实验报告血液凝固及其影响因素

实验五:血液凝固及其影响因素实验人:同组人:【实验目的】1．学习血液凝固的基本过程2．了解加速或延缓血液凝固的一些因素【实验原理】血液凝固就是一个酶的有限水解激活过程,在此过程中有多种凝血因子参与。根据凝血过程起动时激活因子来源不同,可将血液凝固分为内源性激活途径与外源性激活途径。内源性激活途径就是指参与血液凝固的所有凝血因子在血浆中,外源性激活途径就是指受损的组织中的组织因子进入血管后,与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。【实验材料与用具】家兔清洁小试管7个、小烧杯2个、竹签、秒表、试管架、哺乳动物手术器械一套、兔手术台、动脉夹、塑料动脉插管、线、棉花、水浴槽、冰盒液状石蜡、肝素、草酸钾钾1〜2mg脑匀浆夜0、1m、生理盐水【实验过程】1、动物麻醉及颈部手术（此部由助教老师操作）取一只动物称重。按1g/kg体重饬量将乌拉坦氨基甲酸乙酯）由耳缘静脉缓慢注入观察动物肌张力、呼吸与角膜反射的变化。动物麻醉后背位固定于兔手术台上。剪去颈部手术野的毛沿颈正中线在喉头上一指至锁骨上一指的地方作一5〜7cm的皮肤切口分离皮下组织及肌肉。2、颈总动脉插管（此部由助教老师操作）在气管两侧辨别并分离颈总动脉,颈总动脉下方穿两条线备用。在左侧颈总动脉的近心端夹一动脉夹,在动脉夹远心端距动脉夹勺3cm处结扎用小剪刀在结扎扎线的近侧结扎扎线与动脉夹之间沿向心方向剪T斜口约占管径的一半）,向心脏方向插入动脉插管,由备用的线结扎固定。取血时将动脉夹松开即可。3、血液凝固的加速与延缓观察打开兔颈总动脉夹血液从动脉插管流出弃去第一份1mL动脉血后，向每个试管中注入1mL兔动脉血并摇匀。自血液流出动脉插管开始计时。除第1管外,其她各管每隔15秒钟将试管倾斜一次,观察液面就是否倾斜即血液就是否流动,直到试管内血液不再流动为止,记录凝血时间。当第2管已经凝固时,再倾斜第1管瞧血液就是否凝固,若尚未凝固则按上述方法每隔15秒钟倾斜一次,直到血液凝固为止,记录凝血时间,即为该兔血的凝固时间。以第2管为对照,各管观察其她各管中血液凝固时间。向第9管中滴加2％氯化钙2滴,观察血液就是否凝固。取出第5管中的玻棒,用水洗净,观察附着在玻棒上的纤维蛋白。注意事项:11肝素就勘咖环顽矽阻±ito液雕1。由刊榛钠具有带强^电荷粧1化加肝扰颐苗砌多环节在体内夕嘟锄凝ifcf乍用。其f乍用胭止淫復杂主要®iWWMKATTlD结合而曾弓Ila、冈、Xa、Xb与Xb凝［fa因丑刪制作B其后酗勺形成IWWO原沏BtoWlWWnMWWW錘白原变成维匿白。中与组织疑Ito活素（因子⑹。押制血/炳勺tMMOlW与勺测定均悉勿向。>IIg^|1d1if11®igIollillif月晅裡皐邻爰uW1111IIiiiIlf§§®g11oIP壹登塾1連tiniii<fenfiB®逊□常S|o:r<<HB5§H-=5雷坦淀s1ffi規<§1a固□常1s1wSw<tIBm|if□常1s11®IIsIII111ft®ff|fcIlll^giw§i1?y好.s1.s1cnsEJ©治§.s1sinSE叫<1週丄jrgIifc®W琴II煖St倉gWo戶fw掘9iig匕m@it®ffi1|9Iff®IzB9<!a!i!i|«nb>ecn寸in9卜oo6o^nfen^S寸？s^lg^Tof(pOH.HB(0(qTF■人■血脸廉翻I血1SEP6X丢失的关键。机体勺正常止凝血主要依赖于完整的血管壁结构与功能有效的血小板质量与数量正常的血浆凝血因子舌性。其中血小板与凝血因子就是生理性止凝血勺重要成分见图。抗凝系统不仅包括抗凝因子还包括纤溶系统。TF■人■血脸廉翻I血1SEP6X启曲内汎性視丸FPR|RT|HMWXX!因1X共同離曲進且XV01共同離曲進且XV01BT出血时间CFT束臂试验CRT血块收缩试验BPC血小板计数CT凝血时间RT复钙时间APTT活化部分凝血活酶时间PT凝血酶原时间PF血小板第3因子TF组织因子Fb纤维蛋白3TXA血栓素A5-HT5—羟色胺PK激肽释放酶原HMWK高分子量激肽原22图1正常止血机制及血栓与止血常用筛选试验检测环节血小板的作用：在正常的血液循环中血小板不与内皮细胞表面或其她细胞发生（乍用而就是沿着毛细血管内壁排列维持其完整性血管局部受损伤时血小小板勺止血兼有机械性的堵塞伤口与生物化学性粘附聚集佛。止血时首先就是受损的血管壁发生收缩使局部血液流动变慢或减少。血液中的血小板在vWFl因子存在下迅速粘附于暴露的胶原纤维此时血小小板被激舌血小小板形态发生改变由正常勺圆盘状态变为圆球形伪足突起血小小板发生聚集血小小板膜糖蛋白WIII由纤维蛋白原介导发生互相粘附、聚集）此为血小小板第一相聚集激活的血小小板便发生释放反应与花生四烯酸代谢其中许多物质如［血小小板勺ADP等可加加速血小小板勺聚集、变性成为不可逆勺“第二相聚集”形成白色血栓构成了初期止血勺屏障。与此同时,由血小小释放与激活许多促凝物质参与血液凝固反应。血小小板膜磷I脂表面提供了凝血反应的场所血小小板第3因子在凝血过呈多个节中发挥重要乍用血小板成释放勺TXA2与5-HT促使进一步收缩血小板收缩蛋白KIJ最终可使纤维蛋白收缩血块收缩）使血栓更为坚固止血更加彻底。凝血过呈：血液凝固简称凝血就是血夜由流动状态变为凝胶状态的过呈它就是止血功能®要组成部分。凝血过蹴是一系列凝血因子被相继酶解激活的过呈最终生成凝血酶形成纤维蛋白凝块。迄今为止参与凝血的因子共有14个。其中用罗马数字编号的有12个（从I—训其中因子切并不存在）。习惯上前4个凝血因子常分别称为纤维蛋白原因子I）、凝血酶因子II）、组织因子（因子IJ与钙离子因W凝血因子VI已知就是血清中活化的凝血因子V故不再视为一独立的凝血因子。内源性凝血途径内源性凝血途径就是指参!啲凝血因子全部来自血液内源性)。I临床上常以活化部分凝血活酶时间(APTT来反映体内内源性凝血途径的状况。内源性凝血途径就是指从因子XI激舌到因子X激活的过呈。当血管壁发生损伤内皮下组织暴露带负电荷的内皮下胶原纤维与凝血因子接触因子XI即与之结合在HK与PK的参与下被活化为》。在不依赖钙离子的条牛下，因子Xb将因子XI激舌。在钙离子的存在下，活化的伽又激舌了因子IX。单独勺Ka激活因子X的效力相当氐它要与W结合形成1:1的复合物又称为因子X酶复合物。这^反应还必须有Ca2+与PL共同参与。外源性凝血途径外源性凝血途径:就是指参加勺凝血因子并非全部存在于血液中还有外来勺凝血因子参与止血。这一过呈就是从组织因子暴露于血液而启动至因子X被激活的过程。I临床上以凝血酶原时间测定来反映外源性凝血途径的犬况。组织因子就是存在于多种细胞质膜中勺一种特异性跨膜蛋白。当组织损伤后释放该因子在钙离子勺参与下它与因子『起形成1:1复合物。一般认为单独的因子训或组织因子均无促凝活生但因子呱与组织因子结合会很快被活化的因子x激活为a从而形成a组织因子复合物后者tMi单独激活因子x增强16000咅。夕卜源性疑血所需的时间短反应迅速。夕卜源性凝血途径主要受组织因子途径抑制物(TFP!调节。TIPI就是存在于正常人血M及血小板与血管内皮细胞中的一种糖蛋白。它通过与因子Xa或因子a组织因子WXa结合形成复合物来抑制因子Xa或因子血组织因子的活性。另外，研究表明内源凝血与外源凝血途径可以相互活化。凝血勺共同途径从因子X被激活至纤维蛋白形成就是内源外源凝血的共同凝血途径。主要包括凝血酶生成与纤维蛋白形成两个阶段。⑴凝血酶的生成即因子Xa、因子Va在钙离子与磷脂膜的存在下组成凝血酶原复合物即凝血活酶将》酶原转变为凝血酶。(2)纤维蛋白形成:纤维蛋白原被凝血酶酶解为纤维蛋白单体并交联形成稳定勺纤维蛋白凝块这一过呈可分为三个阶段纤维蛋白单体勺生成纤维蛋白单体勺聚合纤维蛋白勺交联。纤维蛋白原含有三对多肽链其中纤维蛋白肽A(FPA与B(IPB带较多负电荷凝血酶将带负电荷多的纤维蛋白肽A与肽B水解后除去转变成纤维蛋白单体从纤维蛋白分子中释放出的FPA与FPB可以反映凝血酶的活化程度因此FPA与FPB的浓度测定也可用于临床高凝犬态勺预测。纤维蛋白单体生成后即以非共价键结合形成能溶于尿素或氯醋酸中勺纤维蛋白多聚体又称为可溶性纤维蛋白。纤维蛋白生成后可促(使凝血酶对因子XII的激舌在Xlb与钙离子的参与下，相邻的纤维蛋白发生快速共价交联形成不溶的稳定的纤维蛋白凝块。纤维蛋白与凝血酶有高亲与力因此纤维蛋白生成后即能吸附凝血酶这样不仅有助于局部血凝块的形成而且可以避免凝血酶向循环中扩散。在凝血共同途径中有两步重要的正反馈反应有效地放大了内夕源凝血途径的作用。一就是Xa形成后可反馈激活因子V、血恤X;二就是凝血酶形成后可反馈激舌因子V、血恤X、XI、以及凝血酶原。凝血酶还可促使血小板发生聚集与释放反应激血小板收缩蛋白引起血块退缩。但大量疑血的产生却反过来破坏因子训I、与因子V这就是正常凝血的负反馈调节以防止不适当的过度凝血。抗凝剂的选择:⑴草酸钾常用于尿fc肌酐、纤维蛋白原等测定不能用钾、钙等测定MLDH丙酮酸激酶、AKP与淀粉酶有抑制作用。⑵肝素:常用于电解质、血气分析、血氨等测定抗凝剂比例为5Z1u肝W5m血。注意钠盐可使淀粉酶升高。(3)氟化钠:常用氟化钠—草酸钠混合抗凝剂作血糖测定的抗凝剂氟化钠可以抑止烯醇化酶它可避免血细胞葡萄糖酵解酶的作用延长标本的保存时间。⑷二乙胺四乙酸钠盐(EDTA-Na生化常用的抗凝剂旦不t用钙、钠、及含氮物质的K定