【实用资料】专题二微生物的培养和应用PPT

专题二微生物的培养和应用温度特殊营养物质如生长因子：微生物生长必需，而自身不能合成的化合物，如：维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶等。(3)种类：按功能分为种类制备方法原理用途举例选择培养基加入某些特殊的化学物质依据微生物对某些物质的依赖性或抗性而设计从多种微生物中分离出所需微生物加入青霉素杀死细菌,进而分离得到酵母菌和霉菌等鉴别培养基加入某种指示剂或化学药品依据指示剂或化学药品产生特定颜色或其他变化从多种微生物中鉴别出某些种类的微生物用刚果红培养基鉴别分解纤维素的微生物(3)种类：按化学组成分为合成培养基和天然培养基注意(1)并不是所有培养基的营养成分都相同。①自养微生物能够利用空气中的CO2合成有机物,培养基中不需加入有机碳源(可加入无机碳源)。②固氮微生物能够固定空气中的N2,合成氨态氮,培养基中不需添加氮源。(2)培养基中不同的营养成分可以由同一物质提供,有些物质,如NH4HCO3,既是氮源也是某些自养生物的碳源。（4）消毒与灭菌条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培养基及相关容器3.大肠杆菌纯化培养计算称量溶化灭菌倒平板根据配方比例准确称取各成分玻棒不断搅拌，防止琼脂糊底导致烧杯破裂培养基（高压蒸汽灭菌）、培养皿（干热灭菌）见教材P17（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基倒平板技术(3)种类：按功能分为A．一个平板，统计的菌落数是230酒精灯与培养皿距离要合适,移液管管头不要接触任何物体。(1)第一次操作：。(1)第一次操作：。观察到单个细菌,但不能区分死菌与活菌，导致统计的数值比真实数值偏大答：凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入凝结水珠培养基，造成污染。C．三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平均值260答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。设置重复组取平均值计数;计数菌落数在30～300用刚果红培养基鉴别分解纤维素的微生物稀释涂布平板法:是将菌液进行一系列的，然后将

的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入凝结水珠培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（2）纯化大肠杆菌Ⅰ、平板划线法原理：

最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。操作流程灼烧接种环冷却

划线（第一区域）蘸取菌液灼烧接种环冷却

划线（第二区域）灼烧接种环冷却

划线（第三区域）灼烧接种环冷却

划线（第四区域）灼烧接种环冷却

划线（第五区域）灼烧接种环平板倒置放置培养①接种环的灼烧。(1)第一次操作：

。(2)每次划线之前：杀死

残留的菌种，使

的菌种直接来源于上次划线的末端。(3)划线结束后：杀死

，避免细菌污染环境和感染操作者。②灼烧接种环之后,要冷却后再进行操作,以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力要大小适当,不能用力过大将培养基划破。菌落：在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的种群。菌落是区分菌种的种的重要依据。Ⅱ.稀释涂布平板法:是将菌液进行一系列的

，然后将

的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的菌落。①稀释操作时,每支试管及其中的9mL水、移液管等均需灭菌;操作时,试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。②涂布平板时。a.涂布器用体积分数为70%的酒精消毒,取出时,让多余酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。b.不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中,以免引燃其中的酒精。c.酒精灯与培养皿距离要合适,移液管管头不要接触任何物体。不同稀释度1、梯度稀释2、涂布平板（3）两种纯化细菌方法优缺点的比较4.微生物的计数：原理方法缺点显微镜直接计数法利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量用血细胞计数板计数观察到单个细菌,但不能区分死菌与活菌，导致统计的数值比真实数值偏大活菌计数法

(间接计数法)当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌设置重复组取平均值计数;计数菌落数在30～300之间的平板由于可能存在多个活菌堆叠在一起长成一个菌落,导致活菌计数法推算所得数值要比真实数值偏低。(3)种类：按功能分为(3)种类：按化学组成分为合成培养基和天然培养基用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源①稀释操作时,每支试管及其中的9mL水、移液管等均需灭菌;操作时,试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)专题二微生物的培养和应用用刚果红培养基鉴别分解纤维素的微生物加入青霉素杀死细菌,进而分离得到酵母菌和霉菌等当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的菌落。观察到单个细菌,但不能区分死菌与活菌，导致统计的数值比真实数值偏大①自养微生物能够利用空气中的CO2合成有机物,培养基中不需加入有机碳源(可加入无机碳源)。当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。加入某些特殊的化学物质（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基考点二微生物的分离把未接种的空白培养基放在适宜条件