泡囊草不同炮制方法对ld50和离体兔肠m受体的影响

泡囊草不同炮制方法对ld50和离体兔肠m受体的影响

作为一种蒙药，“混合浩日素”被记录在西藏和蒙古医学经典著作《蒙古药物识别》中，然后记录在《辨药白晶鉴》和其他早期文献中。蒙医药理论研究表明“混-浩日素”具有杀“黏”,消肿,杀虫,镇痛,解痉,清“协日乌素”,壮阳之功效。用于“黏”性胃炎,结喉,发症,虫疾,脑刺痛,头痛,阳痿。主产于内蒙古自治区锡林郭勒阿巴嘎旗,呼伦贝尔鄂温克旗和乌兰察布市,为中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)收载的品种。蒙医一般在初夏植物生长繁茂期采全草,阴干,秋季地上部枯萎期挖根,去净泥土、晒干后采用奶制法或制膏法炮制后使用。现代药理学和临床研究表明泡囊草的有效成分,山茛菪碱、莨菪碱、东莨菪碱和阿托品具有平喘止咳,安神镇惊之功效。由于泡囊草有大毒,蒙医常将泡囊草采用奶制法或制膏法炮制后使用,但缺乏规范的炮制工艺,为使泡囊草炮制工艺规范化,据文献报道,泡囊草中其有效成分为山莨菪、茛菪碱、东莨菪碱及红古豆碱。所以我们以泡囊草中托烷类生物碱的含量为指标,采用正交设计对泡囊草的奶制和膏制工艺进行了优化,并对泡囊草生品、奶制和制膏品进行了急性毒性LD50的测定。根据LD50的测定结果,选出毒性降低较好的泡囊草奶制品与其生品进行兔离体肠实验,为泡囊草蒙药炮制工艺的规范化提供了科学的依据。1实验材料和设备1.1药品泡囊草(蒙药混-好日苏,采于锡林郭勒阿巴嘎旗)。1.2实验动物昆明小鼠SCXK(蒙2002-0001)清洁型,内蒙古大学实验动物中心提供。新西兰大耳白兔,内蒙古农业大学实验动物中心提供。1.3引物:李力数显恒温平滑肌槽:ZW-SX型(安徽传感器系统工程公司),张力换能器:JZ101型(高碑店市新航机电设备有限公司),Medlab-u/8c生物信号采集处理系统(南京美易科技有限公司)。2实验方法和结果2.1对于ld50不同类型的泡沫箱，可以进行测量2.1.1泡囊草酸奶饮片的制备①生品:取泡囊草生品100g,置圆底烧瓶中加水回流2次,每次加水600ml,回流2小时,合并滤液浓缩,醇沉后抽滤,挥去乙醇,蒸馏水定容于50ml量瓶,得样品液C=2.0g/ml。②奶制品:取泡囊草奶制品饮片100g,置圆底烧瓶中加水回流2次,每次加水600ml,回流2小时,合并滤液浓缩,醇沉后抽滤,挥去乙醇,蒸馏水定容于50ml量瓶,得样品液C=2.0g/ml。③煎膏制品:取泡囊草生品饮片100g,置圆底烧瓶中加水回流3次,每次加水600ml,回流2小时,合并滤液浓缩,醇沉后抽滤,挥去乙醇,浓缩制膏,再用蒸馏水溶解定容于50ml量瓶,得煎膏样品液相当于原药材的浓度C=2.0g/ml。2.1.2泡囊草制剂的毒性取健康小鼠,体重18～22g,♀♂各半,利用腹腔注射给药(因灌胃给药难以求得LD50)。按Bliss法,计算LD50,结果见表1。实验结果表明,泡囊草经炮制后毒性有所降低,毒性由小到大的排列顺序为:泡囊草奶制品<泡囊草煎膏制品<泡囊草生品。说明,泡囊草经奶制后毒性降低的程度优于煎膏制品,泡囊草经奶制后,确实达到降低毒性,提高安全性的作用。2.2离体兔肠实验泡囊草经奶制后,达到降低毒性,提高安全性的作用,但是对其功效会产生什么影响?为此对泡囊草奶制品与其生品进行药效学比较。由于泡囊草含有托烷类生物碱,所以选用离体兔肠试实验模型观察泡囊草奶制品与其生品对M受体的影响。2.2.1离体兔肠实验2.2.1.1样品液的制备:分别取泡囊草奶制品、生品各100g,分别置圆底烧瓶加水提取2次,每次加水600ml,提取2h,合并提取液,浓缩,置100ml量瓶中加水到刻度即得浓度各为1g/ml供试液。2.2.1.2实验方法:取空腹新西兰大耳白兔,左手执髂上部,右手握木棰,猛击枕骨部致死。迅速开腹,自幽门下6cm处煎取回肠,剪成长约2cm的小段,放入盛有台式液的培养皿内备用。将肠段两端各穿一线,一端固定于通气管的小钩上,另一端固定于换能器,放入盛有38±0.5℃台氏液的麦氏恒温浴槽内,通过换能器和Medlab-u处理系统,记录一段稳定的正常收缩曲线,然后依次加入泡囊草生品或奶制品样品液1ml、2ml、3ml,记录观察药液对离体兔肠肌的张力和收缩功能的影响。运用SPSS11.5软件包对数据进行t检验,并进行统计学分析,结果见表2。结果表明,泡囊草生品和奶制品的中、高剂量组与空白组比较,均有统计学意义,说明泡囊草生品及奶制品的中所含的托烷类生物碱均能够有效发挥M受体阻断作用,减少离体兔肠平滑肌的蠕动次数。组间T检验P>0.05,表明泡囊草生品和奶制品的高、中、低各剂量组间无显著性差异,无统计学意义。说明泡囊草经牛奶炮制后对M受体的阻断作用与生品相同。离体兔肠实验结果表明:泡囊草生品和奶制品的中、高剂量组均能有效的解除离体兔肠的平滑肌痉挛;泡囊草经牛奶炮制后所含的托烷类生物碱仍能有效发挥M受体阻断作用,减少离体兔肠平滑肌的蠕动次数。3泡囊草奶制的安全性评价蒙药泡囊草经炮制后其毒性的变化规律为,奶制品<煎膏制品<生品。说明:泡囊草经牛奶炮制后毒性降低的程度优于煎膏制品,泡囊草经牛奶炮制后,确实达到降低毒性,