创伤感染细菌的分离鉴定课件

实验三 创伤感染细菌、性传播细菌的分离鉴定、病案讨论一、讨论：1、临床样本中致病性球菌的分离鉴定方案2、创伤感染细菌、性传播细菌致病物质及所致疾病二、示教：1、创伤感染细菌的分离鉴定、性传播细菌形态与染色

2、创伤感染细菌培养物观察(菌落的颜色、溶血性等）3、葡萄球菌血浆凝固酶试验（试管法）三、操作：1、葡萄球菌血浆凝固酶试验（玻片法）2、ASO 试验3、RPR一、讨论：1、临床样本中致病性球菌的分离鉴定方案机械学院王斌同学皮肤表面有一化脓感染病灶，经久不愈。请设计一个方案：从脓汁标本中分离、鉴定化脓性病原菌，并提出防治原则以实验小组为单位先查文献写设计性方案上课每组派代表介绍自己小组的方案，其他组同学质疑课堂讨论完善，写到实验报告上生化模式转变为数学模式自动微生物鉴定和药敏分析系统16SrRNA序列分析生物芯片技术特点金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌色素金黄色白色溶血素＋－/＋血浆凝固酶＋—发酵甘露醇＋—SPA＋—致病性强条件致病致病葡萄球菌鉴别链球菌鉴别

菌落小、半透明 、表面光滑、边缘整齐

G+

、链状完全溶血不溶血乙型链球菌丙型链球菌草绿色不完全溶血环菊糖发酵试验胆汁溶菌试验-（紫色）-（混浊）+（黄色）+（澄清）甲型链球菌肺炎链球菌一、讨论：2、创伤感染细菌、性传播细菌致病性致病物质致病作用与所致疾病1．毒素1）葡萄球菌溶素

staphylolysin毒素性疾病，损伤细胞膜2）杀白细胞素

leukocidin损伤粒细胞、吞噬细胞细胞膜3）肠毒素enterotoxin食物中毒，假膜性肠炎4）

表皮剥脱毒素

exfoliatin烫伤样皮肤综合征5）毒性休克综合征毒素—1

TSST-1毒性休克综合征，发热、多器官系统的功能紊乱2．酶1）

凝固酶

Coagulase侵袭性疾病，抗吞噬局限化及形成血栓2）其他酶透明质酸酶（扩散因子）降解结缔组织的透明质酸葡激酶（纤维蛋白溶酶）水解纤维素脂酶分解脂肪耐热核酸酶DNA酶水解DNA，测定葡萄球菌有无致病性的重要指标触酶分解H2O2（二）链球菌致病物质致病作用与所致疾病致热外毒素Pyrogenic

exotoxin,

SPE链球菌溶素Streptolysin透明质酸酶Hyaluronidase链激酶Streptokinase链道酶StreptodornaseM蛋白Protein

MF蛋白Protein

F猩红热（scarlet

fever）SLO 辅助诊断指标

侵袭性疾病SLS

β溶血环扩散因子，分解细胞间质透明质酸有利于化脓感染病灶扩散水解纤维蛋白酶解核酸，脓稀薄汁有利于感染扩散抗吞噬，抗吞噬细胞内杀菌作用，超敏反应，风湿热、感染后肾小球肾炎黏附素，利于宿主内定植和繁殖脂磷壁酸LPA二、示教：1、创伤感染细菌、性传播细菌形态与染色观察2、创伤感染细菌、性传播细菌培养物观察(菌落的颜色、溶血性等）3、葡萄球菌血浆凝固酶试验（试管法）staphylococcusStreptococcusG+，粗大杆菌，芽孢椭圆，位于菌体次极端，无鞭毛在体内时有明显荚膜有A-E 5个血清型产气荚膜杆菌的形态、染色钩端螺旋体、梅毒螺旋体镀银染色钩端螺旋体（暗视野显微镜）镀银染色法（梅毒螺旋体）梅毒螺旋体（暗视野显微镜）镀银染色法（钩端螺旋体）金黄色葡萄球菌血平板上迁徙生长，β溶血专性厌氧，生化反应不活泼，繁殖体对青霉素敏感破伤风杆菌的培养血平板上形成双层溶血环在蛋黄琼脂平板上，菌落出现乳白色浑浊圈（Nagler反应）能发酵多种糖类，产酸产气，牛乳糖培养基中汹涌发酵产气荚膜杆菌的培养Neisseria

gonorrhoeae0.8μm,

Gram

negative,

diplococci

(pairs

of

cocci)most

in

neutrophil

cells试管法检测：

游离血浆凝固酶玻片法检测：

结合血浆凝固酶三、操作：1、葡萄球菌血浆凝固酶试验（玻片法）2、ASO

试验3、RPR1、葡萄球菌血浆凝固酶试验（玻片法）（1）原理：病原性葡萄球菌产生血浆凝固酶，可使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的兔或人血浆发生凝固，故凝固酶可作为鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一(2)材料兔血浆，金黄色葡萄球菌及白色葡萄球菌琼脂斜面24小时培养物各一支。其它：生理盐水、载玻片、试管、吸管等。生理盐水生理盐水金黄色葡萄球菌血浆表皮葡萄球菌血浆（3）方法与结果：玻片法一分钟内观察结果，若细菌凝集成颗粒状为血浆凝固酶阳性。链球菌溶素(streptolysin)对氧稳定的链球菌溶素S（streptolysin

S）:β溶血对氧敏感的链球菌溶素O（streptolysin

O）：免疫原性强用于风湿热或肾小球肾炎的辅助诊断2、 抗O试验（ASO

test）（1）ASO试验原理中和实验：被检测血清+标准溶血素“O”25结合单位／毫升间接凝集实验：①抗链球菌溶血素“O”(AsO)胶乳试剂：羧化聚苯乙烯乳胶与纯化溶血素“O”用碳化二亚胺交联，②被检测血清中的ASO与ASO胶乳试剂反应时，根据间接乳胶凝集试验的原理，可引起乳胶颗粒的聚集。明显凝集无凝集阳性阴性ASO试验原理与方法：待检测血清以及阳性和阴性对照血清溶血素“O”免疫微球溶血素“O”免疫微球8分钟1分钟（4）结果判断：有明显疑集者为阳性，无凝集者为阴性。病人血清1：50稀释阳性反应，相当于传统的溶血

试验ASO

500单位，此时应将病人血清作l：80～1：100稀释，重复上述试验，若仍为阳性，则病人血

清的ASO相应为≥800单位～≥1000单位。操作三、 RPR实验原理、步骤RPR试验是非梅毒螺旋体抗原血清反应的一种基本原理为间接凝集实验+交叉反应。该试验是梅毒螺旋体感染人体后产生非特异抗心脂质抗体，可用结合在碳末或甲基胺红等颗粒上牛心脂质（交叉抗原）检测出待检血清待检血清RPR试剂RPR试剂临床细菌学讨论患者陈新，男性，5岁，经常有咽炎，在三周前又急性发作，当时进行咽拭子细菌分离培养，于血平板上出现多数针帽大小的菌落，灰白色，于菌落周围有透明的溶血环。涂片染色为革兰氏阳性球菌，多呈短链状排列，偶见成双，现该病孩的主要临床表现为发热，食欲减退眼睑浮肿，下肢用指头压迫，留下凹窝，尿量少，呈洗鱼水色，体检血压，收缩压

150mmHg

，舒张压mmHg。小便：中段尿细菌检查未见有菌生长，小便镜检有大量红细胞及白细胞。蛋白阳性。1、病孩