石蜡切片步骤及注意事项

石蜡切片步骤及注意事项时间：2009-08-2008:22来源:生物吧作者:刘浩点击：394次•取材和固定：处死动物后立即切取组织块，并快速投入固定液中。•脱水和透明：80%酒精(min)95%酒精I(min)95%酒精II(min)无水酒精I(min)无水酒精II•取材和固定：处死动物后立即切取组织块，并快速投入固定液中。•脱水和透明：80%酒95%®»I(min)无水®精I(min)二甲苯1、II精(min)95%酒精II(min)无水酒精11(min)(min)<2mm45-60 45-6045-602-4mm60-120 60-12060-1204-5mm<2mm45-60 45-6045-602-4mm60-120 60-12060-1204-5mm120-240120-240120-24015-303060注意事项:1.脱水应彻底，否则材料不能透明，影响石蜡的浸入，致使难以切片。在低浓度或纯酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。如需过夜，应停留在70%酒精中。使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分进入。•浸蜡和包埋：浸蜡：将透明的组织放入蜡杯（I）一蜡杯（II）一蜡杯（III）。浸蜡时间视材料大小而定，一般总的浸蜡时间为2-4小时左右。包埋：1.组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。从恒温箱取出置于三角架上，其下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。准备好包埋框，将包埋用的镊子在酒精灯上加温（防止镊子粘蜡）后，左手持蜡杯，右手把加温的镊子放在蜡口（直立状）倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内，切面朝下放正置入框底并轻轻压平，以保证不再有气泡。待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡块冷至蜡面有透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却，否则蜡内常形成结晶。蜡块完全硬固后除去铜框，以保证蜡彻底凝固，立即修切，准备制成切片或储藏备用。•切片制作：注意事项：1.室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。在夏季时可用冰块冷却刀和组织块，减少刀与组织块在过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。切片经30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放入展片仪水盒内（一般水温为45°C左右）。待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。切片时要及时清洁刀口、除去蜡屑，否则易引起破碎。•贴片：待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中以毛面轻靠切片，并用毛笔将切片一边拨于玻片上，随即将玻片直立提起。快!•烘片与脱蜡：石蜡切片在90度烘箱内烘半小时经二甲苯I、II脱蜡各5-10min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液中各3-5min，再放入蒸馏水中3min。•染色将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中5-10min，使细胞核着色。用自来水洗去切片上残余的染液。将切片放入1%盐酸乙醇液（盐酸1份+70%乙醇100份）中褪色，见切片变红，颜色较浅即可，约数秒