实验1-蛋白质性质一

实验一蛋白质的性质实验

蛋白质及氨基酸的呈色反应蛋白质的沉淀反应1.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。2.加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识，了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。【目的和要求】（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应

双缩脲在碱性条件下可与Cu2+结合生成复杂的紫红色化合物。此反应称为双缩脲反应。

蛋白质或二肽以上的多肽分子中，含有多个与双缩脲结构相似的肽键，因此也有双缩脲反应，可用此法鉴定蛋白质的定性和定量。1.双缩脲反应【实验原理】水合茚三酮还原茚三酮紫色物质注意：脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质。此反应用于定性、定量鉴定氨基酸。2.茚三酮反应

(二)蛋白质的沉淀反应

蛋白质分子由于形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒。

在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷、脱水，甚至变性而丧失稳定因素，即以固态形式从溶液中析出，这种作用称为蛋白质的沉淀反应。蛋白质H2OH2OH2OH2O++++(pH>pI)1.可逆沉淀反应

在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但其分子内部结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质。沉淀因素除去后，蛋白质沉淀可再溶于原来的溶剂中。这种沉淀反应称为可逆沉淀反应。盐析作用脱去水化层电荷被中和低温下乙醇或丙酮对蛋白质的短时间作用等电点沉淀用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程。

在发生沉淀反应时，蛋白质的分子内部结构，空间构象遭到破坏，失去其天然蛋白质的性质，这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中，这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。2.不可逆的沉淀反应重金属盐有机溶剂生物碱试剂过酸、过碱加热、震荡、超生波【实验方法】双缩脲反应:

取少量尿素结晶，加入干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后加入10滴双缩脲试剂，混匀,观察颜色变化。另取1支试管，加入卵清蛋白溶液1ml再加入5滴双缩脲试剂，混匀，观察颜色变化。2.茚三酮反应

取2支试管，分别加入卵清蛋白溶液和0.5%甘氨酸溶液4滴，再加入2滴0.1%茚三酮乙醇溶液，混匀，在沸水浴中加热1-2分钟，放置冷却，观察颜色变化，并比较蛋白质和氨基酸呈色深浅。3.蛋白质的盐析作用

取1支试管，加入3ml蛋白质-NaCl

溶液和3ml饱和硫酸铵溶液，混匀，静置10分钟，球蛋白则沉淀析出。过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，至粉末不再溶解，析出的沉淀为清蛋白。静置，弃上部清液，取部分清蛋白沉淀加水稀释，观察它是否溶解。4.重金属沉淀蛋白质取1支试管，加入约1ml卵清蛋白质液，加入2%硝酸银溶液1滴，观察沉淀的生成。5.有机酸沉淀蛋白质

取1支试管，加入卵清蛋白质液约0.5ml，然后滴加10%三氯乙酸溶液数滴，观察沉淀的生成。

1.酒精灯加热试管时，试管口勿对人。2.浓硝酸滴加时小心，勿伤人及桌面。3.试剂用完及时盖上盖，防止挥发。4.观察现象时，随加随摇，及时记录。5.药品放回原处，清点自己物品。【注意事项】1.如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反应呈阴性结果，此作何结论?2.茚三酮反应的阳性结果是否经常是同一色调?