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根系分泌物测定试验方案以正交表L8（27）设计一个三因子试验，以1/5Hoagland溶液水培。三个因子分别为品种、氮素胁迫和水分胁迫，每个因子各设两个水平。（1） 品种因子（A）：以美国先锋公司的2对玉米品种（Bt玉米和相应的非Bt玉米）共4个品种为材料，设水平1-Bt玉米；水平2—相应的非Bt玉米。（2） 氮素因子（B）：设水平1—正常施氮；水平2—低氮胁迫（即不施加氮素营养）。（3） 干旱因子（C）：设水平1—正常水培；水平2—干旱胁迫（即加入PEG）。每盆3株，各处理组合种植2盆（即2次重复），在生育期的前中期取样5次，测定根系分泌物中有机酸的含量（各品种24粒）。正交表处理号1列2列3列4列5列6列11111112111222312211241222215212121621221272211228221211二、 表头设计列123456效应ABAXBCAXCBXC三、根系分泌物收集方法：1.在太阳下收集根系分泌物7~8小时（用0.5mmol/LCaCL2液150ml收集，提高渗透压，有利于根系分泌），纱布过滤。2.将根系分泌物滤液转移至200ml烧杯中，于60°C水浴下放通风橱下风干（一晚12hr可蒸干150ml）,同时处理阳离子树脂AmberliteIR-120（PLUS）ion-exchangeresin,sodiumform（AldrichChemicalCompany,Inc.）（先用2000mlHCL洗，再用蒸馏水洗）。2ml0.5NHCL洗烧杯，转移至10ml离心管。再用8ml蒸馏水洗烧杯，小漏斗过滤，转移至离心管，0°C下保存或直接过阳离子树脂。将离心管中的溶液过阳离子树脂，再用5ml蒸馏水洗净离心管，一样过阳离子树脂。收集过阳离子树脂的溶液15ml，在通风橱下或利用旋转蒸发仪蒸干。用1ml流动相（含0.5mmol/LTBA、pH2的KH2PO4）溶解根系分泌物的浓缩成分于离心管中。振荡，使之充分溶解（其中TBA为四丁基硫酸氢铵，可适当延长草酸的保留时间，有效消除分析中的干扰问题）。将溶解液过滤膜，转移到离心管中（或12000g离心，取上清液待测）。HPLC分离检测。四、 HPLC测定方法：溶剂系统：含0-10mmol/LTBA，pH2的0.5%KH2PO4水溶液检测波长：220nm进样量：5Ml流速：1ml/min五、 具体处理组合—BI1N1W1—Bt1N1W2—Bt1N2W1—Bt1N2W2—Bt2N1W1—Bt2N1W27――Bt2N2W18——Bt2N2

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