脑脊液标本的细菌学检验操作规程_第1页
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单位及实验室名称 项目汉源县人民医院检验科 脑脊液标本的细菌学检验操作编号：LAB/SOP/HY/微-007日期：2010年5月3日版本：第一版，第0次修订第1页，共3页一、 【标本采集】脑脊液的采集由临床医师以无菌操作腰穿采取脑脊液3-5ml，置于无菌试管内立即送检。如做厌氧菌培养，则需将注射器针头封口，立即送检。二、 【检验方法】1、 一般细菌的培养一般细菌培养主要适用于脑脊液内的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和大肠杆菌等的分离培养。用无菌接种环挑取混浊脑脊液或经离心的沉渣，非别接种于血平板和普通肉汤培养基。经35°C培养，观察有无细菌生长。若有细菌生长，挑取可疑菌落，并涂片染色镜检。根据菌落特征、细菌形态、染色特点得出初步印象，再进一步鉴定，然后做出报告。若血平板无细菌生长，肉汤有细菌生长，则移种于血平板分离培养，按上述方法鉴定。如血平板、肉汤均无细菌生长，再延长培养数天，仍无细菌生长时，即可报告：“经培养乂天无细菌生长。”脑膜炎奈瑟菌的培养以无菌方法取脑脊液，经3000r/min,离心30min,取沉淀物立即接种于事先预温的巧克力或血平板上，置于5%-10%CO2环境中，经35°C培养18-24小时后，观察结果。若发现平板上有光滑、湿润、透明、边缘整齐、粘性的中等大小的菌落，经革兰染色为阴性双球菌者，可做出初步报告：“有脑膜炎奈瑟菌生长”。经纯培养后做糖发酵、氧化酶试验、自凝试验、血清玻片凝集试验、乳胶凝集以做出最后的鉴定。新型隐球菌的培养以无菌方法采取脑脊液标本，经离心沉淀后，取其沉淀物接种于沙保弱氏斜面或血平板培养基上，分别置于37C及25C培养。数日后可见有白色或淡褐色酵母样的菌落（如培养较久、菌落则变为湿润、粘液状），如果此时菌落用墨汁染色法染色镜检，可见有出牙的细胞及短芽管（培养时间过长则芽管可消失，荚膜形成）。杆菌菌落及染色镜检特征，可做出初步报告：“真菌培养有新型隐球菌生长。”必要时再做生化反应及动物试验等进一步鉴定。三、【检验程序】脑脊液I I I离心涂片染色 分离培养结核杆菌检查离心涂片染色 分离培养结核杆菌检查镜检I III厌氧环境培养 普通及5%-10%C02培养罗氏培养基培养取沉淀物涂片抗酸染色〔35°C18-24h 〔35°C3-4WI菌落观察

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