氰戊菊酯、辛硫磷、硫醚沙星和甲霜灵对克氏原螯虾的急性毒性及组织病理评价

氰戊菊酯、辛硫磷、硫醚沙星和甲霜灵对克氏原螯虾的急性毒性及组织病理评价

0克氏原螯虾养殖的发展【研究意义】元宝虾口感清新细腻，营养丰富，价格相对较低，深受消费者欢迎。因此，市场需求的增加和原元宝虾养殖的快速发展。1材料和方法1.1试验用虾及药品克氏原螯虾（P.clarkii）取自江苏省淡水水产研究所扬中基地，平均体长79.46±1.56mm，平均体重23.63±1.53g。先在200L的聚乙烯水箱中暂养一周，每天定时定量投喂饲料，每24h换水1/2水箱。试验在上部外径1090×800mm、下部外径960×690mm、高280mm的聚乙烯塑料箱中进行。试验用水为充分曝气72h以上的自来水，水温（18.31±0.44）℃，pH7.87±0.04，溶解氧（OD）为7.09±1.07mg/L。正式试验前24h停止投喂，且整个试验期间不投喂饲料，全程自然光照。选取附肢齐全、体质健壮和规格统一的个体作为试验用虾。主要试验药品与试剂：氰戊菊酯（Fenvalerate）（浙江威尔达化工有限公司生产），有效成分含量20%，产品标准号GB/T6695—1998；辛硫磷（Phoxim）（山东埃森化学有限公司生产），有效成分含量40%，产品标准号GB9557—2008；硫醚沙星（Sulfidegatifloxacin）（北京渔经生物技术有限责任公司生产），有效成分含量80%，执行标准号为Q/TXYJS091；甲霜灵（Ridomil）（浙江禾本科技股份有限公司生产），有效成分含量≥98%。氰戊菊酯和辛硫磷先配成母液，再稀释成不同浓度，现用现配。1.2测试方法1.2.1急性毒性试验参考GB/T31270.21—2014《化学农药环境安全评价试验准则第21部分：大型甲壳类生物毒性试验》中关于大型甲壳类生物的静态试验法，并根据4种药物对其他物种的LC1.2.2组织病理学观察根据急性毒性试验得到的结果，分别选择4种药物对应的48h-LC1.3数理统计分析利用Excel2010和SPSS21.0对试验结果进行数理统计分析。采用直线内插法计算4种供试药物对克氏原螯虾的回归方程（药物浓度为横坐标，死亡率为纵坐标）、回归方程相关系数（R）以及24、48和96h的半致死浓度（LC2结果与分析2.1克氏原螯虾的急性毒性反应试验期间，空白对照组均未发现中毒或死亡个体。所有虾的活力好、行为正常、反应灵敏，能正常蜕壳，且出现交配行为。使用玻璃棒接近时两螯迅速张开防御，或立即跳开躲避。4种药物浸泡下表现的中毒症状比较类似，且不同浓度组的中毒症状表现出明显的剂量和时间效应。中毒初期均表现为行动迟缓、反应迟钝、机体无力，蜕壳虾数量明显减少，用玻璃棒接近时未见及时逃开躲避。随着中毒时间的延长和药物浓度的加大，克氏原螯虾出现仰卧和侧卧现象，其附肢能节律性摆动但身体不能移动，此阶段没有虾发生蜕壳现象。最终的死亡个体多表现为弓背或身体僵直，以侧卧和仰卧死亡为主。4种药物对应的48h-LC2.24毒性等级评价4种药物对克氏原螯虾的急性毒性试验结果见表1。随着4种药物染毒时间的推移，测算得到24、48和96h的LC依据GB/T31270.21—2014《化学农药环境安全评价试验准则》对药物的毒性等级进行划分。由于氰戊菊酯和辛硫磷的96h-LC2.34在这种化学药物的暴露条件下，原头虾的组织病理学观察根据病理切片得到的图片仅挑选部分典型且需要说明的部分，未阐述的部分不具有代表性，因此不进行说明。2.3.1管腔挤压导致的肝小管严重变形和细胞凋亡健康的克氏原螯虾肝胰腺结构由无数肝小管组成，结构正常，分布均匀。肝小管基膜完整，上皮细胞排列紧密，管腔呈星型（图1-1）。氰戊菊酯染毒48h后的肝小管出现严重损伤。在切片边缘位置（即肝胰腺表面），发现肝小管管腔呈现明显皱缩现象；包括B细胞在内的细胞出现破裂和空泡化现象，在切片中心位置（肝胰腺内部）未发现该现象（图1-2）。与染毒48h相比，氰戊菊酯染毒96h除上述症状外还发现由于管腔挤压导致的肝小管严重变形和细胞坏死的现象（图1-3）。由图1-4～图1-8可知，辛硫磷组、硫醚沙星组和甲霜灵组均在切片边缘位置（肝胰腺表面），发现B细胞及其内部转运泡体积明显增大且增多，且数量最多的组别是硫醚沙星组，其次为辛硫磷组，最少为甲霜灵组，而在切片中心位置（肝胰腺内部）未发现该现象。氰戊菊酯染毒48h后的肝小管出现严重损伤。在切片边缘位置（即肝胰腺表面），发现肝小管管腔呈现明显皱缩现象；包括B细胞在内的细胞出现破裂和空泡化现象，在切片中心位置（肝胰腺内部）未发现该现象（图1-2）。与染毒48h相比，氰戊菊酯染毒96h除上述症状外还发现由于管腔挤压导致的肝小管严重变形和细胞坏死的现象（图1-3）。与对照组相比，辛硫磷组染毒48h后肝小管的部分R细胞颜色加深，同时出现呈深褐色的液泡。试验虾在甲霜灵中浸泡48h后，肝小管管腔呈现大量褶皱，且管腔的单层柱状细胞呈现增生趋势，肝小管内出现大量褐色颗粒和部分棕色的R细胞（图1-7）。2.3.2空腔现象明显由图2-1可知，健康克氏原螯虾肌纤维排列紧密有序，细胞核呈椭圆形，散布在肌纤维之间。氰戊菊酯组染毒48h后，克氏原螯虾肌肉出现严重损伤，主要表现为肌肉呈明显的波浪化纹理且部分肌纤维断裂溶解，最终导致出现明显的空腔（图2-2）。辛硫磷染毒96h后，损伤的肌肉主要表现为细胞排列松散且不规则，肌纤维出现断裂溶解，最终导致明显的空腔（图2-3）。硫醚沙星染毒96h后，克氏原螯虾肌肉呈现较轻微损伤，主要表现为细胞排列松散不紧密，肌纤维之间出现不同程度的间隙（图2-4）。甲霜灵染毒48h后，染毒虾的肌肉损伤较轻微，肌纤维之间出现不同程度的间隙（图2-5）；甲霜灵染毒96h组的肌肉损伤比甲霜灵染毒48h组更严重，主要表现为部分肌纤维失去固有形态，出现波浪化纹理（图2-6）。3模型生物的选择克氏原螯虾分布较广，且饲养管理简便，有望作为环境毒