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文档简介
第六章蛋白质的分离纯化和表征一、蛋白质的性质
1.蛋白质的酸碱性蛋白质也是两性电解质，溶液的pH可以改变蛋白质的带电情况。蛋白质的等电点（等离子点）受组成蛋白质的酸性氨基酸和碱性氨基酸数目的影响。
2.蛋白质的大分子特性
a渗透与渗透压
溶剂分子由稀溶液向浓溶液单方面的净移动称为称为渗透。渗透压是溶液分子在平衡浓度时的净水压，是蛋白质的依数性之一。
b蛋白质分子的扩散现象由于浓度差导致的溶质分子的净迁移，称为扩散。扩散系数的大小与蛋白质形状、大小及溶剂的粘度有关。
c蛋白质分子的沉降特性蛋白质分子在溶液中受到强大的离心力作用时发生移动的现象称为沉降。沉降的速度与蛋白质分子的大小、形状、密度及溶剂的密度和粘度、温度等有关。沉降系数用S做单位。
d蛋白质的胶体性质及沉淀分散相质点的半径介于1-100nm时形成的均匀分散的溶液，称为胶体溶液。蛋白质溶液作为胶体溶液，稳定的原因是蛋白质分子表面的水化层和双电层。沉淀蛋白质的方法：大量的中性盐、极性有机溶剂、重金属盐、生物碱试剂、加热二、蛋白质的分离纯化方法（一）根据分子大小不同的纯化方法
1.透析和超滤2.密度梯度离心：蔗糖梯度、聚蔗糖梯度3.凝胶过滤层析(分子排阻层析)分离蛋白质常用的凝胶的商品名：Sephadex某一蛋白质样品在凝胶柱上的分配系数Kav=Ve:该蛋白质的洗脱体积Vo:凝胶柱的空隙体积(外水体积)Vt:凝胶柱的总体积Ve－VoVt－Vo凝胶过滤层析原理示意图（二）利用溶解度差别纯化蛋白质蛋白质的溶解度受到溶液的pH、离子强度、介电常数和温度等因素的影响，所以改变以上条件，可以选择性地控制蛋白质混合物中某一成分的溶解度，达到分离纯化蛋白质的目的。1.通过改变溶液pH值的等电点沉淀法2.通过改变溶液离子强度的盐析、盐溶3.有机溶剂的分级沉淀4.通过改变温度的沉淀法（三）根据电荷不同纯化蛋白质
1.电泳纸电泳或薄膜电泳粉末电泳细丝电泳
凝胶电泳平板电泳柱状电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳
（1）聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)浓缩胶样品分离胶在PAGE中，除了一般的电荷效应外，还有凝胶对样品
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