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文档简介

免疫荧光技术临床的应用检验科李杰

随着人们生活水平和意识的不断提高,各种因素的影响,近年来每31个人中就有一个人在受到自身免疫性疾病的折磨,临床表现复杂,不易早期发现。

自身免疫性疾病涉及多学科(风湿免疫科、内分泌科、血液科、妇产科、皮肤科、肾病科、消化科等等)自身免疫性疾病涉及多病种(混合结缔组织病、系统性红斑狼疮、磷脂综合症、原发性系统性血管炎、韦格纳肉芽肿、坏死性新月体肾小球肾炎、显微多动脉炎、习惯性流产、干燥综合征、皮肌炎、多肌炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性胆管炎等等)自身免疫性疾病的共同特征:患者血清中有多种自身抗体或自身反应性致敏淋巴细胞存在,患者组织器官的病理特征为免疫炎症,用相同抗原在某些动物实验中可复制出相似的疾病模型,多数病因不明,疾病有重叠现象,即一个病人可同时患一种以上自身免疫病,病程一般较长,多迁延为慢性,有遗传倾向。鉴于自身免疫性疾病的共同特征,通过检测自身抗体可以有效准确的诊断自身免疫性疾病,为临床提供高效准确的诊断依据。

自身抗体检测的开展,不仅让我院在自身免疫性疾病诊断治疗上有很大的提高,还可为陇东南地区400万人口提供更准确、更专业的自身免疫性疾病诊断服务。节省患者去外院检测诊断所花费的时间和费用,使我院在整个地区具有一定的影响力,也会为医院带来可观的经济效益。鉴于此,我院完全有必要应用间接免疫荧光技术开展自身抗体项目的检测。2酶联免疫吸附法(ELISA)

1间接免疫荧光法(IFAIndirectFluorescentAssay

)3免疫印迹法(IB)WesternblotLIA4其它:IDA、RIA等间接免疫荧光法实验原理细胞、组织切片或纯化的、生化性质明确的物质均可作为检测自身抗体或病原体抗体的抗原基质。如标本为阳性,已稀释血清中的特异性抗体将与包被在固相上的抗原结合。第二步,已结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体结合,然后在荧光显微镜下观察结果。阳性标本经系列稀释后可测出其滴度。最适稀释因子为3.162(10的平方根),这样,每隔一步就出现一个10的整数倍数(1:10、1:32、1:100、1:320、1:1000、1:3200,1:10000等间接免疫荧光法检测的特点特异性高:阳性与阴性标本的荧光强度差别明显。每种已结合的抗体在相应抗原的位置产生典型的荧光模型。基质中抗原谱完整,可检测多种抗体,并且检出率高。可在一种生物基质上同时检测多种抗不同生化特性抗原的抗体。当酶免试剂所需要的抗原难以制备或无法获得时,可选择间接免疫荧光法。自身抗体检测的标准和最经典的实验方法是间接免疫荧光检测法(IFA)。需要荧光显微镜。操作者需要一定的专业知识。操作者需要一定的工作经验。显微镜下的结果判断为综合知识的体现,到目前为止,尚没有任何仪器可取代人工读片。国内现状自身抗体的测定不普遍欠规范对其意义了解尚少缺乏研究

自身抗体种类繁多常见自身抗体:抗核抗体谱(ANAS)检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测类风湿因子和抗CCP抗体自身免疫性肝病相关自身抗体检测

检验科

拟开展自身抗体检测项目介绍及相关自身免疫性疾病检验项目试剂价格收费标准抗核抗体(ANA)18.943.8ANA谱3180329.6双链DNA2219.5角蛋白抗体(AKA)29.519.5环瓜氨酸肽(CCP)抗体3978.2肝抗原谱9项176221.4蛋白酶3(PR3)、髓过氧化物酶(MPO)、肾小球肾炎78146.4抗中性粒细胞浆抗体3897.6过敏原特应性组合300438抗核抗体(ANA)定义——以细胞核内物质为抗原的抗体ANA可见于多种疾病,特别是结缔组织疾病,常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标(SLE的筛查抗体)。在非结缔组织病(感染、慢肝、肺纤维化或肿瘤)中也可出现阳性。正常人中(特别是老年人)也可出现阳性,但滴度低,并且常表现为IgM型。高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病。目前,ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。抗核抗体(ANA)系统性红斑狼疮活动期95-100%非活动期80-100%药物诱导的红斑狼疮100%混合性结缔组织病(MCTD、Sharp综合征)100%类风湿性关节炎20-40%进行性系统性硬化症20-50%多发性肌炎及皮肌炎85-95%干燥综合征30-50%慢性活动性肝炎70-80%溃疡性结肠炎30-40%其它风湿病26%正常人5-10%抗核抗体(ANA)方法——间接免疫荧光法结果判断:①滴度〉1:100为阳性②常见核型——5种不同核型的临床意义不同

ANA常见五种核型及临床意义核膜型——与抗ds-DNA有关,多见于SLE,特别是有肾炎者均质型——与AHA、抗DNA有关,引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮斑点型——与抗ENA有关,应进一步查特异性抗体核仁型——多见于硬皮病着丝点型——多见于CREST综合征

核膜型与抗ds-DNA有关,多见于SLE,特别是有肾炎者

均质型与AHA(抗组蛋白抗体)、抗DNA有关,引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮

斑点型与抗ENA有关,应进一步查特异性抗体核仁型多见于硬皮病

着丝点型多见于CREST综合征

抗核抗体谱(ANAs)项目包含nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENPB、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P蛋白、AMAM2,共15项。抗nRNP抗体:高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织(MCTD,夏普综合征)的标志,阳性率为95-100%,抗体滴度与疾病活动性相关,在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体,但几乎总伴有Sm抗体。抗Sm抗体:抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的特异性抗体,与抗dsDNA抗体一起,是系统性红斑狼疮的诊断指标,但阳性率仅为5-10%。抗Ro-52抗体:与其它抗体(如:SS-A)同时出现时则高度提示(SS-A)的相关疾病。抗Scl-70抗体:见于25-75%的进行性系统性硬化症(弥散型)患者中,因实验方法和疾病活动性而异(Scl=硬化症),在局限型硬化症患者中未检出该抗体。

抗核抗体谱(ANAs)抗SS-A抗体:与各类自身免疫性疾病相关,最常见于干燥综合征(40-80%)、也见于系统性红斑狼疮(30-40%)和原发性胆汁性肝硬化(20%)中,偶见于慢性活动性肝炎。此处,在100%的新生儿红斑狼疮中抗SS-A抗体阳性。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。抗SS-B抗体:几乎仅见于干燥综合征(40-80%)和系统性红斑狼疮(10-20%)的女性患者中,男女比例为1:29。在干燥综合征中SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。抗Jo-1抗体:见于多肌炎、阳性率为25-30%。常与合并肺间质纤维化相关。抗着丝点抗体(CENPB):与局限型进行性系统性硬化症(CREST综合征:钙质沉着、Raynaud病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张)有关,阳性率为70-90%。在原发性胆汁性肝硬化患者中也可检测到该抗体(阳性率为10-30%。还可出现于雷诺氏综合征中。抗核抗体谱(ANAs)抗dsDNA抗体:对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗Sm抗体外,抗dsDNA抗体也可做为该病的一个血清学标志,阳性率40-90%,且与疾病的活动度相关,可用于疗效监测。抗核小体抗体:系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为50-95%,特异性几乎为100%。核小体是细胞染钯体的功能亚单位,由DNA和组蛋白以特殊的且成。在系统性红斑狼疮的早期抗核小体抗体比抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体更早出现,对系统性红斑狼疮的诱因和致病有重要作用。组蛋白抗体:一种或几种组蛋白抗体或抗H2A-H2B复合物抗体在药物(普鲁卡因胺、肼酞嗪以及其它药物)诱导的药斑狼疮中比较常见(阳性率95%)。另外,在30-70%的系统性红斑狼疮和15-50%的类风湿性关节炎患者中也可检出抗组蛋白抗体。抗核糖体P蛋白抗体:是系统性红斑狼疮的特异性标志,阳性率为5-15%。普遍认为ARPA的滴度与SLE的活动性相关,还与SLE的中枢神经系统症状、肾脏或肝脏受累相关。抗ds-DNA抗体临床意义①对SLE的诊断有较高特异性②滴度与SLE活动相关,可作为病情监测及疗效观察指标③与SLE肾损害有关检测方法①放免法(Farr)——敏感,有利于早期预测检测高亲合力的抗ds-DNA②间接免疫荧光法(IF)——特异③ELISA——可检测低亲合力的抗ds-DNA

有助于中枢狼疮的病情监测④金标免疫斑点法抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP)瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关抗体的主要抗原决定簇对RA诊断具有高度特异性(98%)可在RA早期出现预测早期关节炎发展为RARA关节侵蚀破坏的早期识别及预测我科开展的自身免疫肝炎系列抗体包括:抗肝细胞膜抗体(抗LMA)抗肝肾微粒体抗体(抗LKM抗体)抗肝-胰抗体(抗LP抗体)抗可溶性肝细胞抗体(抗SLA)抗线粒体抗体(AMA)肝抗原谱9项SLA/LP:抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体;是AIH的最特异诊断指标,阳性率10-30%,特异性100%。RO-52:不具有疾病特异性AIH其他诊断指标:1)ANA30-40%;2)ASMA抗平滑肌抗体(F-肌动蛋白)40-90%3)肝细胞膜抗原抗体35%4)去唾液酸糖蛋白受体80-90%PBC其他诊断指标:1)AMA-M455%2)AMA-M855%3)AMA—M935-85%4)核点30%PSC(原发性硬化性胆管炎):在PSC中最常见的自身抗体为PANCA(阳性率为70-80%)重叠综合征(主要发生于自免性肝病之间)(一)类风湿关节炎(RA)

类风湿因子(RF)早期诊断的系列指标抗RA33/36抗体 抗核周因子(APF)抗角蛋白抗体(AKA)抗Sa抗体抗环瓜氨酸抗体(抗CCP)

(二)系统性红斑狼疮(SLE)是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病,其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体自身抗体(1)抗核抗体谱——ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗体(2)抗磷脂抗体(3)抗组织细胞抗体——抗RBC抗体抗血小板相关抗体抗神经元抗体(4)其它——RF、p-ANCA(三)皮肌炎/多发性肌炎(PM/DM)免疫学检查ANAENA——抗Jo-1阳性其它检查——肌酶谱肌酸磷酸激酶(CPK):MM-心肌和骨骼肌

MB-心肌

BB-平滑肌和脑内乳酸脱氢酶(LDH)谷草转氨酶(AST)谷丙转氨酶(ALT)碱性磷酸酶(ALP)(四)干燥综合征(SS)ANA——阳性率40%~70%ENA——抗SSA抗体阳性率70%~96%

抗SSB抗体阳性率50%~87%抗α-Fordrin——对于pSS或sSS的诊断有一定意义,但特异性和敏感性并不理想。RF——阳性率75%~100%高球蛋白血症WBC下降(五)系统性硬化病(pSS)ANA——阳性率50%~55%ENA——抗Scl-70阳性率15%~40%抗着丝点抗体(ACA)阳性(六)混合性结缔组织病(MCTD)ANA阳性ENA——抗RNP高滴度阳性(七)血管炎

抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)荧光图谱分型主要抗原成分胞浆型cANCA核周型pANCA蛋白酶3(PR3)髓过氧化物酶(MPO)非典型型(cANCA)不清ANCA的临床意义c-ANCA和PR3-ANCA

对韦格纳肉芽肿有高度特异性(95%),敏感性80%

与病情活动性相关常作为判断药物疗效和病情复发的指标p-ANCA和MPO-ANCA

不如c-ANCA具有诊断特异性阳性者血管炎程度较高,其滴度也与病情活动相关主要与显微镜下多血管炎

坏死性新月体肾小球肾炎

变应性肉芽肿性血管炎相关自身免疫性肝病是一种不明原因的、肝脏的慢性炎性病变。自身免疫性肝炎(AIH)

ANA

抗平滑肌抗体(SMA)抗肝肾微粒体抗体原发性胆汁性肝硬化(PBC)

抗线粒体抗体(AMA)——M2原发性硬化性胆管炎

ANCA阳性(八)自身免疫性肝病

谢谢!第一节活塞式空压机的工作原理第二节活塞式空压机的结构和自动控制第三节活塞式空压机的管理复习思考题单击此处输入你的副标题,文字是您思想的提炼,为了最终演示发布的良好效果,请尽量言简意赅的阐述观点。第六章活塞式空气压缩机

piston-aircompressor压缩空气在船舶上的应用:

1.主机的启动、换向;

2.辅机的启动;

3.为气动装置提供气源;

4.为气动工具提供气源;

5.吹洗零部件和滤器。

排气量:单位时间内所排送的相当第一级吸气状态的空气体积。单位:m3/s、m3/min、m3/h第六章活塞式空气压缩机

piston-aircompressor空压机分类:按排气压力分:低压0.2~1.0MPa;中压1~10MPa;高压10~100MPa。按排气量分:微型<1m3/min;小型1~10m3/min;中型10~100m3/min;大型>100m3/min。第六章活塞式空气压缩机

piston-aircompressor第一节活塞式空压机的工作原理容积式压缩机按结构分为两大类:往复式与旋转式两级活塞式压缩机单级活塞压缩机活塞式压缩机膜片式压缩机旋转叶片式压缩机最长的使用寿命-

----低转速(1460RPM),动件少(轴承与滑片),润滑油在机件间形成保护膜,防止磨损及泄漏,使空压机能够安静有效运作;平时有按规定做例行保养的JAGUAR滑片式空压机,至今使用十万小时以上,依然完好如初,按十万小时相当于每日以十小时运作计算,可长达33年之久。因此,将滑片式空压机比喻为一部终身机器实不为过。滑(叶)片式空压机可以365天连续运转并保证60000小时以上安全运转的空气压缩机1.进气2.开始压缩3.压缩中4.排气1.转子及机壳间成为压缩空间,当转子开始转动时,空气由机体进气端进入。2.转子转动使被吸入的空气转至机壳与转子间气密范围,同时停止进气。3.转子不断转动,气密范围变小,空气被压缩。4.被压缩的空气压力升高达到额定的压力后由排气端排出进入油气分离器内。4.被压缩的空气压力升高达到额定的压力后由排气端排出进入油气分离器内。1.进气2.开始压缩3.压缩中4.排气1.凸凹转子及机壳间成为压缩空间,当转子开始转动时,空气由机体进气端进入。2.转子转动使被吸入的空气转至机壳与转子间气密范围,同时停止进气。3.转子不断转动,气密范围变小,空气被压缩。螺杆式气体压缩机是世界上最先进、紧凑型、坚实、运行平稳,噪音低,是值得信赖的气体压缩机。螺杆式压缩机气路系统:

A

进气过滤器

B

空气进气阀

C

压缩机主机

D

单向阀

E

空气/油分离器

F

最小压力阀

G

后冷却器

H

带自动疏水器的水分离器油路系统:

J

油箱

K

恒温旁通阀

L

油冷却器

M

油过滤器

N

回油阀

O

断油阀冷冻系统:

P

冷冻压缩机

Q

冷凝器

R

热交换器

S

旁通系统

T

空气出口过滤器螺杆式压缩机涡旋式压缩机

涡旋式压缩机是20世纪90年代末期开发并问世的高科技压缩机,由于结构简单、零件少、效率高、可靠性好,尤其是其低噪声、长寿命等诸方面大大优于其它型式的压缩机,已经得到压缩机行业的关注和公认。被誉为“环保型压缩机”。由于涡旋式压缩机的独特设计,使其成为当今世界最节能压缩机。涡旋式压缩机主要运动件涡卷付,只有磨合没有磨损,因而寿命更长,被誉为免维修压缩机。

由于涡旋式压缩机运行平稳、振动小、工作环境安静,又被誉为“超静压缩机”。

涡旋式压缩机零部件少,只有四个运动部件,压缩机工作腔由相运动涡卷付形成多个相互封闭的镰形工作腔,当动涡卷作平动运动时,使镰形工作腔由大变小而达到压缩和排出压缩空气的目的。活塞式空气压缩机的外形第一节活塞式空压机的工作原理一、理论工作循环(单级压缩)工作循环:4—1—2—34—1吸气过程

1—2压缩过程

2—3排气过程第一节活塞式空压机的工作原理一、理论工作循环(单级压缩)

压缩分类:绝热压缩:1—2耗功最大等温压缩:1—2''耗功最小多变压缩:1—2'耗功居中功=P×V(PV图上的面积)加强对气缸的冷却,省功、对气缸润滑有益。二、实际工作循环(单级压缩)1.不存在假设条件2.与理论循环不同的原因:1)余隙容积Vc的影响Vc不利的影响—残存的气体在活塞回行时,发生膨胀,使实际吸气行程(容积)减小。Vc有利的好处—

(1)形成气垫,利于活塞回行;(2)避免“液击”(空气结露);(3)避免活塞、连杆热膨胀,松动发生相撞。第一节活塞式空压机的工作原理表征Vc的参数—相对容积C、容积系数λv合适的C:低压0.07-0.12

中压0.09-0.14

高压0.11-0.16

λv=0.65—0.901)余隙容积Vc的影响C越大或压力比越高,则λv越小。保证Vc正常的措施:余隙高度见表6-1压铅法—保证要求的气缸垫厚度2.与理论循环不同的原因:二、实际工作循环(单级压缩)第一节活塞式空压机的工作原理2)进排气阀及流道阻力的影响吸气过程压力损失使排气量减少程度,用压力系数λp表示:保证措施:合适的气阀升程及弹簧弹力、管路圆滑畅通、滤器干净。λp

(0.90-0.98)2.与理论循环不同的原因:二、实际工作循环(单级压缩)第一节活塞式空压机的工作原理3)吸气预热的影响由于压缩过程中机件吸热,所以在吸气过程中,机件放热使吸入的气体温度升高,使吸气的比容减小,造成吸气量下降。预热损失用温度系数λt来衡量(0.90-0.95)。保证措施:加强对气缸、气缸盖的冷却,防止水垢和油污的形成。2.与理论循环不同的原因:二、实际工作循环(单级压缩)第一节活塞式空压机的工作原理4)漏泄的影响内漏:排气阀(回漏);外漏:吸气阀、活塞环、气缸垫。漏泄损失用气密系数λl来衡量(0.90-0.98)。保证措施:气阀的严密闭合,气缸与活塞、气缸与缸盖等部件的严密配合。5)气体流动惯性的影响当吸气管中的气流惯性方向与活塞吸气行程相反时,造成气缸压力较低,气体比容增大,吸气量下降。保证措施:合理的设计进气管长度,不得随意增减进气管的长度,保证滤器的清洁。2.与理论循环不同的原因:二、实际工作循环(单级压缩)第一节活塞式空压机的工作原理上述五条原因使实际与理论循环不同。4)漏泄的影响5)气体流动惯性的影响1)余隙容积Vc的影响2)进排气阀及流道阻力的影响3)吸气预热的影响2.与理论

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