荷斯坦奶牛酮病抗氧化系统的研究

荷斯坦奶牛酮病抗氧化系统的研究

目前，我国奶牛酮病的发病率显著增加，尤其是隐酮病，降低了牛奶产量，影响了奶牛业的发展。奶牛酮病是高产奶牛产犊后6周内最常发生的一种以碳水化合物和挥发性脂酸代谢紊乱为基础的营养代谢病。临床表现为顽固性消化紊乱,呼出气有酮味,产乳量下降,机体脱水和一定的神经症状。临床特征为酮血、酮尿、酮乳、低血糖、血浆游离脂肪酸浓度升高和肝糖含量降低。为了进一步揭示奶牛酮病的发生机理,我们首次研究奶牛酮病对抗氧化系统的影响,旨在为临床防治奶牛酮病提供实验依据。1材料和方法1.1材料表面1.1.1实验动物黑龙江某奶牛场泌乳量在6500kg以上的3胎~6胎荷斯坦奶牛。1.1.2仪器7230分光光度计,上海第三分析仪器厂;低速台式离心机,上海安亭科学仪器厂;旋涡混匀器,上海第一医学院仪器厂。1.1.3活性测定试剂盒谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性测定试剂盒、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性测定试剂盒、丙二醛(MDA)含量测定试剂盒由南京建成生物工程研究所生产;亚硝基铁氰化钠,无水碳酸钠,硫酸铵(分析纯),由天津市化学试剂一厂生产。1.2方法1.2.1酮病抽样检测应用酮粉法和改良式水杨醛比色法对某农场的荷斯坦奶牛进行酮病抽样检测。分为2组,每组10头,分别为对照组和阳性组。对实验动物尾中动脉采血5mL,分离血清,冷冻保存,在最短时间内测定试验指标。1.2.2血清gsh-px活性测定采用常规的DTNB显色法测定。1.2.3血清t-sod活性测定采用常规的黄嘌呤氧化法测定。1.2.4血清sda的含量采用常规的硫代巴比妥酸法测定。1.2.5处理数据采用常规的用Excel软件处理。2结果2.1酮病阳性牛的诊断结果2.1.1酮粉法的诊断结果有紫色迹象,并逐渐加深,于30s达顶点者为(++++),约含酮体4.0mg/L以上(图1)。2.1.2杨树业比色法的诊断结果对照组奶牛血清酮体含量0.3mg/L,阳性组奶牛血清酮体含量5.6mg/L。2.2两组t-sod活性、mda含量比较从表1可见,阳性组与对照组相比,血清中GSH-Px活性极显著降低(P<0.01),对照组的T-SOD活力显著大于阳性组(P<0.05),阳性组的MDA含量显著大于对照组(P<0.05)。3动物机体自由基活性酮病的发生机理现在普遍接受的学说是糖缺乏理论。由于各种原因所致碳水化合物供应不足以及高泌乳消耗大量的糖,导致机体低血糖及能量负平衡。为此,动用机体的脂肪和蛋白补充能量的不足。但是脂肪和蛋白质分解产生大量的游离脂肪酸和生酮氨基酸,经过肝脏的β-氧化为乙酰coA,乙酰coA可与草酰乙酸缩合成柠檬酸,经三羧循环氧化供能。如果生成草酰乙酸的先质丙酸的碳水化合物不足,使得大量乙酰coA不能进入三羧酸循环,导致酮体蓄积,进而引起一系列的代谢与机能紊乱,如前胃消化紊乱,神经机能障碍及内分泌机能紊乱等。GSH-Px和SOD是动物机体内广泛存在的一类重要的过氧化物分解酶,GSH-Px和SOD活力的高低间接反应了动物机体清除自由基的能力,而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度。奶牛血清中T-SOD活力显著降低,血清中MDA含量显著增高,其原因可能有以下两个方面。一方面为奶牛发生酮病之后,机体发生营养代谢紊乱或自身采食量减少,引起体内Cu、Zn量吸收不足,导致动物机体中SOD含量减少即T-SOD活力下降,消除自由基能力减弱,MDA含量增高。另一方面认为酮病产生的直接原因是酮体浓度增高,其大量蓄积的结果常导致动物酸碱平衡失调,引起酸中毒。溶液中的pH过低(过酸)、过高(过碱)都能使酶蛋白变性而失活。从而也可出现上述实验结果。奶牛血清中GSH-Px的活力降低有两方面原因。一方面是由于奶牛酮病时有大量的体脂被动员,在脂肪分解代谢的过程中,有脂质过氧化物产生,在奶牛酮病的初期GSH-Px的活性代偿性的增高。但在奶牛酮病的后期,由于脂质过氧化物大量堆积超过动物机体的代偿能力,生物膜受损,GSH-Px的活性降低。另一方面是由于奶牛酮病时影响维生素E的摄入和硒的吸收,而GSH-Px的活性中心是硒半胱氨酸,硒的缺乏将导致GSH-Px的合成受阻,所以血清中