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文档简介

脯氨酸含量的测定

植物组织游离脯氨酸含量的测定一试验原理植物在逆境条件下,游离脯氨酸便会大量积累,且积累指数与植物的抗逆性有关。

因此,脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。

采纳磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸,不仅大大削减了其他氨基酸的干扰,快速简便,而且不受样品状态干或鲜样限制。

在酸性条件下,脯氨酸与茚三***反应生成稳定的红色缩合物,用甲苯萃取后,此缩合物在波长520处有一最大汲取峰。

脯氨酸浓度的凹凸在肯定范围内与其消光度成正比。

二试验材料、仪器设备及试剂1材料植物叶片2仪器设备分光光度计,恒温水浴锅,漏斗,具塞刻度试管20,移液枪1和5,5和1刻度试管,烧杯,吸水纸,玻璃棒,试管架,比色皿等。

3试剂13%磺基水杨酸溶液:万分之一电子天平称取3磺基水杨酸,然后将称好药品溶于100蒸馏水中。

2甲苯3%酸性茚三***显色液:冰乙酸和6-磷酸以3:2混合,作为溶剂进行配制,此液在4℃下2~3天有效此步骤重要。

***放入烧杯中用混合液50放入70℃水浴锅中溶解,冷却。

.专业可编辑4脯氨酸标准溶液:精确     称取25脯氨酸,用蒸馏水溶解后定容至250,其浓度为100。

再取此液10,用蒸馏水稀释至100,即成10的脯氨酸标准液。

1取7支具塞刻度试管按表2加入各试剂。

混匀后加玻璃球塞,在沸水中加热40。

.***显色液3333333脯氨酸含量μ02481216202取出冷却后向各管加入5甲苯充分振荡,以萃取红色物质。

静置待分层后吸取甲苯层以0号管作为对比在波长520下比色。

3以消光值为纵坐标,脯氨酸含量为横坐标,绘制标准曲线,求线性回归方程。

.专业可编辑2样品测定1脯氨酸提取:从-80℃冰箱中取出样品,放入事先装好液氮的保温桶中。

,分别置于大试管中,加入5%磺基水杨酸溶液3,管口加盖玻璃球,于沸水浴中浸提10。

2取出试管,待冷却至室温后,吸取上清液2,加2冰乙酸和3显色液,于沸水浴中加热40,下步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色向各管加入5甲苯充分振荡,以萃取红色物质。

静置待分层后吸取甲苯层以0号管作为对比在波长520下比色。

3结果计算:从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度脯氨酸含量的百分数。

脯氨酸[-1干或鲜重]=-1式中:一提取液中脯氨酸浓度,由标准曲线求得:-提取液总体积测定时所吸取得体积样品重.专业可编辑数据统计表提取液中脯氨测定时所吸取标准曲提取液总体积样品重脯氨酸含量海拔处理编号吸光度稀释倍数酸含量的体积平均值线斜率\5125**5235246116126133600614--1

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