uplc-msms法比较款冬花蜜炙前后3个吡咯里西啶生物碱含量

uplc-msms法比较款冬花蜜炙前后3个吡咯里西啶生物碱含量

款冬花是蔷薇科植物的款冬特拉尔干燥花蕾。具有润肺、益气、止咳、粘液等功效。主要产于中国东北、华北、华东、西北地区、湖北、湖南、贵州、云南、西藏等省、自治区。1材料来源及样品制备WatersAcquity对照品千里光宁碱（批号11782）和N-氧化千里光宁碱（批号11610）购于PhytoLabGmbH公司，克氏千里光碱（批号ZZS19072502）购于上海甄准生物科技有限公司，纯度均大于98%；乙腈、甲醇、甲酸和甲酸铵均为质谱级（Fisher公司），其他试剂为分析纯。款冬花分别采自甘肃省和河北省，经中检院中药所昝珂副研究员鉴定为菊科植物款冬TussilagofarfaraL.的干燥花蕾。每批样品分为2份，1份为生品（编号分别标记为C1～C7），另1份按照《中华人民共和国药典》及通则规定，按蜜炙法用蜜水炒至不粘手（编号分别标记为P1～P7）；蜂蜜采用荆花蜜（北京百花蜂业科技发展股份公司产品，批号20190215D4）。2方法和结果2.1溶液的制备2.1.1对照品质量浓度的确定精密称取千里光宁碱、N-氧化千里光宁碱和克氏千里光碱的对照品适量，分别以10%乙腈水配成质量浓度分别为1.025、0.992和5.040μg·mL2.2-质量分析的质量分析条件色谱柱：WatersCORTECSUPLCC2.3方法研究2.3.1%乙腈标准品溶液的线性回归精密吸取各对照品储备液0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mL，分别置于6个10mL量瓶中，加10%乙腈定容至刻度，摇匀，即得各系列浓度的对照品混合溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，进样。按照“2.2”项下的条件进行测定。以对照品的峰面积Y为纵坐标，对应的浓度X为横坐标，进行线性回归。以定量离子的色谱峰信噪比S/N≥3对应的最低浓度为检测下限（LOD），以定量离子色谱峰信噪比≥10对应的最低浓度为定量下限（LOQ），结果见表2。2.3.2续进样稳定性精密吸取“2.1.1”项的混合对照品溶液1μL，连续进样6次，记录峰面积。结果千里光宁碱、N-氧化千里光宁碱和克氏千里光碱峰面积的RSD(n=6）分别为2.0%、1.7%和1.9%，表明仪器精密度良好。2.3.3进样测定取同一份供试品溶液（样品C1），分别于0、2、4、8、12、24h进样测定。结果千里光宁碱、N-氧化千里光宁碱和克氏千里光碱峰面积的RSD(n=6）分别为2.8%、2.5%和1.8%，表明供试品溶液在24h内稳定。2.3.4进样测定实验按照“2.1.2”项下方法制备样品C1的供试品溶液6份，分别进样测定。结果千里光宁碱、N-氧化千里光宁碱和克氏千里光碱的平均含量分别为0.464、0.942和44.72μg·g2.3.5对照品溶液精密称取千里光宁碱、N-氧化千里光宁碱和克氏千里光碱的对照品适量，精密称定，分别加10%乙腈水配制成上述3个成分质量浓度依次为0.496、0.988和48.35μg·mL2.4含量测定准确称取不同产地的款冬花药材1.0g，分别按照“2.1.2”项方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样测定，依据外标法计算千里光宁碱、N-氧化千里光宁碱和克氏千里光碱的含量，结果见表3。3讨论3.1高灵敏度的uplc-ms/ms法检测千里光宁碱、N-氧化千里光宁碱和克氏千里光碱等为款冬花中最主要的吡咯里西啶生物碱类成分，为痕量或超痕量组分，高灵敏度的UPLC-MS/MS法检测为首选方法。本实验采用UPLC-MS/MS法同时测定3个成分，正离子、MRM测定成分的离子对，20min内分离千里光宁碱、N-氧化千里光宁碱和克氏千里光碱，灵敏度高，定量离子峰形好，其他物质无干扰，能够对待测物质准确测定。3.2咯里西啶氧化物分离能力的影响本研究考察了不同配比乙腈-水以及含有甲酸和甲酸铵等含酸溶液作为流动相对吡咯里西啶生物碱的分离能力的影响。由于千里光宁碱和N-氧化千里光宁碱色谱峰附近有结构近似的同分异构体，质谱裂解碎片基本一致，需要通过保留时间将该成分和周围同分异构体分开，最终确定流动相为含0.05%甲酸和2.5mmol·L3.3款冬花中吡咯里西啶氧化物含量的变化本文采用建立的UP