曼陀罗种子中脂肪酸的提取及毒性研究

曼陀罗种子中脂肪酸的提取及毒性研究

它也被称为早花、桃花、狗坚果和洋金花。这是茄子科的一种大型草本植物。它来自印度。它现在广泛分布在温带和热带地区。分布在中国各省，主要分布在农田、道路和房屋附近。曼陀罗具有平喘、止咳、解痉、镇痛、麻醉等作用,临床上可用于治疗关节痛、哮喘、咳嗽、胃肠痉挛、神经性偏头痛、跌打损伤等症。现代医学和临床研究发现,曼陀罗具有多种生物活性,医学上可广泛应用于多种疾病的治疗以及农林业上对多种病虫鼠害的防治。在曼陀罗化学成分研究方面,20世纪40年代,Potlog测定了曼陀罗中糖苷(Glucoside)含量,60年代Wahid研究了曼陀罗中莨菪碱(hyoscyamine)含量,随后,Yoshiteru,Kazushi,Mohini等也先后报道了曼陀罗中的化学成分,姚士岩等用乙醇从曼陀罗叶、花中分离并鉴定了莨菪碱和东莨菪碱;金振国对曼陀罗植株和果实挥发油化学成分进行了对比分析;江恒等测定了曼陀罗种子中托烷类生物碱的含量;最近,努尔阿米娜·阿尤甫等研究了曼陀罗种子中总黄酮含量测定及提取工艺,而曼陀罗种子中脂肪酸化学成分及毒性的研究未见报道。本研究采用GC-MS技术研究了曼陀罗种子中脂肪酸的化学成分,并采用饲料混毒法测定了曼陀罗种子脂肪油对小鼠的毒性,为曼陀罗植物资源的进一步开发及曼陀罗种子脂肪油的利用提供理论依据。1材料和方法1.1小鼠与动物中心曼陀罗(DaturastramoniumL.)种子于2005年10月份采自陕西省杨陵区,样品经阴干后粉碎,低温保存备用。试验用鼠:昆明种ICR系6周龄小鼠(Musmusculus),一级标准,合格证号:陕(医)动字第08-004,分别由第四军医大学动物中心、西安交通大学医学院动物中心提供。实验动物喂养的室温控制在(22±3)℃,相对湿度50%～70%,饮水、饲料清洁。1.2仪器TRACEDSQGC-MS(气相色谱-质谱)联用仪,R205B型、R502型旋转薄膜蒸发仪(上海申生科技有限公司),SHB-B95型、SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司),水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂),101-1型干燥箱(北京化玻联医疗器械有限公司)等。所用试剂均为分析纯。1.3方法1.3.1脂溶性提取物的合成采取文献的方法并做适当改进,具体方法是精密称取样品100.0g置1000mL圆底烧瓶中,以石油醚(60～90)℃为溶剂回流提取8h,旋转减压蒸馏回收溶剂,得淡黄色脂溶性提取物23.2g,得率为23.2%。样品的甲酯化处理采用氢氧化钾-甲醇直接酯化法。取脂溶性提取物约1.0g置于20mL试管中,加入5mL苯-石油醚(1∶1,V/V)混合溶剂使之溶解,再加入0.4mol/L氢氧化钾-甲醇溶液5mL,振荡混匀,40℃水浴中恒温30min,再加入10mL超纯水,静置,完全分层后取上清液,丙酮稀释10倍后作为GC-MS分析试样。1.3.2ms测定条件RACEDSQGC-MS联用仪(美国Finnigan公司),DB-5MS(30m×0.25mm×0.250μm)弹性石英毛细管柱,程序升温40℃,保持2.5min,以6℃/min升至240℃,保持10min,进样口250℃,传输线230℃,载气He气,流速1.0mL/min,不分流进样,进样量1.0μL。MS测定条件:电离方式EI,70eV,离子源温度250℃,质量扫描范围35～400amu,发射电流100μA,检测电压1.4kV。利用随机Xcalibur工作站NIST2002标准谱库自动检索各组分质谱数据,按面积归一化法计算各组分含量。1.3.3试验大鼠的饲养采取文献的方法并做改进。将曼陀罗种子脂肪油样品按10%、15%和20%的量直接加入到小白鼠饲料中,混合均匀,加水压饼,烘箱中烘干后备用。对选择供试的小白鼠个体,按雌雄逐个秤量体重,随机分组编号,每个处理所用的试验鼠为10只,一罐一鼠,单独饲养。每天按一定量加入饵料并称量剩余饵料,连续饲喂5d,观察各供试鼠在取食后的反应情况,试验结束后称量试鼠体重,对照组用普通饲料喂养,方法同试验组。按下公式计算试鼠对饵料的摄食系数:摄食系数=实验组取食饵料量/对照组取食饲料量。2结果与分析2.1曼不同指标治疗药剂采用GC技术从曼陀罗种子脂肪酸中共分离出60种化学成分,应用MS对各成分进行了鉴定,共鉴定出39种,其含量占总量的93.69%(表1)。从表1可看出,曼陀罗种子脂肪酸的化学成分种类较多,主要化学成分有1,20-二十碳二酸(34.55%)、Crinan-3-ol,1,2-didehydro-,(3à)-(13.41%)、8,11-十八碳二烯酸(4.56%)、8,11,14-二十碳三烯酸(Z,Z,Z)(4.39%)、2,3,3-三甲基辛烷(4.35%)、7,10-十八碳二烯酸(3.61%)、亚油酸乙脂(2.64%)、α-亚麻酸(2.34%)、cis-乙酸环己脂-2-丙酸(2.34%)等。在曼陀罗种子脂肪酸中含有大量的不饱和脂肪酸,且主要为多不饱和脂肪酸,这些多不饱和脂肪酸因具有多种生理功能而被称为功能性油脂,其中主要的是共轭亚油酸(CLA),在曼陀罗种子脂肪酸中含量达8.48%。1987年美国威斯康辛营养研究所的Ha及其同事从牛肉脂肪中发现了一种具有抑癌活性的成分,并证明此成分是CLA。二十多年来的大量研究证实,CLA具有抑制癌症和肿瘤的形成、减肥、抗动脉粥样硬化、改善免疫功能、降低胆固醇、促进生长等多种生物活性,还能增加大鼠骨骼形成的速率,对骨质疏松症、风湿性关节炎等有一定的缓解作用,对小鼠中的红斑狼疮也有一定的保护抑制作用。因而近年在国际上越来越受关注,在美国等西方国家,CLA已作为一种新型保健品投放市场。曼陀罗种子脂肪酸中还含有1.36%的去氢胆酸(化学名3,7,12-三氧-5β-胆烷-24-酸)。去氢胆酸为水性利胆剂,可促进肝细胞分泌大量稀薄的胆汁,增加胆汁容量,使胆道畅通,消除胆汁淤滞,防止上行性胆道感染和排除胆道小结石,起到利胆作用,对脂肪的消化和吸收也有一定的促进作用,现在临床上主要用于治疗慢性胆囊炎、胆石症、胆道功能失调、胆囊切除后综合征及慢性肝炎等的辅助治疗。去氢胆酸对大鼠肝脏胆汁的分泌也有促进作用,经口或十二指肠给药均能明显增加胆汁分泌,且维特时间较长。2.2对试鼠体重的影响测定结果见表2。从表中可以看出,在试验期间,试鼠无死亡现象,摄食系数在0.95～1.02之间,与对照没有明显差异;试验5d后3个含量组的试鼠平均体重分别增加了4.01、4.31和5.20g,而对照组增加4.71g,差异均显著,试验组试鼠平均体重的增加与饲料中曼陀罗脂肪油的含量呈负相关,含量10%的试验组试鼠体重增加超过对照组,说明试鼠饲料中适量的曼陀罗脂肪油对试鼠的体重增加有促进作用;从摄食系数也可以看出,摄食系数与饲料中曼陀罗脂肪油的含量也呈负相关,而摄食系数与试鼠的体重增加呈正相关,表明饲料中曼陀罗脂肪油对试鼠的取食量有一定影响,从而影响试鼠的体重变化。该试验还说明,曼陀罗种子脂肪油对试鼠无急性毒性,且在一定含量时可增加试鼠的体重。曼陀罗种子脂肪油对试鼠是否具有慢性毒性或对其它动物是否具有毒性还需进一步研究。3曼陀罗种子脂肪油对小鼠的毒力曼陀罗在我国各省区都广泛分布,且储量较大。该研究表明,曼陀罗种子中含有23.2%的脂肪油,GC-MS测定结果表明其主要化学成分有1,20-二十碳二酸(34.55%)、Crinan-3-ol,1,2-didehydro-,(3à)-(13.41%)、8,11-十八碳二烯酸(4.56%)、8,11,14-二十碳三烯酸(Z,Z,Z)(4.39%)、2,3,3-三甲基辛烷(4.35%)、7,1