hplc测定5种芦荟中芦荟苷的含量

hplc测定5种芦荟中芦荟苷的含量

芦苇（alo）是百合科的一种多年生草本植物。这些草本植物集医学、食用、美容和观赏于一体。其味苦性寒,归肝、胃、大肠经,具有清肝热、润肠泻下、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤和调节血糖等多种药理作用。芦荟苷是其主要有效成分。2008年5月26日,我国卫生部第12号《公告》,批准了库拉索芦荟凝胶为新资源食品及原料,明确了芦荟食品产业发展定位。但芦荟的种类繁多,可以入药用的只有10多种,可食用的芦荟也只有几种。如果误食了观赏性芦荟,就可能会因中毒引起恶心、呕吐、腹泻、腹痛和血便等。在300多种芦荟中,目前获批可以作为新资源食品及原料的只有库拉索芦荟。因此,对库拉索芦荟的特征进行深入的研究是非常有必要的,可以保证芦荟食品的安全性。笔者采用HPLC法测定5种常见芦荟(华芦荟、木立芦荟、库拉索芦荟、不夜城芦荟和海虎兰)中芦荟苷的含量,并从其液相色谱图上获取色谱特征对5种芦荟进行区分,以期为库拉索芦荟的进一步开发利用提供依据。1材料和方法1.1材料表面1.1.1研究的对象芦荟(中华芦荟、木立芦荟、库拉索芦荟、不夜城芦荟和海虎兰),自己栽培或购买于花卉市场,由张家口市药监局正高级中药师孟燕鉴定。1.1.2主要设备紫外检测器,四元泵,HP化学工作站,均购自Agilent公司;JN-5200DT超声波清洗机,购自宁波江南仪器厂。1.1.3芦荟大黄素对照品,5.芦荟苷对照品,由成都曼思特生物科技有限公司提供,编号A0371-20mg;芦荟大黄素对照品,由中国药品生物制品检定所提供,编号110709-200806;其他试剂均为分析纯,市售。1.2方法1.2.1提取液的制备精密称量芦荟鲜品适量,粉碎,用50ml浓度80%乙醇浸泡,超声振荡提取20min,移取上清液,残渣重复提取2次,提取液合并,过滤、定容,即得。1.2.2溶剂的溶解精密称量0.0007g芦荟苷标准对照品,用无水甲醇溶解并定容至1ml,即得;精密称量0.0013g芦荟大黄素标准对照品,用无水甲醇溶解并定容至1ml,即得。1.2.3流动相、柱温色谱柱为ODS2(6mm×150mm,5μm),检测波长为359nm;流动相为无水甲醇-浓度1%醋酸(45∶55,V/V);柱温为40℃;流速为1ml/min。1.2.4木立芦荟标准品溶液的制备①色谱系统适用性。以芦荟苷为指标考察色谱系统的适用性。R1为芦荟苷与其前一组分的分离度,R2为芦荟苷与其后一组分的分离度。②精密度试验。芦荟苷标准品(700μg/ml),稀释80倍进样,每次20μl,重复进样5次,分别测定峰面积,计算芦荟苷含量的RSD。③重复性试验。按溶液的制备方法制备木立芦荟溶液3份,用高效液相色谱法测定,每份进样3次,每次进样20μl,分别测定峰面积,并计算RSD。④回收率试验。取适量华芦荟样品3份,分别按高、中、低加入芦荟苷对照品,按上述方法提取、过滤、浓缩、定容、进样分析等,根据测定结果计算回收率和RSD。1.2.5分析采样质量在“1.2.2”色谱条件下,每个样品重复进样3次,每次20μl,分别测定峰面积,计算芦荟苷的含量。1.2.6对芦笋的色度特征的分析建立5种芦荟的HPLC图谱,并对图谱特征进行分析。2结果与分析2.1响应面试验①色谱系统适用性。由表1可知,5种芦荟的分离度均较好,理论塔板数均大于6000,表明系统的适应性良好。②精密度试验。计算得RSD为2.88%(n=5),表明该方法有较好的精密度。③重复性试验。计算得RSD为1.6%(n=3),说明重复性较好。④回收率试验。由表2可知,平均回收率为108.0%,RSD为2.2%,表明该方法准确,可靠,可用于芦荟中芦荟苷的含量测定。2.2夜城激励机制1.32g/g由表3可知,5种芦荟中芦荟苷的含量分别为:华芦荟72.92μg/g、不夜城芦荟2.62μg/g、木立芦荟614.30μg/g、库拉索芦荟135.30μg/g和海虎兰212.50μg/g;其中,只有华芦荟中检测出了芦荟大黄素,含量为33.45μg/g,而其他芦荟中均没有检测出来。2.3库拉索采用不同峰高树聚类分析检测图2～7表明,芦荟的色谱图上有一典型的特征:在3～5min范围内有一组双峰,其中后一组分经对照品验证是芦荟苷(色谱图上标注“1”的组分),该双峰保留时间相近,但分离度较好,基本达到了基线分离。库拉索芦荟与木立芦荟的色谱图相似,该双峰峰高基本相等(库拉索芦荟左边的峰高稍低,但差别不明显),在其后没有明显的色谱峰。华芦荟组双峰前低后高,峰高相差明显,且在15min处有一小峰,证明该组分是芦荟大黄素(色谱图上标注“2”的组分)。海虎兰色谱图上该双峰峰高相近,不同之处是在此双峰右侧接近5min处有一小峰,其后再没有色谱峰。不夜城芦荟色谱图上该双峰特征不明显,此双峰都较低,且前高后低,芦荟苷组分峰高很低,说明芦荟苷含量较低,在右侧接近5min处有一与芦荟苷峰高相近的色谱峰,其后再没有色谱峰。由色谱图可知,库拉索芦荟在3～5min出现的双峰左边的峰高稍低,但相差不明显,双峰基本达到基线分离,在其后再没有明显的色谱峰。该特征仅与木立芦荟的色谱图相似,与华芦荟、不夜城芦荟和海虎兰色谱图相差较远,较易区分。3超声振荡和回流提取法(1)试验比较了库拉索芦荟果皮和果肉中芦荟苷的含量,库拉索芦荟果皮中芦荟苷含量为177.6μg/g,其果肉中的含量为18.28μg/g,比果皮中的低很多(图8～9)。(2)试验用华芦荟表皮研究了超声波振荡和回流2种提取方法对芦荟苷的提取效率。结果表明,超声波振荡提取液中芦荟苷含量为208.1μg/g,回流提取液中含量为72.79μg/g。显然超声振荡提取法要优于回流提取法。因此,试验采用超声振荡提取法(图10～11)。(3)芦荟苷和芦荟大黄