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文档简介

二基因表达载体的构建思考与讨论：1基因载体必须具备的基本条件是什么？2基因工程可做载体的结构有那些？最常使用的载体是什么？3请图示大肠杆菌质粒结构。4从苏云金芽孢杆菌细胞DNA分子中提取得到Bt毒蛋白基因能否直接进入普通棉细胞中？如果把目的基因人工注射到普通棉细胞中，那么该基因在棉细胞中会稳定存在，复制和表达吗？5假如你是一个基因工程操作者，若使目的基因进入棉细胞，并能在棉细胞中遗传和表达，你应当采取什么办法？你能说出其中的理由吗？（一）基因表达载体的构建2请你定义：基因表达载体构建之含义？1基因工程操作中，构建基因表达载体之目的是什么？

将目的基因、启动子和终止子科学按装在经修饰和改造完备的载体之上。确保目的基因在受体细胞中稳定存在、复制、遗传和表达，使其发挥作用。3基因表达载体之基本组成是什么？（1）结构基因——即提取的目的基因核苷酸序列，负责编码目标蛋白质。（2）启动子——位于编码蛋白质结构基因之首一段殊结构的DNA片段，RNA聚合酶的识别部位和结合部位。（3）终止子——位于编码蛋白质结构基因末端一段特殊结构的DNA片段，具有终止基因转录过程的作用。（4）复制原点——能够自我复制保证目的基因在受体细胞中复制遗传和表达。（5）遗传标记基因——检测受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。请你以质粒作载体构建基因表达载体之模式图基因表达载体基因表达载体启动子复制原点终止子插入目的基因遗传标记基因4建构基因表达载体方法（2）用同种限制酶切割目标DNA分子，截取目的基因，使其产生与质粒相同的末端。（1）用某种限制酶如EcoRI限制酶，在基因插入位点切割质粒，使质粒出现一个切口，露出两个黏性末端。（3）依据目的基因表达的特点和位置，用限制酶切割受体细胞相应的控制元件——启动子和终止子。（4）用限制酶将启动子和终止子与目的基因连接起来，成为一个整体。（5）将目的基因插入质粒切口处，用E•coliDNA连接酶把基因与质粒缝合起来

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