微生物的分离和培养高三生物一轮复习

专题二微生物的分离和培养【考纲考点】考试说明等级要求微生物的分离和培养A微生物的分离和培养ADNA的粗提取与鉴定B近五年江苏高考关于本章的考察情况：0921和23考察DNA的鉴定和提取1032考察DNA粗提取的相关探究活动的实验设计1119考察DNA的粗提取与鉴定1218考察DNA粗提取与鉴定134DNA粗提取与鉴定，18微生物的培养方法命题趋势由上述的分析可以看出这部分知识在每年的生物高考题都有出现，且主要集中在对DNA粗提取与鉴定试验的考察。微生物的知识由于在13年考试说明中新添加，其考察的知识点主要以微生物培养和分离的方法知识为主。因此复习备考的过程中，要注意加强这部分相关知识的学习。第一讲微生物的分离和培养学习目标：1.简述培养基的用途和分类2.说出培养基的基本成分3.简述无菌技术的概念含义4.尝试制备牛肉膏蛋白胨培养基5.尝试通过平板划线法纯化一种微生物微生物的类群原生生物原核生物真菌病毒如酵母菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻原核细胞基础知识梳理一.培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。（2）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。（3）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（一）分类：(微生物生存的环境和营养物质)(1)固体培养基、液体培养基和半固体培养基①固体培养基：（观察菌落和分离提纯微生物）在一般培养温度下呈固体状态的培养基。一类是用天然的固体状物质制成的，如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成的培养基，酒精厂、酿造厂等常用这种培养基；另一类是在液体中添加凝固剂而制成的，如实验室中常用的琼脂固体斜面和固体平板培养基。这种培养基广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。②液体培养基或培养液或发酵液：（工业大规模培养）呈液体状态的培养基。液体培养基因营养物质分布均匀，与菌体表面接触充分，还能大量溶解微生物的代谢产物等优点，广泛用于微生物的生理、代谢研究以及大规模的工业化生产中。③半固体培养基：（观察微生物的运动）

加入少量的凝固剂(如0.2％～0.5％的琼脂)而制成的培养基。这种培养基常用于观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定等。（2）天然培养基和合成培养基①天然培养基：（工业生产降低成本）主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富，培养效果良好，缺点是成分复杂，来源受限。天然培养基/液的种类很多，包括生物性液体（如血清）；组织浸液（如胚胎浸液）；凝固剂（如血浆）等。②合成培养基：（菌种的分类，鉴定，营养、代谢，遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究）是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的。其所含的成分（包括微量元素在内）以及他们的量都是确切可知的。（3）选择培养基和鉴别培养基：①选择培养基：配制特点：添加或减少某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需微生物的生长。从而使后者从含有杂菌的标本中分离出。（即筛选你所需要培养的微生物，令其生长，其余微生物不生长）例如：(1)基本的培养基通过加青霉素，实现分离纯化酵母菌、霉菌；

（2）加高浓度的食盐分离纯化金黄色葡萄球菌（有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长）

（3）无氮培养基可分离纯化固氮菌（固氮细菌）。

（4）不含有机碳的培养基可分离纯化自养型细菌如硝化细菌。

②鉴别培养基：配制特点：在培养基中加入某种指示剂或化学药品，以鉴别不同种类的微生物。（即只能鉴别出你此种微生物是不是你所需要的微生物，而不能抑制其余种类的微生物生长）例如：伊红美蓝培养基（1）用途：伊红美篮培养基一般用于检测饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。（2）原理：伊红为酸性染料，美篮为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美篮结合形成紫黑色菌落，并带有金属光泽。例1、要将土壤中的自生固氮菌（如原褐固氮菌）与其它细菌分离出来，应将它们接种到（

）A．加入指示剂的鉴别培养基

B．含有蛋白胨的固体培养基C．没有有机氮的选择培养基

D．营养要素全面的液体培养基练一练C例2、某同学在做微生物实验时，不小心把原褐固氮菌和酵母菌混在一起，为了得到纯度较高的酵母菌，配制好的培养基中应再加入

（

）A．高浓度的食盐

B．硝酸盐C．伊红美蓝溶液

D．青霉素例3、在培养金黄色葡萄球菌时污染了青霉菌，青霉菌菌落周围区域内金黄色葡萄球菌不能生存。下列相关叙述错误的是

（

）A．青霉菌和金黄色葡萄球菌之间的关系为竞争B．要保留金黄色葡萄球菌，可用含高浓度食盐的培养基进行选择C．若金黄色葡萄球菌仍然生存，可能发生了抗青霉素的基因突变D．补充适合金黄色葡萄球菌的营养能保存该菌DD（二）培养基配制原则：（1）目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。（3）pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同。细菌pH为：6.5-7.5（偏碱）；放线菌pH为：7.5-8.5；真菌pH为：5.0-6.0（偏酸）。微生物需要的四大类营养要素物质是：（三）培养基的构成1.碳源2.氮源3.无机盐4.水凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。①无机碳源：CO2；NaHCO3；碳酸盐等②有机碳源：糖类、脂肪酸、蛋白质、花生粉饼、石油等⑴概念⑵来源：⑶不同微生物所利用的碳源不同：1.微生物的碳源异养型微生物的碳源为：含碳有机物（有机碳）自养型微生物的碳源为：含碳无机物（无机碳）①无机氮源：N2、NH4+氨盐、NO3-硝酸盐、NH3。②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。2.微生物的氮源⑴概念：⑵来源：⑶固氮微生物所利用的氮源是：3.特殊要求培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(微生物生长不可缺少的微量有机物）如维生素、某些氨基酸、碱基)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。氮气碳源、氮源、生长因子的比较来源常用原料功能碳源CO2、NaHCO3、糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等糖类构成细胞物质和一些代谢产物，有些还是异养生物的主要能源物质氮源N2、NH3、铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏和蛋白胨等铵盐、硝酸盐等合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基酶、核酸等的组成成分牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类。的水溶性物质。牛肉膏为微生物提供碳源、氮源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素。1.无菌范围：①实验操作空间,操作者的手、衣着消毒.②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行.④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触.超净工作台二.无菌技术：防止外来杂菌的污染耐高温需保持干燥的物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121℃、15～30min2.消毒与灭菌：1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g三.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：1mol／lNaoH调制微碱5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌落倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，