稳定的新型雷贝拉唑钠肠溶微丸

稳定的新型雷贝拉唑钠肠溶微丸顾鑫;邓盛齐;张亦斌;李楠;陶静;郑林【摘要】目的制备在肠道内更稳定的可释放两次的雷贝拉唑钠.方法用挤出滚圆法制备雷贝拉唑钠载药微丸丸芯并优化其处方及工艺.载药丸芯包裹隔离层后分别包裹两种肠溶层，制成雷贝拉唑钠肠溶微丸，混合后对释放度和稳定性进行测定结果载药丸芯处方为10%无水碳酸钠,10%甘露醇,20%雷贝拉唑钠,20%低取代羟丙基纤维素,40%微晶纤维素，以5%羟丙基甲基纤维素的水-乙醇(65:35,W/W)溶液为黏合剂.以欧巴代胃溶型包衣液为隔离层，增重8%,欧巴代肠溶型94系列和尤特奇S100包衣材料为肠溶层，增重15%和20%,得到的微丸含量为97%.混合微丸在pH6.8的磷酸盐缓冲液中60min释放度为40%,120min释放度为70%,在pH8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液中60min释放度大于80%,且较为稳定.结论成功制备了雷贝拉唑钠肠溶微丸,可在更稳定的pH环境下释放，并具有潜在的两次释放的特征【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷)，期】2016(041)012【总页数】7页(P935-941)【关键词】雷贝拉唑钠;载药丸芯;肠溶微丸;两次释放【作者】顾鑫;邓盛齐涨亦斌;李楠;陶静;郑林【作者单位】成都抗生素创制工程技术研究中心，四川抗菌素工业研究所，成都大学,成都610052;成都抗生素创制工程技术研究中心，四川抗菌素工业研究所，成都大学,成都610052;成都抗生素创制工程技术研究中心，四川抗菌素工业研究所，成都大学,成都610052；成都抗生素创制工程技术研究中心，四川抗菌素工业研究所，成都大学,成都610052;成都抗生素创制工程技术研究中心，四川抗菌素工业研究所，成都大学,成都610052;成都抗生素创制工程技术研究中心，四川抗菌素工业研究所，成都大学,成都610052【正文语种】中文［中图分类】R9雷贝拉唑(rabeprazole)属于质子泵抑制剂(protonpumpinhibitors,PPIs)，主要用于胃溃疡、十二指肠溃疡、反流性食管炎、卓-艾氏(Zollinger-Ellison)综合征等的治疗。雷贝拉唑由日本卫材公司(Eisai)研究开发，于1997—1998年在日本上市，商品名为波利特(Pariet)，由于其具有抑制胃酸分泌效果、药物相互作用小、重复给药后体内不产生蓄积、可抑制幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，HP)等优势而被广泛应用［1-2］。目前应用的雷贝拉唑产品主要为雷贝拉唑的钠盐制剂。雷贝拉唑钠(rabeprazolesodium，RS)的结构如图1所示，由于其结构中含有亚磺酰基，在酸性甚至中性条件下易降解，因此目前上市产品以肠溶片剂、胶囊剂及注射剂为主。但由于普通的雷贝拉唑钠肠溶片剂易导致〃夜间酸突破”现象(正常使用PPIs后，在夜晚22时至次日8时之间，由于胃酸的分泌在夜间增多，胃内pH<4.0且持续超过1h，从而引起不适症状)［3］，同时，雷贝拉唑钠在酸性甚至偏中性条件下不稳定，在pH6.8环境中易降解(表1),而市售及在研究的雷贝拉唑钠肠溶片及微丸多为尤特奇L30D-55包衣，此材料在pH>5.5时即可溶解并释放药物，因此对雷贝拉唑钠的稳定性会产生一定影响。而尤特奇S100为pH7.0以上溶解并释放药物，因此在体内释放环境下，其稳定性更优。因此，本研究为了提高雷贝拉唑钠的稳定性及解决〃夜间酸突破”的现象，参照北美武田公司上市的右旋兰索拉唑双相控释胶囊（dexlansoprazoleMR）[4],通过包裹不同肠溶层的方法，将低pH敏感和高pH敏感的雷贝拉唑钠肠溶微丸按1:3的比例混合，使得一部分先在十二指肠及小肠前段pH较低的环境释放，率先缓解症状，另一部分在远端小肠等pH较高的环境下释放，一方面保证了雷贝拉唑钠的稳定，另一方面可以在夜间胃酸分泌高峰时第二次释放药物，防止发生〃夜间酸突破”的现象。Mini-250型多功能制丸包衣机（深圳市信宜特科技有限公司），LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津株式会社），ZRS-8G智能溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司），FE20实验室pH计（梅特勒-托利多国际股份有限公司），ZNCL-GS磁力搅拌器（郑州汇成科工贸有限公司），AE200分析天平（梅特勒-托利多国际股份有限公司），AS3120超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）。雷贝拉唑钠（济南宏方德医药科技有限公司，批号：20150526，20150701），微晶纤维素（MCC，安徽山河药用辅料股份有限公司），甘露醇（广州市升彤贸易有限公司），低取代羟丙基纤维素（L-HPC，日本曹达株式会社）、粉状纤维素（PC，德国瑞登梅尔），无水碳酸钠（Na2CO3，天津市博迪化工有限公司），淀粉（成都恒信淀粉有限公司），羟丙甲纤维素（HPMCE5，上海卡乐康包衣技术有限公司），欧巴代胃溶型及肠溶型94系列（上海卡乐康包衣技术有限公司），尤特奇S100（德国赢创），滑石粉（Talc，广西龙胜华美滑石开发有限公司），柠檬酸三乙酯（TEC，阿拉丁试剂），三羟甲基氨基甲烷（THAM）、磷酸钠、盐酸（成都市科龙化工试剂厂）。2.1含量测定方法2.1.1色谱条件色谱柱：DiamonsilC18色谱柱（4.6mmx200mm,5pm）;流动相：0.015mol/L磷酸氢二钠（磷酸调节pH至6.0）-乙腈（65:35）;流速：1.0mL/min;检测波长：290nm;柱温：30°C;进样量：10"，自动进样。2.1.2线性及精密度试验精密称量RS原料药25mg，分别配制成含有RS的浓度为0.5和1mg/mL的储备液，用溶剂稀释成浓度分别为25、50、75、100、125和150pg/mL的溶液，按照“2.1.1”项下条件进行测定，记录峰面积。以峰面积(A)和浓度(c)进行线性回归，得回归方程为A=19108c-6905.7,R2=0.9998。同上配制RS的浓度为75、100和125pg/mL的溶液，每个浓度连续进样5次，记录峰面积，得到日内RSD分别为0.78%,0.46%和0.66%。2.1.3测定方法参照《中国药典》2015版二部中雷贝拉唑钠肠溶胶囊的含量测定方法[5],取RS的载药丸芯或包衣微丸，相当于含RS25mg，置于25mL容量瓶中，倒入20mL0.05mol/LNaOH-乙腈(60:40)的溶剂，超声使微丸破碎，冷却后加溶剂溶解并稀释至刻度；3000r/min离心5~10min，用移液管精密量取上清液1.00mL置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，注射器吸取溶液，经0.45pm微孔滤膜过滤后，将续滤液注入进样瓶中，作为供试液。精密称定RS原料药25mg，置于25mL容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，用移液管精密量取1mL置于10mL容量瓶中，加溶剂定容，注射器吸取溶液，经0.45pm微孔滤膜过滤后，将续滤液注入进样瓶中，作为对照品溶液。按照“2.1.1”项下条件进行测定，记录峰面积，外标法计算含量。2.2肠溶微丸耐酸力测定参照《中国药典》2015版二部中雷贝拉唑钠肠溶胶囊的耐酸力测定方法，取RS肠溶微丸150mg，按照溶出度测定法(通则0931第二法)，以0.lmol/L盐酸溶液700mL为溶出介质，温度37^,转速100r/min,120min后，取出小丸，用水迅速洗去残余酸液，按照“2.1”项下方法测定含量。2.3释放度测定方法pH6.8磷酸盐缓冲液中的释放度参照《中国药典》2015版二部中雷贝拉唑钠肠溶胶囊的溶出度测定方法，称取RS肠溶微丸500mg，以0.1mol/L盐酸溶液750mL为溶出介质，温度为37°C,转速为100r/min,120min后，随即在操作容器中加人37C的0.2mol/L磷酸钠溶液250mL,用2mol/L盐酸溶液或2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，转速不变，分别在5、10、15、30、45、60、90、120和150min后，取溶液经0.45pm滤膜滤过，精密量取续滤液3.00mL，加入到含有1.00mL的0.5mol/L氢氧化钠溶液的西林瓶中，摇匀，滤过后作为供试品溶液；另精密称RS原料药25mg，置25mL容量瓶中，用0.5mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，精密量取3.00mL置10mL容量瓶中，0.5mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，精密量取1mL,加入磷酸盐缓冲液3mL,摇匀后滤过，作为对照品溶液。载药丸芯则直接在900mLpH6.8磷酸盐缓冲液中进行释放度测定。按照“2.1”项下方法计算释放度。pH8.0THAM缓冲液中的释放度参照《中国药典》2015版二部中雷贝拉唑钠肠溶胶囊的溶出度测定方法，称取RS肠溶微丸500mg，以0.1mol/L盐酸溶液700mL为溶出介质，温度为37C,转速为100r/min,120min后，随即在操作容器中加入37C的0.6mol/LTHAM溶液300mL,用2mol/L盐酸溶液或2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.0，温度转速不变，分别在5、10、15、30、45、60和90min后，取溶液经0.45pm滤膜滤过，精密量取续滤液3.00mL,加入到含有1mL的0.5mol/L氢氧化钠溶液的西林瓶中，摇匀，滤过后作为供试品溶液；另精密称取RS原料药25mg，置25mL容量瓶中，用0.5mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，之后精密量取3.00mL置10mL容量瓶中，0.5mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，精密量取1.00mL,加入THAM缓冲液3mL,摇匀后滤过，作为对照品溶液。载药丸芯则直接在900mLpH8.0THAM缓冲液中进行释放度测定。按照“2.1”项下方法，计算释放度。2.4载药丸芯制备工艺筛选挤出滚圆法制备微丸需要先将软材通过筛板挤出成条状物，之后置于滚圆桶内经过高速转动使条状物打断，形成直径与长度相当的短圆柱形，并在转动过程中相互摩擦挤压形成微丸［如图2(A)所示］，涉及到的主要工艺参数为挤出转速、滚圆转速和时间、干燥温度和时间。2.4.1挤出转速挤出转速决定了挤出条状物的密度及均一度。当挤出转速过小时，挤出时间过长，软材中的水分及有机溶剂损失增加；而挤出转速过大又会导致挤出的条状物密度不均且表面粗糙，此两种情况均会影响微丸收率及圆整度［6］。按“2.5.1”项下操作方式对处方1进行试验，初步确认挤出转速为25~35r/min。2.4.2滚圆转速和时间滚圆转速和时间是挤出滚圆操作过程中最重要的参数，对微丸的收率及圆整度有着很大的影响。当滚圆转速过低，挤出的条状物无法被甩断，导致产品中哑铃型和双球形微丸增多(图2B)；滚圆转速过高时，又容易将条状物甩碎，造成大量损失甚至导致条状物皆碎为粉末。按“2.5.1”项下操作方式对处方1进行试验，初步确定滚圆转速为1400~1700r/min。滚圆时间过短时，微丸圆整度不佳，滚圆时间过长，微丸相互之间容易聚合，形成粒径更大的微丸。按“2.5.1”项下操作方式对处方1进行试验，初步确定滚圆时间为1~4min。2.4.3干燥温度和时间由于RS载药丸芯在未干燥的条件下易降解变为黄色或黄绿色，且RS在湿热条件下不稳定，因此综合考虑初步选择干燥进风温度为35~45°C，干燥时间为0.5~2h。2.5载药丸芯处方组成2.5.1处方筛选根据预试验，RS原料药粉末不适宜直接挤出滚圆制备微丸，需要加入MCC保证成球性，但MCC的加入会带来药物释放缓慢的问题，因此需要加入甘露醇和L-HPC等致孔剂［6］和崩解剂，同时由于RS在碱性条件下稳定，需加入Na2CO3等作为稳定剂［8-9］。初步拟定处方，进行处方筛选，拟定处方如表2所示。通过预实验，确定黏合剂中HPMCE5用量为3%~5%，黏合剂溶剂中乙醇:水(W/W)的量为20:80~35:65。根据表2中的处方，分别称取各项辅料与RS原料药共计50g，在室内相对湿度(RH)小于70%的条件下混合过筛，之后加入适量的黏合剂(质量分数为5%HPMCE5的乙醇-水(30:70,W/W)溶液)，制成软材后投入多功能制丸包衣机中，冷却水循环条件下30r/min挤出(孔径为1.0mm),1400r/min滚圆2min，之后在40°C条件下干燥2h，进/出风转速600r/min，制得RS载药丸芯。用16目和24目筛网筛分载药微丸，收集16~24目微丸并称重，计算其占产品的收率(f),按“2.1”项下含量测定方法测定各处方载药丸芯中RS的含量(3),结果如表3所示。由表2的结果所知，除处方2和5收率过低外，其余处方收率相当，综合考虑含量后，对处方4、处方6和处方7按“2.3.2”项下方法测定释放度，结果3个处方60min释放度分别为65.2%、78.3%和88.5%，因此选定处方7作为载药丸芯的处方。2.5.2载药丸芯处方优化以处方7为试验处方，以甘露醇-MCC比例、黏合剂中HPMCE5质量分数、黏合剂中乙醇-水的质量比、黏合剂用量占RS原料药与辅料混合粉末的比例(W/W)为因素，拟定L9(34)正交试验表(表4),按照“2.5.1”项下操作方法制备载药丸芯，以20-24目球形微丸收率为指标进行试验，结果如表5所示。根据正交试验结果，结合3号实验组与8号实验组的丸芯含量及pH8.0释放度数据（表7）,最终选定A3B2C3，即甘露醇：MCC为10:40,HPMCE5占黏合剂质量分数为4%，乙醇:水为35:65，由于黏合剂用量对微丸收率影响较大，且收率与黏合剂用量呈正相关，通过试验确定黏合剂用量为75%。2.6载药丸芯的制备根据选定处方、黏合剂组成及用量，将投料量增至200g，对载药丸芯的挤出滚圆工艺进行考察，最终确定挤出转速为30r/min，滚圆转速为1600r/min，滚圆1min，之后1000r/min滚圆3min，干燥温度为40°C，干燥2h。用优化过的处方及工艺制备3批载药丸芯，20~24目载药微丸收率分别为76.0%、79.4%和74.6%，微丸中RS含量为97.4%、98.3%和98.7%。2.7包裹隔离层及肠溶层2.7.1包裹隔离层将32g欧巴代胃溶型包衣材料缓慢加入到搅拌中的294.4g无水乙醇中，之后加入73.6g的去离子水，持续搅拌60min后得到隔离层包衣液。将300g的20-24目载药丸芯投入到多功能制粒包衣机中，滚圆转速150r/min,进/出风转速1200r/min，进风温度41-45C，雾化压力0.14MPa，包衣液流速为3g/min，在包衣液持续缓慢搅拌的条件下侧喷包衣，之后40C进风干燥10min，完成隔离层包衣。制作3批，分别增重3%、5%和8%。之后分别按“2.7.2”项下方法包裹欧巴代肠溶型94系列和尤特奇S100，增重10%。最后按“2.1”项下方法测定微丸中RS含量（表8），确定隔离层增重为8%。2.7.2包裹肠溶层将60g欧巴代肠溶型94系列材料在搅拌的条件下加入到432g无水乙醇和108g去离子水中，缓慢搅拌60min，过80目筛，作为低pH敏感的肠溶层包衣液。将44g尤特奇S100在搅拌的条件下缓慢加入到139.6g去离子水中，之后滴加1mol/L氨水4.4g，搅拌1h后滴加TEC20g，再搅拌1h作为A液。另取过240目的滑石粉（滑石粉粒径为1000目）12g，加入到180g的去离子水中，高速剪切10min后，搅拌条件下加入到A液中，持续缓慢搅拌45min，过80目筛，作为高pH敏感的肠溶层包衣液。取包裹过隔离层的20-24目微丸300g，投入多功能制丸包衣机中，滚圆转速150r/min，进/出风转速800r/min，进风温度35~40°C，雾化压力0.1MPa，包衣液流速为2.6g/min，在包衣液持续缓慢搅拌的条件下侧喷包衣，之后40C进风干燥10min，完成肠溶层包衣。低pH敏感和高pH敏感包衣各制作3组，分别增重10%、15%和20%。之后按“2.2”项下方法测定微丸中RS含量（表9）,最终确定肠溶层增重为15%和20%。2.8肠溶微丸的释放度测定按“2.6~2.7”项下方法各制作3批RS肠溶微丸（低pH敏感的批号为111301,111302,111303;高pH敏感的批号为112001,112002,112003），按“2.1”项下测定含量分别为98.0%、97.6%、97.9%和97.5%、98.3%、98.2%。将3批两种不同pH敏感的微丸分别按照低pH-高pH为1:3的比例混合（111301-112001,111302-112002,111303-112003）,制作3组，并按“2.3”项下方法进行释放度测定，结果如图4所示。混合微丸在pH6.8的磷酸盐缓冲液中60min释放度为40%,120min释放度为70%;在pH8.0THAM缓冲液中60min释放度大于80%。由数据可知，高pH敏感的肠溶微丸在pH6.8磷酸盐缓冲液中延后释放，预示着在肠道内随着pH的增高，低pH敏感的微丸先释放，高pH敏感的微丸后释放，其释药将呈现出两次释放的特点。2.9肠溶微丸的影响因素试验将批号为111301和112001的微丸置于称量瓶中，分别在光照（4500±500）Lx、高温(40±2)°C,RH(40±10)%;(60±2)°C,RH(40±10)%、高湿RH(75±5)%,(25±5)°C条件下放置，并于第0、5、10和30天取样，按“2.1”及“2.3.2”项下方式进行含量和pH8.0THAM缓冲液中60min时的释放度测定，结果见表10。由上表可知，雷贝拉唑钠肠溶微丸在光照及40C条件下较稳定(光照条件下30d含量下降0.3%和0.3%,40°C条件下30d含量下降为0.4%和0.5%);在60C及相对湿度75%条件下含量略有下降(在60C条件下30d含量下降3.2%和2.4%,相对湿度75%条件下30d含量下降1.6%和1.5%)，因此建议在阴凉干燥处存放。本试验通过挤出滚圆法制备了雷贝拉唑钠载药丸芯，以欧巴代胃溶型材料作为隔离层，分别以欧巴代肠溶型94系列和尤特奇S100作为肠溶层，制备了雷贝拉唑钠肠溶微丸，对处方及工艺进行了优化，将两种微丸混合后在不同pH条件下对释放度进行了测定，并对微丸进行了影响因素初步考察。雷贝拉唑钠在酸性条件下易降解，因此需做成肠溶制剂，同时加入无水碳酸钠起到调节pH的作用，使微丸中的雷贝拉唑钠更加稳定。挤出滚圆法制备载药丸芯时，对丸芯的处方、黏合剂处方及用量要求较为严格，黏合剂使用了水-乙醇作为溶剂[10],更加有利于软材的挤出滚圆，提高收率。并且由于雷贝拉唑钠具有易吸湿、湿热不稳定的性质，在载药丸芯制备过程中需注意湿度及温度的控制，干燥时应逐步升温，严格控制含水量，并选择在阴凉干燥的环境下贮存。用低pH敏感的欧巴代肠溶型94系列和高pH敏感的尤特奇S100作为肠溶层的包衣材料，制备了不同pH环境下释放的肠溶微丸，可将两种不同pH敏感的微丸按比例装于胶囊中口服给药。这一举措可以提高雷贝拉唑钠在释放环境中的稳定性，同时具有潜在的两次释放的特点，能改善普通剂型“夜间酸突破”的现象。挤出滚圆法在微丸制备方面具有独特的优势，如产量大，效率高，更经济，制得的颗粒粒径可从0.3至30mm，且粒径分布更窄，微丸中药物含量高且分布均匀，并可通过调整处方或微丸包衣制成缓控释的微丸，因此被广泛研究与应用[10]。张雪等[12]对挤出滚圆法制备微丸过程中软材的物理性质的表征方法进行了研究，