第一章 实验室设备和技术

第一章实验室设备和技术第1页，课件共30页，创作于2023年2月准备室培养室细胞学实验室生化分析室无菌室一、实验室设置基本实验室辅助实验室实验准备,培养基的配制,洗涤与灭菌等离体材料的无菌操作,又称接种室控制条件下的离体培养第2页，课件共30页，创作于2023年2月常规设备：天平、冰箱、酸度计、离心机、纯水器二、实验室所需的设备、用具第3页，课件共30页，创作于2023年2月灭菌设备：高压灭菌锅、干热消毒柜过滤灭菌装置二、实验室所需的设备、用具第4页，课件共30页，创作于2023年2月培养容器：培养瓶、培养皿等二、实验室所需的设备、用具第5页，课件共30页，创作于2023年2月无菌操作设备：超净工作台二、实验室所需的设备、用具第6页，课件共30页，创作于2023年2月接种器具：镊子、剪刀、解剖刀等二、实验室所需的设备、用具第7页，课件共30页，创作于2023年2月３０cm60cm14０cm定时器培养设备：培养箱、培养架等第8页，课件共30页，创作于2023年2月三、常用技术无菌接种技术灭菌技术洗涤技术第9页，课件共30页，创作于2023年2月（一）洗涤技术第10页，课件共30页，创作于2023年2月新购玻璃器皿的洗涤：

1%HCl浸泡过夜洗衣粉刷洗自来水冲洗蒸馏水漂洗使用过的玻璃器皿的洗涤：去除酸洗步骤，其它同上有污染物的玻璃培养器皿：高压灭菌洗衣粉刷洗自来水冲洗蒸馏水漂洗金属器具：用酒精擦洗，并保持干燥。第11页，课件共30页，创作于2023年2月（二）灭菌技术第12页，课件共30页，创作于2023年2月1)接种室的灭菌接种室灭菌紫外灯照射(无菌室、超净台)：波长260nm，距离小于1.2m，15-30min。每周一次.熏蒸灭菌(无菌室):100ml/20m2甲醛+5g/20m2

高锰酸钾；新的实验室或长期不用的实验室.湿度较大的季节要定期进行.喷雾消毒(超净台;无菌室)：75%酒精或3%来苏儿第13页，课件共30页，创作于2023年2月2)接种工具、容器的灭菌干热灭菌：160-180℃,1.5-2.0h湿热灭菌：121℃,20-30min在无菌操作时，把镊子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精灯火焰上灼烧灭菌。冷却后，立即使用。操作中可采用250或500ml的广口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。第14页，课件共30页，创作于2023年2月3)培养基的灭菌◆高压湿热灭菌：121℃,18-20min液体体积(mL)所需的时间(min)（121℃）20-501560-15020150-50025500-100030第15页，课件共30页，创作于2023年2月4)不耐热类物质的灭菌过滤灭菌（Filtersterilization）：某些激素（如天然生长素IAA、玉米素ZT、赤霉素GA等）、维生素、抗生素等不耐热或射线照射的物质。第16页，课件共30页，创作于2023年2月

Filtersterilization---过滤灭菌滤膜Ø0.45μm以下1.过滤器先灭菌，灭菌温度121℃，20min。2.细菌滤膜的网孔直径一般小于0.45μm和0.22μm第17页，课件共30页，创作于2023年2月Filtersterilization第18页，课件共30页，创作于2023年2月灭菌的原则：消毒剂与外植体应接触足够长的时间以除去外植体表面的微生物，但应尽量减少对外植体细胞的破坏。4)外植体的灭菌第19页，课件共30页，创作于2023年2月常用外植体灭菌步骤冲洗植物材料除去泥土等大的颗粒；切成适宜的大小;

浸入70-75％乙醇，0.5-1min；用2-5％NaClO溶液（加1滴表面活性剂）表面消毒5-30min；或HgCl2(0.1–0.2%)2-10min

用无菌水冲洗至少3遍,每次1-2min;

灭菌的材料可用无菌纸吸干。第20页，课件共30页，创作于2023年2月（三）无菌接种技术第21页，课件共30页，创作于2023年2月1.外植体的选择常用外植物体的来源自然环境下生长的植物无菌环境下生长的植物温室环境下生长的植物第22页，课件共30页，创作于2023年2月1.外植体的选择来源：健壮、无病虫害、发育正常大小：视培养目的而定部位（生理状态及发育年龄）取材季节：生长开始的季节。（苹果）第23页，课件共30页，创作于2023年2月组织清洗

70%酒精浸10～30s

灭菌剂处理无菌水涮洗Note:此步骤应在超净台上完成2、外植体无菌处理第24页，课件共30页，创作于2023年2月3、无菌接种第25页，课件共30页，创作于2023年2月接种前的准备第26页，课件共30页，创作于2023年2月酒精擦拭旋转灼烧取外植体接种盖好瓶塞修剪外植体接种第27页，课件共30页，创作于2023年2月第28页，课件共30页，创作于2023年2月培养物污染可能的原因

培养容器培养基本身外植体接种室的环