使溶解,滤过,滤液用稀盐酸调节pH值至5~6,用乙酸乙酯15mL振摇提取,分取乙酸乙酯液,用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过,滤液蒸干。残渣加乙酸乙酯1mL使溶解,即得。方法二(参照部颁标准丹溪玉屏风颗粒):取本品粉末3g,加水150mL,煮沸1h,放冷,滤过,滤液加醋酸乙酯30mL,振摇提取,分取醋酸乙酯液,加无水硫酸钠适量脱水,滤过,滤液蒸干。残渣加乙酸乙酯1mL使溶解,即得。方法三(参照部颁标准降糖甲片):取本品粉末3g,加醋酸乙酯20mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干。残渣加甲醇1mL使溶解,即得。2.2.1.测定国花素、芒果柄花素糖苷、毛常用、无机溶剂的糖苷3.4%、白充异黄酮3.4%、白废分子中专属性分子中专家规训,6.5.5%糖苷、毛常用化合物3.5.5%糖苷、克氏原螯虾6.5.5.5%糖苷、克氏原螯虾6.5.5%糖苷3.4.5%、白充填异黄酮3.4.5%糖苷、f、毛常用、活性化合物5.5.5.5%糖苷-4.5%糖苷-4.5%糖苷-4.5.5.5%糖苷-3.5%糖苷-3.5.5%糖苷-3.5%糖苷-3.5.5%糖苷-3.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.4.5.5.5.5.5.4.5.5.5.4.5.5.取毛蕊异黄酮葡萄糖苷(2.63mg)、芒柄花素(4.52mg)、芒柄花素葡萄糖苷(2.63mg)、毛蕊异黄酮(3.4mg),置5mL量瓶,加甲醇定容至刻度,即得。2.2.2加样回收后的荧光测定照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅣB)试验,吸取对照品5μL、供试品8μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,按以下展开条件((1)氯仿-甲醇(10∶1),(2)正己烷-乙酸乙酯(6∶4)分别展开,取出,晾干,氨蒸汽熏蒸后于254nm、365nm下检视荧光斑点。结果见图3。结果显示:供试品制备方法一、二与三处理后的样品主要斑点无明显差别,方法三的背景比一、二的略深,但不影响主要斑点的检视,考虑到方法三简单易行,故选此法;展开条件1可检视的特征斑点较条件2的多,且各斑点Rf值适中,故选择条件1。2.2.3黄酮类化学成分检测结果采用上述薄层鉴别方法,对收集的13批黄芪药材进行测定,结果见图4,由结果可知,除样品5、样品11外均可检出4个特征成分,初步证明毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花素葡萄糖苷可作为黄芪中异黄酮类特征成分进行测定。3不同成分的鉴别查阅《中国药典》2005年版、中药成方制剂标准及新药转正标准等中涉及黄芪中氨基酸、黄酮类成分的薄层鉴别方法,并进行归纳总结,结果详见表2。黄芪中异黄酮