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血清γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定

（见P157）背景：关键问题：血清蛋白根据电泳法可分为5类：清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白。1.采用何种方法分离？2.此种方法分离会引入何种杂质？如何纯化？——盐析——凝胶层析3.如何鉴定纯度和含量？——电泳和双缩脲法定量一、原理及操作利用高浓度的中性盐，如(NH4)2SO4、Na2SO4、Na2SO3和NaCl等破坏水化膜，中和表面电荷。

盐析法一般蛋白质不变性，常用于蛋白质的分离纯化。1.盐析50%饱和(NH4)2SO4清蛋白溶解球蛋白沉淀33%饱和(NH4)2SO4其余球蛋白溶解γ-球蛋白沉淀饱和(NH4)2SO41ml边加边摇！弃上清加PBS溶解沉淀至1ml静置5min3500r/min5min1）饱和(NH4)2SO40.5ml边加边摇！弃上清加PBS0.5ml溶解沉淀静置5min3500r/min5min2）取1ml血清作1ml标记线2.脱盐1）装柱排气、调整凝胶浓度、装柱2）加样上步样品加样、进样、洗样3）洗脱收集PBS洗脱；收集（1ml/管)；4）检测收集约10管4）检测NH4+检测（纳氏试剂）蛋白质检测（双缩脲试剂）1234567891011121234567891011121滴洗脱液+1滴检测试剂1滴洗脱液+1滴检测试剂5）收集脱盐的蛋白质液进行鉴定3.鉴定1）纯度鉴定2）含量鉴定醋酸纤维薄膜电泳双缩脲法定量

电泳技术是利用带电粒子在电场中向与其所带电荷相反的电极移动的现象，对混合物组分进行分离、纯化、鉴定和定量的技术。电泳技术（见P34）V=

EQ6πrη电泳缓冲液：pH=8.6血清蛋白清蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白pI4.645.065.065.126.85~7.5分子量（×104）6~95~20309~1530含量（%）60~702~3.54~79~1112~18表10-1血清蛋白含量参考（P89)血清蛋白泳动方向？各种血清蛋白泳动顺序？1）

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