检测方法验证和确认程序范文

检测方法验证和确认程序目标PURPOSE

本规程要求了XXXXXXX药业有限企业检测方法验证和确认程序、格式和要求。范围SCOPE本规程适适用于XXXXXXXX药业有限企业QC试验室检测方法确实认。本规程适适用于美国药典/国家处方集、欧洲药典或其它药典中记载检测方法，和来自于企业内部或外部已经验证检测方法。本规程重视在判别、纯度和含量检测方法。本规程将作为2.3提及检测方法验证常规指导，也适适用于最常见检测方法验证，如：判别测试关于物质和降解产物含量定量测试。控制关于物质和降解产物程度测试。原料药、起始物料、中间体及其它物料含量测定。微生物和生物检测方法不在本规程范围内。参考REFERENCEICHQ2(R1)分析方法验证文本及方法学现行美国药典<1225>药典方法验证现行美国药典<1226>药典方法确实认ICHQ7原料药良好质量管理规范（11月）FDA行业指南“分析方法和方法验证”（8月）职责RESPONSIBILITIESQC责任人或指定人员负责参加本规程起草、审阅、修订和更新。QA责任人或指定人员负责本规程审核和确保其被正确地、准确地执行。QC负责市售产品检测方法验证，确认这些方法在实际条件下适适用于本试验室测试。QC责任人或指定人员负责审核确认方案和确认汇报QC负责正确地统计试验数据。QC负责归纳数据、撰写汇报并递交给QC责任人或指定人员审阅。QC、QA责任人或其指定人员负责审核并审计全部试验室相关文件及规程以确保其准确和有效。质量部负责同意本规程及验证、确认方案和验证、确认汇报。定义DEFINITION检测方法使用者

使用检测方法部门、试验室或人员。系统适用性

它是用来验证系统能满足预期分析测试。当适用时，系统适用性应在方法用于检测或分析样品之前执行。指定数据，比如响应值和保留时间相对标准偏差（RSD）、拖尾因子、分离度和理论塔板等，将从重复进样得到。检测方法

指进行检测方式，应详细描述进行每个检测试验所必须步骤。它能够包含：试剂、对照品及样品溶液配制，仪器参数、标准曲线绘制、计算公式利用、可接收标准等。检测方法验证

为了证实所使用检测方法（新或改进过）与其预期目标相适应而进行一系列试验。对照品和样品溶液稳定性

用来评价对照品和供试品稳定性而进行检测。原料药

任何用于药品生产物质或混合物，并在药品生产过程中成为药品活性成份。这类物质提供药品活性或其它直接效应应用于诊疗、治疗、缓解、处理或预防疾病、或影响身体机结构或功效。判别测试

判别试验意在确认样品中一个被测物特征。通常将样品性质（如光谱、色谱行为、化学反应等）与参比对照品性质进行比对。杂质检验

指样品中杂货定量检测或程度检测，两种检测均是为了准确反应样品纯度。定量试验所需验证项目与程度试验相比是不一样。含量测定

指测定样品中被分析物含量。专属性

指在可能存在一些干扰组分（如杂质、降解物、基质等）时，对被分析物准确可靠测定能力。精密度

指在要求条件下对均质样品数次取样进行一系列检测，检测结果靠近程度（离散程度）。重复性

指在一样操作条件下，较短时间间隔内精密度。中间精密度

指试验室内部条件改变，如：不一样日期、不一样分析者、不一样仪器等情况下精密度。重现性

指不一样试验室之间精密度（合作研究，通常见于方法学标准化）。检测限（LOD）

指样品中被分析物能够被检测到最低量，但无须要准确定量。定量限（LOQ）

指在适当准确性和精密度下，能够定量测定样品中被分析物最低量。线性

指在给定范围内检测结果与样品中被分析物浓度（量）成百分比关系能力。准确度

指真实值或认可参考值与测量值之间相近程度。准确度有时也称真实度。范围

指样品中被分析物浓度（量）上限和浓度（量）下限之间一个区间，并已证实在此区间内，该检测方法具备适当精密度、准确性和线性。耐用性

指在试验参数被有意地发生细小改变时，检测不受影响能力，用以说明所验证方法在正常使用时可靠性。加标

向标准品、样品或空白剂中加入已知量已知物质，用于确定检测方法性能或进行仪器校验。响应因子

分析物产生信号与产生该信号分析物量比值。可接收标准

测试结果可接收数值程度、范围或其它适宜度量标准。相关系数（R）

研究变量之间\o"线性相关"线性相关程度量。信噪比（S/N）纠正与预防方法（CAPA）程序RROCEDURE检测方法使用者应该经过培训，具备对应经验和知识，以了解检测方法并能够执行它。确认应该由使用者执行，其结果将为检测方法能像预期那样地执行增加信心。检测方法确认和验证目标是说明该方法适适用于其确定用途，它包含试验过程中计划、系统和统计数据，以证实方法能满足其确定分析用途要求。于药典检测方法，假如确认不成功，而且经药典人员帮助也未能处理问题，则可断定此方法不适合在该试验室用于该样品。然后，可能有必要按照药典或相关法规开发和验证一个代替方法。确认要求应该基于方法复杂性和应用此法物质复杂性两方面来进行评定。只有那些适合特定方法确实认特征才需要做评定。确认程序程度与层次取决于使用者培训经历及经验水平、方法种类和与其相关设备/仪器、详细方法步骤、和/或被测物质。除非有迹象表明基本药典方法不适合检测该样品，日常执行基本药典检测方法无需确认。基本药典检测方法例子包含但不限于，干燥失重、炽灼残渣、多个湿化学方法比如酸度、简单仪器方法比如pH值测定等。检测方法验证进行程度应能反应检测目标和生产工艺所处阶段。非药典检测方法建立和现行方法改变必须进行验证。SOP-QC-025/A01显示了检测方法验证流程。在检测临床试验批次样品时，即使检测方法可能还未验证，但检测方法须具备科学性。并应显示检测方法适用性。应提供验证结果表格概要（比如：专属性、线性、范围、准确度、精密度、LOD和LOQ结果或数值）。此时不需要提供完整验证汇报，可在放行检测同时进行分析方法验证。检测方法确认和验证方案在确认或验证工作开展前需有已经同意确实认或验证方案。方案内容应包含但不限于以下项目：目标PURPOSE

应包含：背景介绍和方法描述。范围SCOPE参考REFERENE职责RESPONSIBILITIES定义DEFINITION方法学METHODOLOGY

程序部分应列出确认特征。偏差DEVIATION附件ATTACHMENTS修订历史DOCUMENTREVISEHISTORY确认和验证中全部原始统计和得到结果必须统计在执行方案或已编号检测统计本上，以方便与其它文件相互查询。确认和验证过程中若有偏差，需按偏差处理相关规程和调查方法相关规程执行。检测方法依照改变需决定是否要进行再次验证，再次验证也需依据本SOP执行，包含方案和汇报同意。以下改变情况需进行再次验证：相关指南改变，比如：ICH或药典原料药合成工艺改变检测方法和/或设备改变检测方法确认和验证汇报TestMethodValidationandverificationReport确认和验证方案完成后必须准备对应方法确认和验证汇报，并由质量部同意生效。推荐方法验证汇报中能够包含以下内容：总结SUMMARYOFRESULTS目标PURPOSE范围SCOPE物料和设备MATERIALANDEQUIPMENT方法METHOD结果和讨论RESULTSANDDISCUSSIONS

结果部分应包含验证项目、可接收标准和结果等。偏差DEVIATION

任何偏差均应进行调查和汇报。结论CONCLUSTION提议RECOMMENDATIONS参考REFERENCE附件ATTACHMENTS

能够包含全部参加人员资格或培训统计、仪器校验证书、试剂检验汇报单、试验统计，原始数据、图谱和结果一览表等。修订历史DOCUMENTREVISEHISTORY检验方法确认需确认特征

通常所要求确实认特征包含但不限于下表中提及。表1：进行检测方法确认要求确认特征特征

Characteristics分析方法类型

Typeofanalyticalprocedures判别

Identification杂质检测

Testingforimpurities含量分析

Assay定量检测

Quantitativetest程度检测

Limittest含量/效价

Content/Potency准确度

Accuracy--②--②专属性

Specificity①+-②-②-②重复性

Repeatability--②-+中间精密度

Intermediateprecision-+-+检测限

LOD+-②+-定量限

LOQ--②--系统适用性

Systemsuitability--②-②-②注：-表明通常不需评定特征+表明通常需评定特征缺乏该项目标分析方法，应由其它分析方法来补充表明有些情况下需要检测方法验证需验证特征验证程度取决于对应验证方案中要求检测性质及其用途。检测方法验证常见验证特征包含但不限于表2内容。表2：检测方法验证所需验证特征特征Characteristics检测方法类型

Typeoftestmethods判别Identification关于物质和降解物测试Testingforrelatedcompoundsanddegradants含量（仅限测试）·Assay(measurementonly)定量测试Quantitativetest程度测试Limittests专属性①

Specificity++++线性

Linearity-+-+范围Range-+-+准确度Accuracy-+-+精密度Precision重复性Repeatability-+-+中间精密度Intermediateprecision-+②-+②重现性Reproducibility--③--③检测限

LOD--③+-定量限

LOQ-+--耐用性

Robustness-③+④-+④系统适用性（如有）

SystemsSuitability(ifany)++++注：-表示该特征通常不需评定+表示该特征通常需评定①当一个检测方法不能满足专属性要求时，可由其它辅助检测方法作补充。②假如已经评价了重现性，就不需要再评价中间精密度。③基于检测性质可能需要。④依据所研究方法类型，在开发阶段考虑评定耐用性。下述6.8~6.17对详细验证特征进行逐一描述，以对每一个检测方法各种验证特征提供指导和/或提议。专属性

用于证实专属性方式取决与检测方法预期目标。通常一个检测方法不太可能对某一特定被分析物具备专属性（完全分辨）。在这种情况下，推荐使用两种或多个检测方法组合以达成所需分辨程度。判别专属性试验适宜判别测试应能区分出可能存在结构相同化合物。经过对从含有被分析物样品中得到正结果（能够经过与已知参比物比较），和对不含被分析物样品中得到负结果来证实方法分辨能力。对与分析物结构相同或相近物质进行判别试验，证实没有得到正响应。含量和杂质检验专属性试验可取得关于物质和降解物对含量测定来说，专属性应能分辨被分析物与关于物质和降解产物。实际操作中能够在纯物质中加入适当量关于物质和降解物，与未加关于物质和降解物样品测定结果相比较，以证实其含量测定结果不受这些物质影响。对关于物质测试，能够向原料药中加入含有适当量关于物质，经过证实这些关于物质之间能相互分离，并也能与样品基质中其它组分分离，以此来证实测试方法分辨能力。无法取得关于物质和降解物假如关于物质或降解物对照品不能得到，专属性能够经过将含一定量关于物质或降解产物样品测定结果与另一个成熟方法测定结果比较，比如与药典方法或已经验证其它方法（独立方法）进行比较。必要时，应包含对强力破坏试验条件下（即光、热、湿度、酸/碱破坏及氧化条件下）取得样品测定。对于含量，需要比较两种方法结果；对于杂质检验，需要比较杂质概况。峰纯度试验对显示被测物色谱峰是单个还是多个成份是很有用（如二极管阵列）。对色谱方法，应用经典色谱图来证实专属性，并在图上恰当地标出每一个成份。其它分离技术也应有类似考虑。在色谱方法中，应在一定程度上考查临界分离。对临界分离，可用两个洗脱程度最靠近化合物分离度来证实其专属性。线性Linearity

测试线性目标是为了证实整个分析系统（包含检测器和数据采集）有线性响应和/或在对应分析物浓度范围内直接成正比。线性关系是在检测方法范围内（见第6.10节）对方法进行评价。可用所提议检测方法，直接对原料药（用标准贮备溶液稀释）进行测定，以证实其线性。

对于低浓度溶液，可经过稀释贮备液配制。线性应经过目测一组信号与被分析物浓度或含量做图关系来评价。假如有线性关系，可用适当统计方法对测试结果进行评定，如用最小二乘法计算回归线。由线性回归估算所测得数据本身有利于数学评价线性程度。一些检测方法不论经过何种转换都不显示线性。在这种情况下，分析响应值应用样品中被分析物浓度（含量）适当函数来表示。应提交回归线相关系数、y轴上截距、回归线斜率。还应提交数据图表。也可包含其它统计参数。另外，分析真值与回归线偏差也有利于对线性作评价。为建立线性，提议最少用5个浓度。若用其它方法则应证实其合理性。范围特定范围通常是从线性研究中得到，并由检测方法期望应用目决定。范围是经过检测方法在指定范围内或在范围极限时都达成可接收程度准确性、精密度来建立。应考虑以下最小要求范围：对原料药含量测定：通常最少应涵盖测试浓度80%~120%内；对于关于物质测定：应最少涵盖关于物质汇报限至标准120%。对已知有异常功效、有毒或有意外药理作用关于物质，其检测限和定量限应与该关于物质必须被控制水平相对应。

在研制阶段进行杂质检验方法验证时，有必要依照提议（可能）程度来考虑范围。假如用一个试验同时进行含量测定和纯度检验，且仅使用100%标准，线性范围应最少涵盖从杂质汇报水平至含量标准120%。准确度

应在检测方法要求范围内建立准确度。原料药含量DrugSubstanceAssay

有多个方法可用于测定准确度：用该检测方法去测定已知纯度被分析物（比如：标准物质）；将提议采取检测方法结果与另一个成熟、准确度已经确定和/或定义了检测方法（独立方法）结果相比较；准确度能够在精密度、线性和专属性建立后，推论而得。关于物质（定量）准确度应经过分析加入了已知量关于物质样品方式来评价。在不能取得某种关于物质和（或）降解产物样品情况下，能够考虑与另一个独立方法测得结果相比较。应明确单个或总关于物质是怎样测定，比如：在任何情况下，可用与主要被分析物所占重量百分比或面积百分比。提议数据准确度评价应最少涵盖所要求线性范围3种浓度水平、不少于9次测定（比如：按完整检测步骤对3种浓度分别测定3次）。加入已知量原料药或关于物质：回收率应汇报百分回收率（与已知加入量结果进行比较）。用检测方法分析已知纯度样品（标准物质）：回收率应汇报测得平均值与可接收真实值之间差异及其置信区间。将检测方法与另一个已良好定性方法（参考方法）进行比较：回收率应汇报测得平均值与用参考方法测得结果之间差异及其置信区间。精密度Precision

精密度包含重复性、中间精密度、重现性。重复性Repeatability最少测试6份100%浓度样品溶液或9份覆盖方法要求范围样品溶液。推荐使用真实样品，并对每个重复分析进行完全测试。可用有代表性样品进行含量重复性测试。假如是关于物质测试，仅在无法得到含某种关于物质样品时可向样品中加入关于物质。或者，可使用强制降解样品或未加样原料药样品。中间精密度应确定随机事件对检测方法精密度影响。影响原因通常指不一样日期、不一样分析员、不一样设备等，这些原因不需要进行单独评定。中间精密度可在影响原因改变时重复测试得到。不需要单独考虑这些影响。（比如：可经过2名分析员在不一样日期或用不一样设备重复重复性或线性或准确度试验，以得到精密度）。重现性

重现性经过在不一样试验室间进行测试平均值进行评定。提议数据

在研究每一个精密度时，都应汇报标准偏差、相对标准偏差（变异系数）和置信区间。检测限和定量限检测限测定是经过对一系列已知浓度分析物样品进行分析，并以能可靠地测得被分析物最小量来建立。定量限测定通常经过对一系列含有已知浓度被分析物样品分析，在准确度和精密度都符合要求情况下，来确定被分析物能被定量测得最小量。依照信噪比（S/N）测定该方法仅适适用于出现基线噪音检测方法，比如色谱法。信噪比测定是经过比较含有已知低浓度被分析物样品与空白样品测定信号，来建立检测限和定量限。对于估量LOD，信噪比在3：1或2：1之间通常是可接收；对于估量LOQ，经典信噪比为10：1。依照响应值标准差和斜率该方法适适用于滴定、紫外和原子吸收光谱法等。检测限和定量限判定方法以下：LOD=3.3σ/S

LOQ=10σ/S以上公式中，σ是响应值标准差，S是校正曲线斜率。

斜率S可从被分析物校正曲线来估算，σ值可用下面方法估算：基于空白标准差，经过分析适当数量空白样品，然后计算其响应值标准差，测出分析背景响应值大小。基于校正曲线，研究含有检测限或定量限范围内被分析物样品以得到特定标准曲线，回归线剩下标准差或回归线y轴截距标准偏差都可作为标准偏差。提议数据必须提供检测限/定量限和测定检测限/定量限方法。假如检测限是依照信噪比得来，应提供相关色谱图作为证实。假如是经过计算或外推法得到检测限估算值，可对一系列靠近或等于检测程度样品逐一检测来论证这一估算值。可经过分析适当数量，已知浓度靠近或等于定量限样品来证实定量限。耐用性

需测试此参数方法包含含量和纯度。依据所研究检测方法类型，应在开发检测方法阶段评定耐用性。与所描述方法比较，以一系列变动条件来分析对应溶液进行评定。经过分析一系列被处理过试液来评定。耐用性评定结果应是建立一系列系统适用性参数（如分离度试验），以确保在任何时候使用该检测方法都是有效。应展示经典图谱。对于液相色谱，经典变量是流动相pH、温度和流速、流动相组成、不一样批号或不一样供给商色谱柱等。对于气相色谱，经典变量是不一样批号或不一样供给商色谱柱、温度和流速。假如样品制备时需过滤，应证实过滤前后样品一致性。假如样品需要超声和/或混合时，应评定样品制备时超声和/或混合时间。当溶液放置时间超出二十四小时或指定时间时，应评定检测方法分析物溶液稳定性。稳定性指示性质在对稳定性指示方法进行验证时应评定稳定性指示方法（强制降解），应包含表3中列出空白剂、活性成份和配方颗粒强迫降解条件。表3：稳定性指示分析强降解条件处理

Treatment极端强降解条件

Extremestressedcondition酸

Acid样品/2NHCl，回流4小时

Sample/2NHCl,reflux4hours碱

Base样品/2NNaOH，回流4小时

Sample/2NNaOH,reflux4hours氧化剂

Oxidative样品/3%H2O2/室温，二十四小时

Sample/3%H2O2/roomtemperature,24hours热

Thermal样品/干燥/烘箱内105℃加热，5天

Sample/dry/heatinovenat105热/湿度

Thermal/Humidity样品/顶空湿度饱和（MSH）/烘箱内90℃，48小时

Sample/MoistureSaturatedHeadspace/ovenat90湿度

Humidity样品/干燥器内加水/室温，5天

Sample/desiccatorswithwater/roomtemperature,5days阳光测试

Suntest样品/UV/5天

Sample/UV/5days光稳定性

Photostability样品/干燥/UV下5天

Sample/dry/underUV,5days样品溶液/UV下，5天，无色烧瓶

Samplesolution/underUV,5days,clearflask样品溶液/UV下，5天，棕色烧瓶

Samplesolution/underUV,5days,amberflask按照降解约为10%-20%来选择条件。