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动物微生物应用技术任务二：病毒的培养技术一、病毒增殖以自身基因组为模板，借助宿主细胞的酶类，复制出病毒的基因组，病毒的基因组经过编码产生大量的病毒蛋白质，经过装配，形成子代病毒。复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配与释放。病毒本身没有独立的蛋白合成酶系统，必须借助宿主细胞的蛋白合成体系合成病毒蛋白。39/18/2023病毒的增殖过程9/18/20234成熟脱壳早期蛋白DNA复制核酸游离晚期蛋白吸附穿入释放装配一、病毒增殖吸附——病毒与细胞接触，依赖病毒吸附点，通过包膜表面或表面的配体蛋白与相应的受体结合；穿入——融合（有包膜）、吞饮（无包膜）、直接穿入；脱壳——宿主细胞溶酶体作用下，衣壳破裂、释放核酸；生物合成——随核酸类型而异(复制、转录、翻译)；装配——子代病毒核酸和结构蛋白组装成病毒核衣壳。核内装配、核外装配；释放——离开宿主细胞，出芽、挤破、细胞分裂。9/18/20235一、病毒增殖脊椎动物病毒繁殖1.吸附:病毒通过刺突与细胞受体特异结合吸附到寄主细胞上2.侵入:病毒被吞噬到囊泡中,囊膜破裂,病毒核酸被释放到细胞质。3.脱壳和生物合成:在病毒基因控制下,细胞合成新病毒的基本成分，核酸、衣壳粒蛋白和刺突蛋白。4.成熟装配:刺突蛋白整合到形成病毒囊膜的细胞膜中,核酸和衣壳粒蛋白装配成核衣壳。5.释放:有囊膜病毒以出芽方式离开细胞膜,携带着含刺突的囊膜。成熟的病毒粒子具侵染性。9/18/20236动物接种病毒通过注射、口服等途径进入易感动物体内并大量繁殖，使动物产生特定反应。要求：被接种的实验动物健康。血清中无相应的病毒抗体。用途：病原学检查、传染病的诊断、抗血清制造及疫苗效力检验。缺点：实验动物难于管理、成本高、个体差异大。9/18/20237二、病毒人工培养鸡胚培养法病毒接种于鸡胚后，观察病毒的增值情况，可根据鸡胚的病变和病毒抗原检测等方法进行判断。要求：鸡胚健康、不含特异性病毒抗体、SPF鸡胚。接种途径：绒毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊等用途：病毒的分离、鉴定、病毒复制、制备抗原和疫苗。9/18/20238二、病毒人工培养细胞培养法在体外利用离体的活细胞进行病毒培养的方法。能导致细胞病变（变形）或者出现血细胞吸附和血凝现象。细胞：原代细胞、二倍体细胞株、传代细胞。用途：病毒的分离、增值，病毒抗原疫苗制备，中和试验、病毒空斑测定、克隆纯化等。优点：离体活细胞不容易受机体免疫力影响，病毒易于生长；可人工选择多种敏感细

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