人参皂苷rg3对马立克氏病毒感染的预防作用

人参皂苷rg3对马立克氏病毒感染的预防作用

结果表明，rg3、rg1和rh1等胡萝卜类化合物具有抗癌和肿瘤作用。1材料和方法1.1病毒株和药物株实验动物为1日龄健康公鸡,未接种马立克氏病毒疫苗,平均体重30~35g。马立克氏病毒株(MDV)购自北京市农林科学院畜牧兽医研究所。人参皂苷Rg3购自吉林大成医药公司;阳性对照药物盐酸吗啉胍(ABOB)粉剂购自聊城市利民药店。1.2方法1.2.1鸡马立克氏病毒的检测1日龄雏鸡饲养观察3d后,确认无疾病的选择65只,称重,随机分成4组。(1)人参皂苷Rg3处理组,4日龄雏鸡20只,正常饲养,第6天开始添加人参皂苷Rg3,在8日龄时接种马立克氏病毒,然后正常饲养。(2)盐酸吗啉胍对照组,4日龄雏鸡20只,正常饲养,第6天开始服用盐酸吗啉胍,在8日龄时接种病毒,然后正常饲养。(3)病毒感染对照组,4日龄雏鸡20只,正常饲养,在8日龄时接种病毒,然后正常饲养。(4)正常对照组,4日龄雏鸡5只,单独饲养在一个安全的地方,正常饲养,严格消毒,防止MDV感染。1.2.2给药及给药风险(1)人参皂苷Rg3组,每千饲料添加0.4g人参皂苷Rg3,拌料混匀。6日龄开始饲喂,连续喂2d后攻毒。攻毒后继续给药7d;间隔3d后再给药7d;再间隔3d,给药7d,共3个疗程。(2)盐酸吗啉胍对照组,每千克饲料添加2gABOB,拌料混匀。6日龄开始饲喂,连续喂2d后攻毒。攻毒后继续给药7d;间隔3d,给药7d;再间隔3d,给药7d,共3个疗程。(3)病毒感染对照组和正常对照组都不用药。1.2.3dv强毒攻击人参皂苷Rg3组、盐酸吗啉胍对照组和病毒感染对照组,于8日龄时均用MDV强毒攻击,每羽注射以细胞培养液稀释的含2000PFU的MDV强毒0.2mL,通过腹腔注射。正常对照组鸡腹腔注射等量的生理盐水。各组试验鸡分别严格隔离饲养,自由采食和饮水,饲养管理条件力求一致。1.2.4临床资料的采集(1)临床症状观察:每天检查雏鸡被毛、精神状态、体态姿势、运动情况、食欲和粪便的变化;统计死亡率,对病死鸡逐一剖检,统计各脏器眼观肿瘤的阳性率。记录发病最早日龄、发病与死亡情况。(2)体重变化观察:马立克氏病鸡经常表现为下痢、消化不良和极度消瘦,因此体重变化是反映动物健康状态的重要指标。在攻毒前对所有鸡进行称重,在试验结束后对所有存活的鸡进行称重,最后对各组鸡的体重进行方差分析,看是否存在显著差异。(3)病理变化观察:对死亡的鸡剖检,观察病理变化,并记录肿瘤出现的部位。(4)试验时间:试验全程60d,在结束时,对全部存活鸡进行称重,剖杀所有存活鸡,观察并记录肉眼病变。2结果与分析2.1临床症状观察2.1.1发病及死亡情况在第18天出现临床症状,病鸡表现为羽毛逆立、精神沉郁、食欲减退、缩颈呈企鹅样站立姿势;并且在第20天就有3只鸡发生死亡。雏鸡的发病和死亡主要集中在22~25日龄时间段。发病后期,病鸡症状加重并出现神经症状。表现为运动障碍、步态不稳,逐渐发展成不完全麻痹,不能行走,伏卧在地上,一只脚伸向前方,另一只脚伸向后方。少数鸡发生腹泻,粪便稀软呈白色或绿色、褐色等色泽。2.1.2照组要晚的时间试验鸡的发病和出现死亡时间比病毒对照组要晚。第一例死亡发生在攻毒后24d,病鸡的发病和死亡也比较集中。临床症状和病毒对照组基本相近。2.1.3第一例死亡发生时间发病和死亡出现的时间明显晚于病毒对照组和盐酸吗啉胍组,第一例死亡发生在攻毒后33d,比病毒对照组晚了13d。并且人参皂苷Rg3组的发病和死亡并不像病毒对照组那样集中,只呈零星和散发状态。2.1.4正常对照组2.2人参皂苷rg3组的死亡率在试验期间(60d),只要是表现出临床症状的鸡,都统计为发病鸡。结果人工感染鸡的发病率为85%,死亡率达60%,具体见表1。从表1中可见,死亡高峰集中在21~27日龄。其中,盐酸吗啉胍组的发病率为70%,死亡率达到40%;人参皂苷Rg3组的发病率为40%,死亡率仅为20%;正常对照组鸡的生长发育正常,无死亡情况;而病毒对照组的发病率、死亡率明显高于用药组。试验结果说明,以人参皂苷Rg3组的发病率和死亡率最低。2.3病理改变2.3.1参证及病料的侵害组织病理学和克氏神经结构病毒对照组的死亡鸡解剖后可见到心、肝、脾、肾和性腺等器官有呈弥漫性或局灶性肿瘤组织增生;肝脏表面和实质中可见灰白色油脂状从粟粒大到蚕豆大的肿瘤结节,肿瘤结节与周围肝组织的界限明显;脾脏肿大,表面散在灰白色大小不等的肿瘤结节,小的如粟粒,大的如黄豆,呈扁平状或半球状;肾有绿豆、粟粒大的灰白结节;睾丸肿大5~7倍,呈现灰白色半透明状;受侵害的一侧坐骨神经肿大,横纹消失,呈灰白色或黄白色。盐酸吗啉胍组死亡和剖杀鸡的病变基本上同病毒对照组,但病变程度要轻于病毒对照组。人参皂苷Rg3组在死亡和剖杀鸡中也可以见到上述病变,在肝、肾、心、脾、睾丸等处可见到粟粒大的白色结节,坐骨神经一侧肿大,法氏囊可见不同程度的萎缩;但病鸡肿瘤病变的程度明显要轻于以上两组,表现为发生的部位少、肿瘤体积小。2.3.2各组大鼠肿瘤阳性率的比较试验对各组脏器肿瘤的出现情况进行了统计,具体情况见表2。从检出结果来看,从高到低依次为病毒对照组、盐酸吗啉胍组、人参皂苷Rg3组,病毒对照组的肿瘤阳性率是345%,盐酸吗啉胍组的肿瘤阳性率是240%,人参皂苷Rg3组的肿瘤阳性率是195%。利用χ2.4体重和减幅率测定结果为对试验鸡增重变化进行了差异比较,结果见表3,由表3可见,人参皂苷Rg3组、盐酸吗啉胍组、病毒对照组和正常对照组试验鸡在6日龄时的平均体重约为75.00g左右,试验末的平均体重分别为680.40g、560.30g、419.40g和962.20g。将人参皂苷Rg3组、盐酸吗啉胍组、病毒对照组和正常对照组比较后,发现以病毒对照组减重的幅度最大,达542.80g;其次是盐酸吗啉胍组,人参皂苷Rg3组的减幅最小。人参皂苷Rg3组与病毒对照组相比,差异达到了极显著水平;与盐酸吗啉胍组比,差异达到了显著水平。表明人参皂苷Rg3组能促进鸡体重的增加,减少病毒对机体的侵害。3增强机体抗病力试验证明,人参皂苷Rg3能够推迟人工感染鸡的发病时间,明显降低人工感染鸡的发病率和死亡率。在试验结束后,存活数占试验鸡的比率分别为人参皂苷组Rg3为80%、盐酸吗啉胍组60%、病毒对照组40%,人参皂苷Rg3处理的存活率明显要高于病毒对照组,说明人参皂苷Rg3具有较好的治疗保护作用。从剖检变化中可以发现,人参皂苷Rg3组的病变范围明显低于病毒对照组,肿瘤的检出率也低于其他组。分析表明,人参皂苷Rg3很可能是通过增强机体的免疫力来达到抗病毒效果的。李庆章等MD主要病变特征是内脏各组织器官中出现单核细胞浸润而形成肿瘤。单核细胞源于干细胞。本试验在人工感染MDV雏鸡日粮中加入人参皂苷Rg3后,显著降低了MD肿瘤的发生率,从感染MDV雏鸡肿瘤的检出率变化情况可以看出,人参皂苷Rg3组的肿瘤检出率是195%,低于盐酸吗啉胍组(P<0.05)。表明人参皂苷Rg3对MD肿瘤病变的发生有明显的抑制作用。据报道,人参皂苷Rg3有显著的免疫促进作用试验结果还表明,人参皂苷Rg3对MD死亡率的影响与盐酸吗啉胍组相比差异不显著,但是和病毒对照组差异显著。从肿瘤检出率上看,人参皂苷Rg3组要低于盐酸吗啉胍组,盐酸吗啉胍组低于病毒对照组。这说明药物的综合防治效果依次是人参皂苷Rg3、盐酸吗啉胍,人参皂苷Rg3的治疗效果优于盐酸吗啉胍组可能和它们的作用机制不同有关。盐酸吗啉胍的抗病毒机制主要是通过阻断RNA聚合酶的活性和蛋白质的合成来发挥抗病毒作用的,没有提高机体免疫力的作用。尽管盐酸吗啉胍能降低感染