贝科能对犬肝缺血再灌注损伤的保护作用

贝科能对犬肝缺血再灌注损伤的保护作用

肝缺氧再灌注的损伤通常发生在肝伤口、手术、肝移植、肿瘤和肝硬化的过程中。从肝组织到血液注射的过程是肝组织重建过程。注射用复合辅酶(商品名:贝科能)是一种对多种脏器具有保护作用,利于肝细胞物质和能量代谢,对抗自由基对机体组织产生激发性损害。本实验采用犬肝脏缺血再灌注损伤模型,观察贝科能对肝脏的保护作用,进一步探讨其作用的机制。1材料和方法1.1股静脉静脉采血及取肝组织备检健康杂交犬24只,山西医科大学实验动物中心提供,体质量10~15kg,雌雄不限,随机分为3组(每组8只)。假手术组:仅行麻醉、肝素化、开腹、解剖肝门,同时股静脉持续静脉滴注0.9%氯化钠注射液500ml,采血及取肝组织备检;对照组:阻断肝血流15min后复灌1h同时股静脉持续静脉滴注0.9%氯化钠注射液500ml,采血及取肝组织备检实验组:手术同对照组,同时贝科能2支溶于0.9%氯化钠注射液20ml中经股静脉持续静脉滴注,同时滴注0.9%氯化钠注射液480ml,采血及取肝组织备检。贝科能是多种辅酶的复合物,主要成分:辅酶Ⅰ0.1mg、还原型谷胱甘肽1mg、腺苷蛋氨酸1mg、黄素核苷酸、1,6二磷酸果糖、辅酶A100U、三磷酸腺苷2mg、核糖核苷酸等。1.2静脉麻醉实验前动物禁食8h,自由饮水。6.5%戊巴比妥钠(0.5ml/kg)静脉注射麻醉,上腹正中切口入腹,游离肝十二指肠韧带无损伤血管钳阻断第一肝门(包括胆总管),肝脏缺血15min后解除阻断,恢复肝脏血流,再灌注1h后关腹。1.3肝正常细胞活力检测(1)肝功能指标:在缺血15min、再灌注1h后,采集静脉血检测丙氨酸转氨酶(ALT)。(2)肝组织光镜观察:苏木素-伊红(HE)染色光镜下观察肝小叶中细胞坏死程度,淋巴细胞、库普否细胞浸润情况。(3)肝线粒体的制备及Na+-K+-ATP酶活性的测定:采用差速离心法制备线粒体,线粒体分离介质含0.25mol/L蔗糖、0.1mol/L乙二胺四乙酸(EDTA),0.01mol/LTris-HCl(pH7.6)。Na+-K+-ATP酶活性用定磷法测定,双缩脲法测定蛋白含量。(4)氧自由基指标:在缺血再灌注1h后用下腔静脉取血测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。1.4统计处理2结果2.1经皮细胞不清假手术组肝细胞形态结构基本正常,肝细胞索排列整齐,肝窦内皮细胞正常,未见细胞坏死。对照组肝细胞结构不清,胞质染色不均,见淋巴细胞、库普否浸润,细胞点片状坏死,伴明显出血,肝窦内皮细胞明显肿胀,肝窦结构改变。实验组白细胞的数量聚集明显低于对照组,且无红细胞堆积现象,肝窦内皮细胞大致正常,部分视野有细胞点状坏死。2.2差异t实验组、对照组较假手术组ALT增高,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组较对照组ALT均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。2.3两组患者na+-k+-atp酶活性比较实验组Na+-K+-ATP酶活性高于对照组,对照组、实验组Na+-K+-ATP酶活性低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。2.4通过测量sod和mda3还原型谷胱甘肽和正乳酸酯相关的抗氧化酶活性肝脏是易受缺血再灌注损伤的器官,缺血、缺氧的肝组织在血流恢复后,其损伤程度与氧自由基有直接关系,线粒体是肝脏缺血再灌注损伤的靶器官,是联系氧自由基和细胞死亡的中心环节。组织在缺血、缺氧时首先引起线粒体或胞质水平的生化改变,使细胞在复氧或血流再通后容易受到氧化损伤,最终导致细胞死亡。贝科能注射液系用新鲜食用酵母为原料提取精制所得的多种辅酶的复合物,主要含有辅酶A、辅酶Ⅰ、三磷酸腺苷、还原型谷胱甘肽、核苷酸等生物活性物质,它们大都是人体内乙酰化反应、氧化还原反应和能量代谢的重要酶的辅酶,它们对体内糖、蛋白质、脂肪及能量代谢起重要的作用。糖酵解、三羧酸循环、脂肪酸的β-氧化、肝糖元的合成和分解、乙酰胆碱的合成、组织呼吸、能量转移等均与它们有密切关系。还原型谷胱甘肽还具有保肝解毒、抗放射作用。近年来实验表明,多种因素可引起肝脏的缺血再灌注损伤,缺血再灌注损伤后氧自由基爆发性形成是引起肝脏功能与结构损伤的最重要原因。贝科能可提高血清SOD,降低MDA,使肝窦内氧自由基清除能力增强。肝缺血再灌注期间由于肝实质细胞损伤后产生的大量活性氧可激活库普否细胞及各类炎性因子造成肝细胞、肝窦内皮细胞损伤,此损伤程度与血浆MDA水平呈正相关,MDA主要反映组织中自由基的含量和脂质过氧化程度。由于线粒体膜成分中有大量不饱和脂肪酸,容易引起脂质过氧化。脂质过氧化会损坏线粒体膜结构,破坏线粒体呼吸和氧化磷酸化,增加膜的通透性,使膜离子转运机制紊乱,造成细胞损伤。线粒体Na+-K+-ATP酶活性对维持线粒体内平衡起重要作用,当该酶活性下降,线粒体内H2O、Na+增加,线粒体肿胀;另一方面,Na+-K+-ATP酶活性下降可致线粒体钙超载,使线粒体内容物丧失,膜电位永久消失,水分子大量进入线粒体内导致线粒体肿胀甚至崩解。贝科能可以中和机体病理过程中产生的自由基,对抗自由基对机体组织产生激发性损害。SOD是组织中主要的抗氧化酶-超氧自由基清除剂,为一种带电荷的大分子蛋白酶。血