克氏原螯虾最适能量蛋白质比的研究

克氏原螯虾最适能量蛋白质比的研究

科克斯原虾属于头壳科，这是一个非常显著的特征。目前的养殖实践大多仅凭经验投喂鱼糜、玉米、小麦等常用饲料,尚缺乏高效、专用的克氏原螯虾饲料,严重制约着螯虾养殖业的快速发展。为了研制专用的饲料,需要对克氏原螯虾的营养学参数有翔实而确切的研究,但目前关于克氏原螯虾的研究主要集中在它的生物学习性能量是虾类饲料组成定量的基础指标之一,对于水产动物而言,适量的能源物质有节约蛋白质的作用。但在虾类配合饲料中,过多的非蛋白质能源物质会影响其摄食和生长,造成体脂肪含量过高,商品性能降低,且限制虾类对其他营养成分的消化吸收。因此,在配合饲料的研制过程中,适宜的饲料E/P对于促进虾类的生长、提高产品质量、降低养殖成本、提高经济效益具有重要的作用。鉴于此,本试验旨在以鱼粉为主要蛋白质源制作半精制饲料,探讨不同饲料E/P对克氏原螯虾生长性能、肌肉组成、消化酶活性以及能量收支的影响,进而确定克氏原螯虾饲料最适E/P,以期为克氏原螯虾配合饲料的开发提供基础理论依据,推动其养殖业的发展。1材料和方法1.1相同cp水平半精制试验饲料cp-cp-u-u试验配制5种E/P分别为32、34、36、38和40MJ/kg(表1)的相同CP水平半精制试验饲料(饲料CP水平为35%,能量为消化能)。对常规试验饲料原料粉碎后,取80目筛下物,按照配方混合后制粒,加工成直径为0.5mm的颗粒饲料,60℃烘干。1.2养殖投喂及饲养管理克氏原螯虾取自安徽省巢湖市居巢区黄麓镇。饲养一段时间以后,选择体质健康、平均体重为(8.41±1.12)g的克氏原螯虾600尾,随机分为5个组,每个组6个重复,每个重复20尾虾,投放在安徽省巢湖市三珍公司30个养殖池(100cm×70cm×40cm)中,每个重复放入1个池子。饲养条件控制在pH为7.2~7.8,溶氧量为5.5~6.5mg/L,养殖温度为(25±3)℃,养殖水每天更换1/3。每天投喂3次,时间分别为08:30、13:30和18:30,投饵量约为虾体重的3%,投饵后2h清理残饵和粪便。饲养时间为60d。1.3样品分析与测定1.3.1生长性能试验测定的生长性能包括成活率、相对增重率、饲料系数、相对增长率,其计算公式如下:1.3.2理化指标和组成测定,体现为测定饲料和肌肉常规营养成分组成,其中用常压干燥法(GB/T5009.3—2010)测定水分含量;采用凯氏定氮法(GB/T6432—94)测定CP含量;采用索氏抽提法(GB/T6433—2006)测定粗脂肪含量;采用GB/T18426—2000方法以氨基酸分析仪测定氨基酸含量。1.3.3保存和分析养殖试验结束后,试验虾饥饿24h后,取出整个肠道和肝胰腺,剔除附属物,称重,分装入自封袋中,然后转至-20℃冰箱中保存,待分析用。分析时取出肠道和肝胰腺,4℃解冻,剪碎后加入10倍(w/v)的缓冲溶液(pH=7.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液),以1000r/min匀浆后,在4℃下3000r/min离心10min,取上清液待测(24h内测定完毕)。1.3.3.消化酶活力单位定义蛋白酶活性测定采用福林-酚试剂法;淀粉酶活性测定采用碘-淀粉比色法;纤维素酶活性测定采用3,5-二硝基水杨酸显色法。蛋白酶单位定义:1mg组织在37℃条件下1min水解酪蛋白产生1μg酪氨酸的酶量为1个蛋白酶活力单位,用U表示;淀粉酶单位定义:1mg组织在37℃条件下与底物作用30min,水解10mg淀粉定义为1个淀粉酶活力单位,用U表示;纤维素酶单位定义:1mg组织1min生成1μg葡萄糖的酶量定义为1个纤维素酶活力单位,用U表示。1.3.4试验虾与残全虾的肌肉组成和能值测定试验结束后,从每组选出10尾体质健康、平均体重为(14.0±0.4)g、规格一致的克氏原螯虾,-20℃冰箱保存4尾以测肌肉组成,剩下6尾虾随机分成3个平行,每平行2尾,放入半径为20cm的盆中,上面盖着纱网以防止虾爬出。每天投喂的饲料都精确称重,饱食投喂。残饵和粪便在喂食后2h内用虹吸法吸出,收集的残饵装入烧杯,风干后保存在-20℃。及时收集虾的蜕皮。样品的能值用6200型氧弹热量仪测定。每个样品重复测定2次,取平均值。试验时间为20d。能量收支方程如下:1.4数据分析及统计试验结果用“平均值±标准差”表示,采用SPSS17.0软件进行数据分析和统计,先对数据作单因素方差分析(one-wayANOVA),若影响显著,再用双重比较或Duncan氏法进行多重比较,显著性水平为P<0.05。2结果2.1组饲料系数的比较由表2可知,成活率、相对增重率和相对增长率都是随着E/P的升高呈现先升高后降低的趋势,均是E/P36MJ/kg组出现最高水平(P<0.05),而饲料系数则是E/P36MJ/kg组显著低于其他组(P<0.05)。如图1可见,以饲料系数作为评价指标,用二次曲线来计算克氏原螯虾最适的E/P,回归方程为y=0.024x如图2可见,以相对增重率作为评价指标,用二次曲线来计算克氏原螯虾最适的E/P,回归方程为y=-1.707x2.2粗灰灰灰的含量由表3可见,不同饲料E/P对克氏原螯虾肌肉中的水分、CP和粗灰分的含量都没有显著性影响(P>0.05);在32~38MJ/kg范围内,随着E/P上升,肌肉中粗脂肪含量出现逐渐上升的趋势(P>0.05)。2.3e/p对酸和精氨酸含量的影响由表4可见,E/P36MJ/kg组肌肉的蛋氨酸和精氨酸的含量显著高于E/P32和40MJ/kg组(P<0.05)。这3组中其他氨基酸的含量均没有显著差异(P>0.05)。2.4肠道消化酶活性由表5可见,随着E/P升高,克氏原螯虾的肝胰腺纤维素酶、淀粉酶与蛋白酶活性和肠道纤维素酶活性均呈现先上升后下降的趋势,分别在E/P36、36、36和34MJ/kg组达到了最高值(P<0.05),所对应的最高酶活性分别为263.6、336.7、934.0和275.4U/mg;肠道中淀粉酶活性呈现先降低后上升的趋势,在E/P36MJ/kg组呈现最低值,均显著低于其他组(P<0.05),即194.5U/mg;各组克氏原螯虾肠道蛋白酶活性没有显著性差异(P>0.05)。2.5各组ce的比较由表6可见,随着饲料中E/P上升,克氏原螯虾Ce呈现先上升后下降的趋势,在E/P36和38MJ/kg组Ce达到了最高值,显著高于其他组(P<0.05),分别为52.6和51.2kJ;Ge/Ce、Ue/Ce和Fe/Ce呈现先上升后下降的趋势;而Re/Ce和Ee/Ce则呈现先下降后上升的趋势。3讨论3.1e/p对螯虾成活率和相对增重率的影响经过60d的养殖试验,结果表明不同饲料E/P对克氏原螯虾的成活率有显著的影响,随着E/P升高,成活率和相对增重率均呈现先上升后下降的趋势,E/P36MJ/kg组出现最高值;饲料系数则是呈现先降后升的趋势。这与薛敏等3.2蛋白质周转对能量代谢的影响在本试验中,随着饲料中E/P的上升,肌肉中CP含量没有显著的变化。这说明饲料中的蛋白质被消化后更多地重新用于蛋白质的合成,使得蛋白质得到了合理的利用。随着饲料中E/P的上升,粗脂肪含量呈现上升趋势,可能由于饲料中碳水化合物的增加通过增加细胞质内的还原性辅酶Ⅱ(NADPH)含量来促进机体脂肪重新合成,特别的是碳水化合物的诱导靶位为2种戊糖磷酸脱氢酶(葡萄糖六磷酸脱氢酶和六磷酸葡糖酸脱氢酶)以及2种传送细胞质NADPH的脱氢酶(苹果酸酶和异柠檬酸脱氢酶)蛋白质合成和降解需要消耗能量,蛋白质周转与能量代谢之间具有定量的关系,依据动物蛋白质周转次数可计算出能量利用效率,但实际情况比理论模式要更为复杂3.3甲壳动物对纤维素酶活性的影响消化酶活性高低决定着克氏原螯虾对营养物质的消化吸收能力,并进一步影响虾体生长速度。对甲壳动物的纤维素酶虽然还没有详细的研究,但是在许多甲壳动物中都发现有纤维素酶活性。像其他动物一样,纤维素酶可能来自本身分泌,也可能来自肠内微生物或食物。对中国对虾的研究表明,投喂不同E/P的饲料,虾体内肝胰腺淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶活性和肠道中的纤维素酶、淀粉酶活性有明显的变化,呈现先升高后降低的趋势,并与相对增重率的变化趋势一致,说明消化酶活性与生长有着密切的关系据许实荣等3.4饲料e/p对克氏原螯虾生长的影响从克氏原螯虾在摄食不同E/P的饲料时能量收支情况来看,Re较大,占到50%~60%,Ge/Ce20%~30%,与蓝蟹(Callinectessapidus)摄食量的变化同时引起Ge、Ue、Re、Fe的变化,随着E/P的升高,Ce逐渐提高。在一定范围内,随着饲料中E/P的升高,克氏原螯虾Ge/Ce即转化率不断升高,且在适宜的E/P条件下,获得最大的Ge;E/P高于36MJ/kg后,Ce逐渐下降,相应地摄食量也逐渐减少,随之Fe和Ue均降低。这与Bautista4响克氏原螯虾饲料中E/P过高或者过低均会降低饲料利用