湖南省邵阳市育英高级中学2023年高三阶段性测试（二模）生物试题含解析

湖南省邵阳市育英高级中学2023年高三阶段性测试（二模）生物试题注意事项1．考试结束后，请将本试卷和答题卡一并交回．2．答题前，请务必将自己的姓名、准考证号用0．5毫米黑色墨水的签字笔填写在试卷及答题卡的规定位置．3．请认真核对监考员在答题卡上所粘贴的条形码上的姓名、准考证号与本人是否相符．4．作答选择题，必须用2B铅笔将答题卡上对应选项的方框涂满、涂黑；如需改动，请用橡皮擦干净后，再选涂其他答案．作答非选择题，必须用05毫米黑色墨水的签字笔在答题卡上的指定位置作答，在其他位置作答一律无效．5．如需作图，须用2B铅笔绘、写清楚，线条、符号等须加黑、加粗．一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．下列有关“21三体综合征”的叙述，正确的是A．患者体细胞中含有3个染色体组B．患者也能产生正常的生殖细胞C．父方或母方只有减数第二次分裂异常时才可能导致子代患病D．高龄产妇产下21三体综合征患儿的概率并没有明显增加2．将基因型为Dd（品系甲）的玉米幼苗芽尖用秋水仙素处理，得到四倍体植株幼苗（品系乙）。将甲乙品系间行种植，自然状态下生长、繁殖，得到子一代丙。相关叙述合理的是（）A．将甲、乙品系间行种植，自然状态下获得的丙全部为三倍体B．显微镜下观察品系乙的根、叶细胞，在分裂中期时两者染色体数目不相等C．品系乙植株自交后代中基因型有四种，全为显性性状D．秋水仙素处理的目的是促进细胞有丝分裂后期着丝点分裂，从而诱导染色体加倍3．高等植物细胞内元素转移的过程，只能发生在细胞器中的是（）A．CO2中的碳元素转移到葡萄糖 B．H2O中的氢元素转移到葡萄糖C．丙酮酸中的氧元素转移到CO2 D．ATP中的磷元素转移到RNA4．圆褐固氮菌具有较强的固氮能力（将大气中的固定成)，并且能够分泌植物生长素，促进植株生长和果实发育。某研究小组从土壤中分离固氮菌并进行计数，然后制成菌肥施入土壤中以增加土壤肥力，提高农作物的产量。下列有关说法正确的是（）A．圆褐固氮菌固定的氮能直接被植物吸收利用B．可用酚红对选择培养的圆褐固氮菌进行鉴定C．筛选圆褐固氮菌的培养基中要加入有机氮源D．可通过平板划线法对所培养的菌落进行计数5．制备单克隆抗体过程中，动物细胞培养需要先分离出单个细胞，然后再进行培养和筛选。这样做的目的是（）A．为了避免微生物污染B．保证获得细胞的遗传背景相同C．为了使细胞周期一致D．保证细胞得到充足的营养6．在我国北方，游泳爱好者冬泳入水后，身体立即发生一系列生理反应。下列为机体会发生的反应是（）A．抑制中枢神经系统，加强肌肉收缩B．通过反射活动引起皮肤毛细血管舒张C．通过神经调节减少机体各部分汗腺分泌D．兴奋垂体活动导致甲状腺激素分泌减少二、综合题：本大题共4小题7．（9分）马拉松长跑过程中机体会发生相应的生理变化。回答下列问题：（1）运动时产生较多的___________________可以作为调节因子作用于位于___________________的呼吸中枢促使呼吸频率加快。产生的热量主要通过___________________方式散出。（2）长跑过程中大量消耗葡萄糖，而血糖含量基本保持稳定，不会影响运动，其原因是____________________________________________________。（3）长跑过程中，血液中抗利尿激素含量增加，能提高肾脏______________。8．（10分）某实验小组在适宜的二氧化碳浓度条件下，用小球藻做了有关光合作用的实验（假设实验过程中呼吸速率不变）。图1和图2表示实验结果，其中图l表示光照强度为e时测定的温度对光合速率的影响，图2表示温度条件是25℃下测定的光照强度对光合速率的影响。根据实验结果分析回答下列问题：（1）该实验的自变量是____，从图2中可以判断小球藻的呼吸速率的相对值是____。（2）当小球藻处于图l中温度条件为35℃时，小球藻____（填“能”或“不能”）表现生长，做出判断的依据是____。（3）小球藻进行光合作用的场所是叶绿体，内部有许多基粒，每个基粒都含有两个以上的类囊体，多者可达100个以上，从结构决定功能的角度分析，叶绿体中有如此多的基粒和类囊体的意义是____。9．（10分）回答下列（一）、（二）小题。（一）回答下列有关发酵食品生产工艺的问题：（1）豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。影响豆豉风味的主要因素，除了菌种类型、发酵温度、pH、氧气等环境因素，还有________（答2个因素）。（2）目前的豆豉发酵基本是一次性的，每次都经过“培养基灭菌→___→发酵→提取”，周而复始。能否________发酵、生产、提取是今后的发展方向。（3）根据所学知识判断，下面哪种微生物更适合用豆芽汁培养基培养_________A醋杆菌B酵母菌C乳酸菌D农杆菌（4）在果醋发酵工艺中，用谷壳糠等将醋杆菌固定化，装在发酵瓶，下端直角玻璃管中塞____________用以过滤空气；物料瓶内装___________________，铝箔封口。发酵过程若流速过快，则可能导致____________，为保障品质，需对发酵瓶流出液________________。（二）为开发利用沿海滩涂盐碱地，我国科学家应用基因工程培育出了耐盐碱水稻新品系，大大提高了水稻等农作物的种植面积，增加了粮食产量。据此请回答下列问题：（1）欲将耐盐碱基因和Ti质粒进行重组形成重组质粒需要的工具酶有限制性核酸内切酶和____________，限制酶一般需要________种，这样设计的目的是____________。（2）将重组Ti质粒构建完成后导入农杆菌，经筛选后，对含目的基因的农杆菌进行大量繁殖，其目的是____________。（3）取田间水稻的幼胚经消毒后接种到____________（固体、半固体、液体）培养基上诱导产生愈伤组织，利用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织后，将其接种到MS生根培养基上，在该培养基中细胞分裂素具有解除高浓度生长素____________的作用。（4）经组培获得水稻试管苗后，提取其叶片组织中的DNA，采用PCR技术扩增目的基因，目的是为了____________。要检测到转基因水稻中目的基因的表达产物，一般采用的方法是_________。10．（10分）回答下列（一）、（二）小题：（一）开发山楂果醋恰好让山楂中的有机酸丰富了果醋的酸味，同时也弥补生食山楂酸味大的缺陷，具体酿制山楂果醋分为以下三个阶段，请将具体过程补充完整。（1）制备山楂果原汁：选成熟的山楂果，在清水冲洗山楂果_______（填“之前”或“之后”）去梗。将山楂果切片并去籽，再添加_______，酶解适宜时间后压榨取果汁。（2）乙醇发酵：由于山楂果原汁_______，故发酵液中添加适量蔗糖，以获得酒精含量较高的果酒。果汁中加入活化的________后，在适宜环境下发酵一段时间，当发酵液中停止_______，发酵完毕待过滤，或发酵至_______，上清液即为果酒，用虹吸法取出。（3）醋酸发酵：将醋化醋杆菌进行扩大培养后，经检查菌体生长正常并无杂菌污染后接种于山楂酒-水中进行发酵，整个发酵过程需要通入_______。在发酵后期加入1．3~1．4%的食盐，其目的是调味和_______，以防止果醋被发酵分解。（二）下图为转基因抗虫烟草的培育流程，①②③④表示过程，其中②表示利用农杆菌转入受体细胞。回答下列相关问题：（1）在①过程构建重组质粒时，若用同一种限制性核酸内切酶处理Ti质粒和含目的基因的DNA片段，使两者形成粘性末端用于拼接，这种方法的明显缺点是目的基因和质粒________（答出2点即可）。另外，影响拼接效率的主要因素，除以上缺点和盐离子浓度、渗透压、温度等环境因素外，还有_______（答出2点即可）。（2）在②过程中，将图示重组Ti质粒导入农杆菌时可用______处理农杆菌，以提高转化效率。操作之后，需要特定的培养基对农杆菌进行筛选，其原因是_______，最终筛选到的对象在相应选择培养基上的存活情况是________。（3）在③过程常通过调节_______的适当配比，从愈伤组织诱导出芽和根的_____，并由此再生出新植株。获得转基因烟草后，再通过[④]_______过程实现多个世代组织培养。11．（15分）果蝇红眼与白眼（A或a）、长翅与小翅（B或b）直刚毛与焦刚毛（C或c）灰身与黑身（D或d），这四对相对性状各受一对等位基因控制。回答下列问题：（1）某研究小组做了如下实验：用灰身果蝇与黑身果蝇杂交，F1既有灰身又有黑身且比例1：1。能据此实验判断灰身与黑身的显隐性吗？若能，请用遗传图解分析；若不能，请从该实验的亲本、子代中选择实验材料，设计实验来确定这对相对性状的显隐性___________________。（要求：写出实验思路、预期实验结果、得出结论）（2）若A（a）、B（b）、D（d）、F（f）这四对等位基因都位于常染色体上，现有四个纯合品系：①aaBBDDFF、②AAbbDDFF、③AABBddFF、④AABBDDff。请以上述品系为材料，完善实验设计来确定这四对等位基因是否分别位于四对染色体上（注：不考虑发生染色体变异和染色体交叉互换）：设计思路：选择____________六个杂交组合，分别得到F1，再自交得F2。结果结论：若各杂交组合的F2中均出现四种表现型，且比例为____________，则可确定这四对等位基因分别位于四对染色体上。

参考答案一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、B【解题分析】

患者体细胞中含有21号染色体比正常多了1条，A错误；理论上该患者能产生正常的生殖细胞，B正确；精子或卵细胞中21号染色体多一条都会导致受精作用后形成21三体的受精卵，所以异常细胞既可来自父方也可来自母方，也可能是减数第一次分裂异常，C错误；高龄孕妇生育21三体综合征患儿的风险较高，原因是随着母亲年龄的增大，导致卵细胞形成过程中21号染色体发生不分离的可能性增加，导致卵细胞多了一条21号染色体，D错误。故选：B。2、B【解题分析】

用秋水仙素处理Dd的玉米幼苗（品系甲），可抑制细胞有丝分裂过程中纺锤体的形成，导致染色体数目加倍，形成四倍体（DDdd）（品系乙）。【题目详解】A、用秋水仙素处理品系甲植株（Dd）后，得到的四倍体品系乙植株（DDdd），将甲、乙品系间行种植，自然状态下有自交也有杂交，故获得的丙有二倍体、三倍体和四倍体，A错误；B、秋水仙素处理的是幼苗的芽尖，故叶细胞中染色体数目加倍，而根细胞没有加倍，在分裂中期时两者染色体数目不相等，B正确；C、品系乙植株（DDdd）可以产生DD、Dd、dd三种配子，故自交后代中基因型有五种，有显性性状也有隐性性状，C错误；D、秋水仙素处理的目的是抑制纺锤体的形成而诱导染色体数目加倍，而纺锤体形成于有丝分裂的前期，D错误。故选B。3、A【解题分析】

光合作用的场所是叶绿体，包括光反应和暗反应阶段；有氧呼吸分为三个阶段，第一阶段在细胞质基质，二、三阶段在线粒体进行。【题目详解】A、CO2中的碳元素通过光合作用的暗反应过程转移到葡萄糖（CO2→C3→葡萄糖），该反应的场所是叶绿体基质，A正确；B、二糖分解为葡萄糖的过程需要水参与，发生在细胞质基质，不需要细胞器的参与，B错误；C、丙酮酸中的氧元素转移到CO2可发生在酵母菌等无氧呼吸的第二阶段，场所为细胞质基质，C错误；D、ATP脱去两分子磷酸基团，形成AMP即可作为合成RNA的原料，RNA的合成可发生在细胞核中，D错误。故选A。【题目点拨】解答此题需要明确光合作用与呼吸作用中物质的关系，熟记ATP与RNA的关系，进而结合选项分析作答。4、B【解题分析】

根据题干信息分析，圆褐固氮菌具有较强的固氮能力，能够将大气中的N2固定成NH3，这些NH3进入土壤后提高了土壤肥力，进而提高农作物产量；圆褐固氮菌还能够分泌植物生长素，促进植株生长和果实发育。【题目详解】A、生物固氮生成的NH3经过土壤中硝化细菌的作用，最终转化成硝酸盐，硝酸盐可以被植物吸收利用，A错误；B、酚红指示剂在pH升高后将变红，而圆褐固氮菌固氮产生的氨使得pH升高，因此可用酚红对选择培养的圆褐固氮菌进行鉴定，B正确；C、圆褐固氮菌具有固氮能力，因此筛选圆褐固氮菌的培养基中不要加入有机氮源，C错误；D、平板划线法只能用于菌种的分离，不能用于菌种的计数，D错误。故选B。5、B【解题分析】

将已免疫的小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能分泌特定抗体的杂交瘤细胞的过程中至少要进行两次筛选，一次是通过选择培养基筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过专一抗体检测筛选出能分泌特定抗体的杂交瘤细胞。【题目详解】由于小鼠生活过程中存在多种抗原感染，所以小鼠体内存在多种B淋巴细胞，从小鼠体内获取的经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，会形成多种杂交瘤细胞，同时也存在未融合的细胞和同种细胞的融合体，将这些细胞放在特定的选择培养基上培养，可筛选出杂交瘤细胞，但这些杂交瘤细胞产生的抗体是多种，为了筛选到能产生单一抗体的细胞群，可将上述杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，由于每个小孔内只有一个杂交瘤细胞，所以可筛选到产生特异性抗体的杂交瘤细胞，即两次筛选的目的是保证获得细胞的遗传背景相同。筛选的目的不是避免微生物污染，也不是使细胞周期一致和保证细胞得到充足的营养，综上分析，B正确，ACD错误。故选B。6、C【解题分析】

1、在我国北方游泳爱好者冬泳入水之后，身体立即发生一系列的生理反应，以维持体温恒定。

2、寒冷环境→皮肤冷觉感受器→下丘脑体温调节中枢→增加产热（骨骼肌战栗、立毛肌收缩、甲状腺激素分泌增加），减少散热（毛细血管收缩、汗腺分泌减少）→体温维持相对恒定。【题目详解】A、冬泳入水后，通过调节散热减少，产热增多，以维持体温恒定，入水后，中枢神经系统兴奋，通过神经调节，肌肉收缩使产热增加，A错误；

B、皮肤毛细血管收缩，减少散热量，B错误；

C、冬泳入水后，通过神经调节减少汗腺分泌，使散热减少，C正确；

D、通过神经调节促进下丘脑的分泌活动，促进垂体的分泌活动进而促进甲状腺分泌甲状腺激素，甲状腺激素分泌增加，使产热增加，D错误。

故选C。二、综合题：本大题共4小题7、CO2脑干汗液的蒸发、皮肤毛细血管的散热肝糖原的分解和非糖物质的转化补充消耗的葡萄糖肾小管、集合管对水的通透性，促进水的重吸收【解题分析】

调节血糖的激素：（1）胰岛素：（降血糖）。分泌部位：胰岛B细胞．作用机理：①促进血糖进入组织细胞，并在组织细胞内氧化分解、合成糖元、转变成脂肪酸等非糖物质。②抑制肝糖元分解和非糖物质转化为葡萄糖（抑制2个来源，促进3个去路）。（2）胰高血糖素：（升血糖）。分泌部位：胰岛A细胞。作用机理：促进肝糖元分解和非糖物质转化为葡萄糖（促进2个来源）。人体的水平衡调节过程：当人体失水过多、饮水不足或吃的食物过咸时→细胞外液渗透压升高→下丘脑渗透压感受器受到刺激→垂体释放抗利尿激素增多→肾小管、集合管对水分的重吸收增加→尿量减少，同时大脑皮层产生渴觉（主动饮水）。【题目详解】（1）运动时产生较多的CO2可以作为调节因子通过体液运输作用于脑干的呼吸中枢促使呼吸频率加快。产生的热量主要通过汗液的蒸发、皮肤毛细血管的散热方式散出。（2）长跑过程中大量消耗葡萄糖，机体可以通过肝糖原的分解和非糖物质的转化补充消耗的葡萄糖，从而使血糖含量基本保持稳定。（3）长跑过程中，大量出汗使细胞外液渗透压升高，血液中抗利尿激素含量增加，能提高肾脏肾小管、集合管对水的通透性，促进水的重吸收。【题目点拨】本题考查体温调节、血糖调节、渗透压调节等相关知识，掌握相关知识结合题意答题。8、温度和光照强度5能35℃时小球藻的净光合速率大于0，有机物积累增加极大地扩展了受光面积，并且增加光合色素和有关酶的附着面积【解题分析】

解答本题的关键是抓住问题的实质：图示的横坐标表示自变量，纵坐标表示因变量；温度通过影响光合作用相关酶的活性影响光合作用的速率。抓住了问题的实质，结合题意并题图信息，围绕光合作用的过程及其影响因素等相关知识即可对各问题进行解答。【题目详解】（1）图中的横坐标表示的是自变量，因此温度和光照强度是实验的自变量。光照强度为0时，小球藻只进行呼吸作用，因此根据图2可知小球藻的呼吸速率的相对值是5。（2）温度条件为35℃时，小球藻的净光合速率大于0，有机物积累增加，小球藻能表现出生长。（3）叶绿体类囊体薄膜是光合作用光反应的场所，叶绿体中分布较多的基粒和类囊体，极大地扩展了受光面积，并且增加光合色素和有关酶的附着面积。【题目点拨】本题采用图文结合的形式考查学生对光合作用过程、影响光合作用的因素等知识的理解能力以及对实验结果的分析能力。9、大豆品种（原料）、发酵时间接种连续地B脱脂棉球酒水混合物发酵不充分定期检测/监控（答到一个词给分）DNA连接酶2防止质粒和目的基因自身环化以及定向连接获取大量重组质粒（让目的基因扩增或克隆目的基因）半固体抑制根生长检测目的基因是否成功导入抗原-抗体反应【解题分析】

1、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。果酒制作的原理：（1）在有氧条件下，反应式如下：C6H12O6+6H2O+6O26CO2+12H2O+能量；（2）在无氧条件下，反应式如下：C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量。2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。3、基因工程的操作步骤：一是获取目的基因；二是构建基因表达载体（核心）；三是将目的基因导入受体细胞（导入植物细胞一般有农杆菌转化法、基因枪法、花粉管道法等）；四是检测和鉴定目的基因（一是检测目的基因是否导入成功，二是检测目的基因是否成功表达，三是检测目的基因控制的性状是否在能在植株上表现出来）。【题目详解】（一）（1）影响豆豉风味的因素很多，包括菌种类型、发酵温度、pH、氧气等环境因素还有发酵的大豆品种原料和发酵时间。（2）发酵过程利用了微生物的代谢，因此培养过程要经过“培养基灭菌→接种→发酵→提取”。这种发酵技术基本上是一次性的，因此如何连续性低发酵、生产、提取是今后的发展方向。（3）豆芽汁培养基适合培养真菌，选项中只有酵母菌属于真菌，故选B。（4）醋酸菌是好氧细菌，下端直角玻璃管中塞脱脂棉球用以过滤空气。物料瓶内装酒水混合物，铝箔封口。发酵过程若流速过快，则可能导致发酵不充分，为保障品质，需对发酵瓶流出液进行定期检测。（二）（1）重组质粒构建过程中，用的工具酶包括限制性核酸内切酶和DNA连接酶，其中限制性核酸内切酶一般用两种，这样防止目的基因和质粒发生自身环化以及定向连接。（2）为了获取大量重组质粒，可对含目的基因的农杆菌进行大量繁殖。（3）愈伤组织的培养采用的是半固体培养基。生长素具有两重性，低浓度促进生长，高浓度抑制生长，在MS生根培养基上，细胞分裂素具有解除高浓度生长素抑制生根的作用。（4）提取叶片组织的DNA，采用PCR技术扩增目的基因，鉴定目的基因是否成功导入。对于检测转基因水稻中目的基因是否表达，可采用抗原-抗体杂交方法。【题目点拨】本题考查视频发酵和基因工程的相关知识，要求考生识记相关发酵技术的原理、方法和流程，基因工程的原理及意义，掌握基因工程采用的工具及具体操作步骤，能结合所学的知识准确分析各题。10、之后果胶酶（和果胶甲酯酶）含糖量较低干酵母（悬液）出现气泡酵母下沉无菌空气/氧气抑制杂菌反向拼接/倒接、（自身）环化且的基因的浓度、质粒的浓度、反应时间氯化钙CaCl2不是所有的农杆菌都接纳了重组质粒在含四环素培养基上存活，在含青霉素培养基上死亡营养物质和生长调节剂/植物激素项端分生组织继代培养【解题分析】

1.酿酒和制醋是最古老的生物技术。与酒和醋的生产有关的微生物分别是酵母菌和醋杆菌，它们各有不同的菌种。菌种的不同，所产生的酒和醋的风味也不同。本实验的内容是制作果酒和果醋，所用的原料是葡萄或其他果汁。葡萄酒是酵母利用葡萄糖进行酒精发酵(乙醇发酵)的产物。酵母菌只有在无氧条件下才能进行酒精发酵，即将葡萄糖氧化成乙醇，而且当培养液中乙醇的浓度超过16%时，酵母菌就会死亡。葡萄糖氧化成乙醇的反应式如下。醋杆菌在有氧条件下才能将乙醇氧化为醋酸，醋杆菌所产生的醋酸可使培养液中醋酸的含量高达13%。2.基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．【题目详解】（一）（1）制备山楂果原汁通常选成熟的山楂果，为了避免杂菌污染，通常在用清水冲洗山楂果之后去梗。将山楂果切片并去籽，为了提高出汁率和澄清度，通常需要添加果胶酶（和果胶甲酯酶）处理，酶解适宜时间后压榨取果汁。（2）乙醇发酵时通常需要在发酵液中添加适量蔗糖，以弥补山楂果原汁含糖量较低的不足，同时也是为了满足酵母菌发酵需要的底物量，从而获得酒精含量较高的果酒。然后在果汁中加入活化的干酵母（悬液）后，置于适宜环境下进行发酵，由于酵母菌无氧呼吸的产物是酒精和二氧化碳，所以在发酵过程中会有气泡产生，当发酵液中不再出现气泡时，意味着发酵完成，然后过滤获得果酒；也可发酵至酵母下沉后，用虹吸法取出上清液即为果酒。（3）醋酸发酵中，由于醋化醋杆菌在有氧气的条件下将酒精变为为乙醛，进而变为乙醇，所以整个发酵过程需要通入无菌空气/氧气。在发酵后期加入1．3~1．4%的食盐，食盐起到了调味和抑制杂菌的作用，进而防止果醋被其他微生物发酵分解。（二）（1）①为构建基因表达载体的过程，若用同一种限制性核酸内切酶处理Ti质粒和含目的基因的DNA片段，则两者会出现相同的粘性末端从而使得拼接变得容易，但这种方法存在明显的缺点是在拼接时会出现反向拼接/倒接、（自身）环化等情况。影响拼接效率的因素主要有盐离子浓度、渗透压、温度等环境因素，除此外，还有且的基因的浓度、质粒的浓度和反应时间也会影响拼接的效率。（2）②过程为将目的基因导入受体细胞的过程，将图示重组Ti质粒导入农杆菌时，为了提高导入的成功率，可用氯化钙CaCl2处理农杆菌，以提高转化效率。因为导入的成功率较低，也就是说，并不是所有的农杆菌都接纳了重组质粒，可能有的导入的是普通质粒，或者没有导入成功，所以需要在特定的培养基对农杆菌进行筛选，由于图中重组质粒上含有标记基因四环素抗性基因，而抗青霉素的基因被破坏，为了筛选出成功导入重组质粒的农杆菌，需要将待筛选的农杆菌分别接种在含有四环素的培养基和含青霉素的培养