石油降解率的测定

产生物表面活性剂的石油降解菌AciiietobacterBHSN的研究曹娟等培养结束后在25mL石油培养基中加入5mL正己烷及用正己烷溶解10000mg/L菲25卩L内标,充分振荡溶解石油。然后倒入50inL离心管中，于4°C,lOOOOr/niiii离心5min,取上清液用正己烷重复萃取2次，合并萃取液定容至25inL,然后取luL上清液进行GC测定。气相色谱仪为HP5890,色谱柱为HP・5。色谱条件：80£保持511讪，以3°C/min升至165°C,保持2min,再以5 升至270°C，保持lOniiiio进样口温度250°C,检测器温度280°Co选用此法的原因有：实验用的是液体培养基，且石油的体积分数为0.5%,含量较低。因此排除重量法；实验中液体培养基近30ml,与该方法的数据较为接近；且，该文献是测定单种菌对石油的降解效率，与后续实验目的一致；实验过程较简单，步骤清晰，需要的实验器材较常见，因此可减少实验器具的浪费，节省开支；北极海洋沉积物石油降解菌的筛选及系统发育分析林学政等降解率的测定（重量法）：将石油降解菌活化后以2%的接种量接种于含50mL筛选培养基的100111L三角瓶中，于5°C下振荡（150r/niiii）培养14d。培养液用10mL正己烷萃取2次，收集合并上层有机相，经旋转蒸发和50°C烘干，置于干燥器中冷却至恒重，称重。以不接菌的培养基经上述步骤处理为对照。除油率按式（1）计算:n=((Mo-M)—(McO-Mc))/M0x100%(1)式中，Mo为处理样的接菌前石油的质量(g);M为处理样经接菌处理后残油的质量(g);Meo为对照处理前石油的质量(g);Me为对照样经振荡14d后的残油质量(g)。生物表面活性剂鼠李糖对水体中石油短降解的促进作用吴小红等石油降解率的测定：由于本实验中含油量远大于2mg/L,因此采用重量法测定油含量。往石油坯培养基中加入筛选所得菌和鼠李糖脂溶液，经摇床培养(180T/min)后，取样分析。首先加入1+1硫酸(51111硫酸/1L样液)，酸化样液，然后转至分液漏斗，加入氯化钠(其样约为样液的8%),用25ml石油醯(30-60°C)萃取3min,静置分层，收集上层液；用石油瞇萃取样液2次，合并上层液用干燥的无水硫酸钠脱水，过滤，收集滤液于60°C水浴蒸至近干，在置于65°C恒温箱内烘干lh,然后放入干燥器中冷却30nmi,称重。以不接菌的培养液为对照组。石油怪降解率的计算：mi-m2〈—降解率%二 X100nil式中，mi：对照组残油重量(g)；m?:样品残油质量(g)o高温姪降解菌在含油污水生化处理中的应用刘俊强等人单株菌种石油降解率的测定：将筛选的各个菌种用无菌水制成菌悬液，以相同加入量接入到原油培养基中，并放置于50°C,180r/niin的摇床培养7d,用平板计数法测定活菌数，并用紫外分光光度法测定残余油含量，按下式计算石油降解率讯％):紫外分光光度法测定残余油含量：I.残余油含量1山一初始油含量"100%5•高效的石油降解菌的筛选鉴定及修复能力研究汪杰等采用非分散红外石油仪进行石油炷含量测定(GB/T16488-1996)o柴油含量测定：测定时，将三角瓶中液体全部倒入玻璃离心管屮,lOOOOr/niiii离心lOiiiiii,倒出上清液转入12-51I1L分液漏斗屮；加3滴体积比1:1的盐酸酸化，加3.5gNaCl为破乳剂，用5111L精制CC14溶液清洗原三角瓶，倒入分液漏斗，同时加入10111LCC14,萃取5niiii；下层CCh相经装有无水Na?S()4脱水柱除水后，归入25mL比色管中，萃取两次后定容至251I1L,取0.5mL重新定容于251I1L比色管中。用lcm石英比色皿在红外分光光度仪下进行测定，与标准曲线对比得到结果。土壤石油姪含量测定：测定时取士样2.5g,放入碾钵中，滴加3滴1:1(体积比)盐酸，加入2.0g无水Na2S04研磨均匀后，倒入50n)L玻璃离心管中；用移液管取25111L精制CC14至离心管，拧盖后，放入超声清洗机中进行超声萃取，萃取时间为40111B1；完毕后,6000r/niiii离心，取上层澄清液0.5mL于25mL比色管中，定容后测疋O柴油日平均降解速率计算公式如下:丫=(Wa-Wb)/(ta-tb)(l)式中，丫为日平均阵解速率(mg-L^d1),Wa为第a天溶液柴油含量(mg・L"),Wb为第b天溶液柴油含量(mg・l/)。根据美国环境保护局以及其他研究者的报告(Piiiice,1993；Jonge,1997；张旭,2000),土壤微生物对石油类污染物的降解遵循一级反应关系，即：dC/dt=-KyC(2)式中，C为土壤中油含量(mg-g1)；Kt为基质去除常数(d'1)o由式(2)可得：C/G=exp(-ArQ (3)将式(3)两边取对数后可得式(4).hiC=liiCo-K7t(4)以时间t为横坐标，InC为纵坐标，对实验点做线性回归，则直线的截距为hiC0,斜率为从而导出土壤中石油坯的半衰期(ti/2)公式(5).11/2=1h3/Kt(5)6.辽河油田冻融石油污染土壤中原位修复微生物李素玉等降解试验采用以原油为碳源的选择性液体培养基，含油量0.5%,接种量为10%,细菌置32°C恒温摇床+150i7niiib振荡培养7d。真菌置2LC恒温摇床中150〃min,振荡培养帀。试验结束时，用石油醛萃取降解液中残留的石油，紫外分光光度计法测定降解液中的石油含量,以不接菌的空白培养基为对照，通过下式计算石油的降解率：降解率(%)=x100%降解率(%)=x100%.耐热石油坯降解混合菌的筛选及其群落结构分析刘其友等石油姪的测定方法：石油姪的浓度依据国标“GE/T16488—1996水质石油类和动植物油的测定红外分光光度法”进行。将含有菌液的原油无机盐培养基转移至2501111分液漏斗中，利用lmol-L1的盐酸使其酸化至pHW2,用20mL坏保专用CCb洗涤三角瓶，洗涤液也加到分液漏斗中，然后加入2g氯化钠破乳，充分振荡3min后，静置5inin待其分层，将萃取溶液转移至一新的三角瓶中，用CCb萃取，重复操作两次，合并三次的萃取液。将15mm厚的无水Na2S04(300°C烘干2h)平铺于玻璃砂芯漏斗内，萃取液缓慢通过砂芯漏斗除去其中的水分，随后用真空泵将滤液抽至抽滤瓶中，用适量CCb洗涤砂芯漏斗，洗涤液也转移至抽滤瓶中。将抽滤瓶中的滤液移至lOOniL容量瓶中，用CCh定容至刻度、摇匀。并用OIL510型全自动红外分光测油仪测定石油类含量，并计算石油坯的降解率。8•石油降解菌的分离鉴定及石油污染土壤的细菌多样性任随周等石油中饱和姪和芳香姪含量的分析：用石油醯将培养基中残余的石油提取出来，浓缩一定体积后采用FiiuiigaiiTraceDSQ(ThennoElectronCoipoiatio)气质联用仪进行分析，色谱柱为DB-5MS(30111x0.25旧nx0.25mm),气相色谱操作条件为：进样口温度数220°C,程序升温，扫描范围19〜650ainu,扫描速度500aiini/s,电子能量70eV,离子源温度250°C,传输线温度250°C,载气流速l.Onil/iiiBio石油污水灌区的微生物生态及其降解石油的研究刘期松等微生物降解石油的测定方法：取液体培养基25ml置125ml三角瓶中,力ni0-15mg油,约占0.04-0.06基质,震荡培养,28°C,7天。萃取培养液中的油：用处理过的二氯甲烷或四氯化碳萃取未被降解的石油。萃取油的测定：用5-lOnil的四氯化碳洗烧杯中上述残渣，将溶液置石英槽中，以四氯化碳作参比。于IR-27G红外分光光度计上在3200-2800nm1(3.43|Lim)扫描，测定各点2491nm'1(3.43gm)的吸光强度。石油污染土壤生物修复菌Z®・B的分离鉴定与调控研究司美茹等石油组分分析：在250ml培养瓶中放入501H1石油/无机盐液体培养基(石油质量浓度为1.0g/L),接种菌剂5%(体积分数，下同),于20°C,180r/nunJg床培养14d,制的培养发酵液2。采用HP5890SERIESII气相色谱仪和HP5972质谱仪进行降解前后的石油组分分析。培养发酵液2用20ml石油醯萃取后进行GC/MS分析。GC/MS条件：HP・5石英毛细管色谱柱(30mx0.25inmx0.25)im),He载气，进样口温度290°C,检测器温度300°C；升温顺序：初始80°C,恒温5iiiiiiW3°C/mill升至290°C,并保留lOniiiio石油污染土壤生物修复高效菌的降解特性徐金兰石油姪的测定：在灭菌的原油培养基中接种石油降解菌，经定时摇床培养后，将PH调至3以下，转移至分液漏斗中，加入201111CC14剧烈震荡100次以萃取培养基中的坯类物质，静置分层。下层液用无水硫酸钠脱水干燥后，过滤至501U1容量瓶中；上层液再用CCh萃取2次，过滤至50ml容量瓶中，定容后用非分散红外石油仪测定石油坯质量浓度按下式计算石油炷生物降解率:65和G分別为对照试样和接种菌试样中残余石油姪质量浓度，mg/Lo生物菌剂对石油污染土壤生物修复作用的研究黄廷林等石油姪含量采用OCMA・350非分散红外石油分析仪测定。石油组分采用气象色谱•质谱联用仪测定。气象色谱(GC)为Trace2000型,质谱(MS)为Voyager,柱子DB-5，长30m,固定相0.25卩m厚,测试相对分子质量范围为30-450,前6~10min为溶剂峰。分析条件为：100°C开始，每分钟上升10°C至200°C,再以5°C/mill升至280°C，保留lOniiii,质谱与色谱连接温度为250°Co海洋石油降解菌剂在大连溢油污染岸滩修复中的应用研究郑立等石油降解率计算：将降解后的石油培养液及阴性对照在100OOr/niiii,1Oniiii的条件下离心去除细菌细胞，准确量取5Oinl二氯甲烷萃取其中的残余油污。从二氯甲烷相吸取20ml萃取液转移到尖底烧瓶中°40°C减压浓缩，称量带有残留油污的烧瓶总重，减去烧瓶本身重量，得到残留油污的重量m,按照以下公式计算求得降解率(D)：D={(m0—2.5m)/mo}xioo%式中为最初加入培养基中的石油重量。另从二氯甲烷相准确量取4inl溶液，用无水Na2SO4脱水过0.22pm耐有机溶剂滤月莫。量取2ml氮气吹干，以lml正己烷重新溶解，移入GC样品瓶中，用GC-FID,GC-MS对石油降解后残留的烷姪芳香姪组分进行分析测定。GC-FID气相色谱条件：色谱柱HP-5MS(30mx0.25nmix0.25nm)；进样口温度260°C,载气为高纯He,流速l.Onii/niin,恒流模式，不分流进样1卩1。柱温箱采用升温程序：起始50°(?,保持2111111,以6.0°C/mill升至300°C,保持16min,采用选择离子扫描模式(SIM)oGC-MS的分析条件：色谱柱HP・5S(30mX0.25mmX0.25卩m)；进样口温度280°C,离子源温度250°C。载气为氨气(99.999%),流速1ml/min。程序升温：50°C保持2iiiin,以6°C/mill升至300°C,保持lOmin。扫描模式：SCAN,SIM模式；扫描质量范围：50-500o进样：HP7683自动进样器，不分流样lul。数据采集和处理：HP3365化学工作站。海洋石油降解微生物的筛选及降解条件的优化包木太等石油降解率的测定方法：降解率的测定采用紫外分光光度法。在紫外区225.50iun处，原油浓度在0~100mg/L范围内与其OD值具有很好的线性关系。原油降解率的计算方法：生物降解率=(对照吸光度■培养液吸光度)/对照吸光度xlOO%气相色谱与紫外分光光度法评价石油怪类污染物的微生物降解过程田贞乐等在经微生物降解的样品中，准确的加入linl邻二氯苯储备液作为内标物，加入10ml石油醯，超声振荡3min后，转移到125ml分液漏斗，静置分层，将下层溶液收集于原锥形瓶屮，上层溶液则用25ml容量瓶收集。再在收集后的下层溶液中加入10ml石油醛，用相同的方法重新萃取一次，弃去下层溶液，将上层溶液一并收集于25ml容量瓶中，并用石油醛稀释至刻度，摇匀，用于GC测试。测定条件为：色谱柱：SE30毛细管柱（30mx0.25mm）；气化室温度300°C；检测器（FID）温度300°C；柱温程序：起始温度温度300°C；柱温程序：起始温度60°C（lnuii）15°C/min>240°C10°C/min>300°C；进样量2ul。取0.5ul上述所得GC测试溶液于25ml容量瓶屮，用石油醯稀释至刻度，摇匀；用含有相同浓度邻二氯苯内标物的石油醯为空白，在2501U11波长下测定其吸光度。南海高效石油降解菌的筛选及降解特性研究姜胖等石油降解菌降解特性研究：采用GC-MS对6株降解菌的石油降解特性进行分析。将降解后产物除菌体后用二氯甲烷萃取，并从二氯甲烷相准确量取4mL溶液，用无水Na2SO4脱水，过0.22uin耐有机溶剂滤膜。量取2mL氮气吹干，以lml正己烷重新溶解，移入GC样品瓶中,GC-MS对石油降解后残留的烷姪、芳香怪成分进行分析（内标法）测定。GC-MS运行条件为：HP・5MS谱柱（30mX0.25imnX0.25nin）；载气为氨气；样口温度50°C；GC-MS接口温度280°C；柱温（程序升温模式）：初