诃子中鳃带刺成分的含量测定

诃子中鳃带刺成分的含量测定

有机子是君子科植物的成熟果实。具有涩肠止泻,敛肺利咽作用,临床用于久泻久痢,便血脱肛,肺虚喘咳,久咳不止,咽痛音哑。诃子中主要含鞣质成分,此成分具有收敛性,有沉淀蛋白或凝集蛋白之功,可能与中医认识的收涩作用有关。有报道,鞣质的煎出量以先煎为高,并且随着煎煮时间的延长而升高,又有报道,鞣质受热破坏或聚合,其破坏程度随加热时间延长而增大,报道结果不尽相同。本文采用干酪素法测定诃子中鞣质的含量,以探讨不同煎煮方法对诃子中鞣质含量的影响。1实验材料1.1特芬材料诃子购自湖南省望城县药材公司,经鉴定符合《中国药典》(1995年版)规定。1.2内标物的测定鞣酸(分析纯,遵义市第2化工厂);干酪素(化学纯,成都化学试剂厂);Folin试剂(钨酸钠A.R50g,加85%磷酸40ml和蒸馏水375ml,混合,加热回流3h,冷后再加水稀释至500ml,避光保存);0.1Mr醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0);日本岛津UV-2501型紫外可见分光光度仪;电动振荡机。2实验方法2.1样品溶液的制备2.1.1水浴中保湿各取干燥诃子果实粗粉约4g,精密称定,置200ml锥形瓶中,加入沸水80ml,加盖,分别置于20℃、40℃、60℃、80℃水浴中保温浸泡60min。用4层纱布过滤,药渣用适量蒸馏水洗涤2次,洗液与滤液合并,加蒸馏水至100ml。2.1.2改性处理,添加因液各取干燥诃子果实(块状2~3mm)约4g,置200ml烧杯中,加入80ml蒸馏水,依表中条件、不浸泡或浸泡不同时间,以直火加热不同时间(沸后计时),煎煮期间不断补充蒸馏水,以保证体积不变。用4层纱布过滤,药渣用适量蒸馏水洗涤2次,洗液与滤液合并,加蒸馏水至100ml。2.2重量测定2.2.1对照溶液的制备精密称取经80℃干燥2h的鞣酸,用30%甲醇配制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。2.2.2吸收度的测定精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别于10ml棕色容量瓶中,加30%甲醇至5.0ml,然后加0.1Mr醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0)至刻度,摇匀。分别精密吸取此溶液各1.0ml于10ml棕色容量瓶中,各加Folin试剂0.5ml,混匀,再加5%碳酸钠溶液至刻度,摇匀。于室温放置20min后,以蒸馏水作空白,在波长720nm处测定吸收度。以浓度对吸收度求得回归方程为A=0.00744C+0.0041r=0.9992说明在10~50μg/ml范围内线性关系良好。2.2.3干u3000酸钠缓冲液配制精密吸取样品液10ml,置蒸发皿中,水浴蒸干,放冷,以30%甲醇溶解并定量转移至150ml容量瓶中,用30%甲醇稀释至刻度。精密吸取上述甲醇液2.0ml,置25ml棕色容量瓶中,加0.1Mr醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0)10.0ml,30%甲醇稀释至刻度,混匀(溶液Ⅰ)。精密吸取溶液Ⅰ10.0ml,置已盛有干酪素250mg的50ml棕色容量瓶中,在振荡器上振荡1h,然后过滤,滤液摇匀(溶液Ⅱ)。分别精密吸取溶液Ⅰ和Ⅱ各1.0ml,置10ml棕色容量瓶中,照标准曲线项下,测定吸收度为A1和A2,以两吸收度之差(△A)代入回归方程,求得鞣质浓度,计算出样品中鞣质的含量。3不同浸泡时间的鞣质含量实验结果提示:同样热水浸泡60min,随水浴温度的升第3期陈娟,等不同煎煮方法对诃子中鞣质含量的影响9高,鞣质浸出量呈增大趋势。同样煎煮30min、水浸30min、60min及不浸泡的鞣质含量相差不大,但浸泡6h,12h含量明显升高。说明在短时间内浸泡与不浸泡对鞣质含量的影响意义不大,但延长浸泡时间(6h,12h)有助于鞣质的浸出。同样浸泡30min,直火煎煮不同时间,煎液中鞣质的含量当煎煮时间在1h之内,随着煎煮时间的延长而呈增长趋势,但煎煮1~3h的煎液鞣质含量无明显差异。4含量测定结果的比较及研究的选择关于鞣质含量的测定方法,《中国药典》用皮粉法,但此法测出的鞣质含量与药物的疗效不相符合;吕湘林设计了鞣质与Zn2+生成络合物沉淀的络合量法,方法虽较简便快捷,但测定数据和皮粉法无显著差异;罗文毓等用改进的干酪素法测定了大黄、儿茶、诃子、五倍子中鞣质含量,并与皮粉法、络合量法进行了比较,实验表明皮粉法,络合量法测定结果明显高于改进的干酪素法,并认为干酪素法只与有疗效的鞣质结合,而无疗效的鞣质(如鞣质的氧化产物等)则不被测定,而药典皮粉法、络合量法因无选择性,把无疗效的鞣质也一并测定了。因此,本文选用干酪素法测定诃子中鞣质含量,以避免测定方法对结果的影响。有关加热温度、时间对鞣质含量影响的报道不少,但结果却不尽相同。罗文毓证明大黄中鞣质受热破坏或聚合,其破坏程度与加热时间有关;贾天柱等对诃子不同炮制品做了鞣质含量比较研究,结果表明炒诃子、麸煨诃子、面煨诃子鞣质含量均低于生诃子;蒋纪洋等却证明生诃子经煨、炒、烫后鞣质含量增高,且提高砂温(烫制)、滑石粉温度(煨制),鞣质含量也增加。本试验表明,短时间浸泡(1h之内)对鞣质的浸出含量无明显影响,但长时间浸泡(6~12h)并煎煮0.5h,鞣质的含量明显增加;煎煮1h以上,鞣质的含量增加不明显,对工业生产节省能源有一定意义。造成这种差别的原因,可能有二:一是含量测定方法选择的不一致;如有用皮粉法的