白桦茸不同提取物对小鼠急性毒性实验研究

白桦茸不同提取物对小鼠急性毒性实验研究

白桦树属于多孔菌科的纤孔菌科。细菌的核心是肿瘤，外观黑灰色，有不规则的槽痕，内部黄、硬。研究1材料和方法1.1真菌门担子菌亚门层菌纲非褐卧孔菌种大兴安岭白桦茸(Betulaplatyphylla)购自黑龙江省药材公司,经黑龙江中医药大学中药资源与开发教研室王振月教授鉴定为真菌门担子菌亚门层菌纲非褐菌目多孔菌科褐卧孔菌属白桦茸。1.2研究动物中心18～22gSPF级ICR小鼠140只,雌雄各半,黑龙江中医药大学实验动物中心,生产许可证号:SCXK(黑)2018-003,饲养于黑龙江中医药大学动物实验中心,室内温度20～25℃,相对湿度40%～60%。1.3实验试剂甲醇(天津市恒兴化学试剂制造有限公司),甲醛(天津市天力化学试剂有限公司),无水乙醇(天津市恒兴化学试剂制造有限公司),95%乙醇(天津市恒兴化学试剂制造有限公司),伊红(江苏世泰实验器材有限公司),苏木素(江苏世泰实验器材有限公司),二甲苯(天津市天力士化学试剂有限公司)。冻干机(北京松源华兴科技发展有限公司),AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司),脱水机(LEICA-ASP300S),包埋机(LEICA-EG1150H),切片机(LEICA-RM2255),染色机(LEICA-ST5010),生物显微镜(OLYMPUS-CX31)。1.4实验方法1.4.1不同提取点的白桦树1.4.1.白桦松茸水提物的制备白桦茸在纯净水溶液中经83℃提取3.4h,料液比1:36(w/v),提取4次,通过热水浸提的方式得到白桦茸水提物,其中1g水提物相当于4.5g白桦茸1.4.1.2.白桦发芽液的制备采用20L全自动小型发酵罐进行桦褐孔菌液体发酵,培养基配方:1%玉米淀粉,2%葡萄糖,0.2%蛋白脉,0.1%KH1.4.1.白桦松茸醇提物的制备白桦茸在30%乙醇溶液中经85℃提取4h,料液比1:30(w/v),提取2次,通过水浴回流装置得到白桦茸醇提物,将2次得到的白桦茸醇提物混合,利用旋转蒸发仪回收溶剂,得到浓缩液利用冻干机48h后得到冻干粉。其中1g提取物相当于10g白桦茸。1.4.2小鼠最大体积测定实验选取SPF级ICR小鼠60只,体质量(20±2)g,雌雄各半,实验前禁食12h,将白桦茸水提物、白桦茸发酵液和白桦茸醇提物按照小鼠最大体积0.4mL·10g1.4.3白桦松茸醇提物对大鼠的影响根据预实验的结果,选取SPF级ICR小鼠80只,体质量(20±2)g,随机分成8组,分别为对照组、白桦茸水提物最大给药浓度组、白桦茸发酵液最大给药浓度组和白桦茸醇提物组(采用Bliss法,按照0.7倍剂量间距,将小鼠分为4.0、5.6、8.0、11.2、16.0g·kg1.4.4小鼠的一般情况给药后,观察内容包括动物运动情况、眼睑指征、呼吸、皮毛、排泄物和分泌物等。记录动物中毒症状及中毒反应的起始时间、严重程度、持续时间等。实验期间各组动物的死亡情况并详细登记,出现死亡或濒死动物及时进行解剖检查。体质量指标,实验期间称量小鼠给药第1天、第3天、第7天、第14天的体质量。检测脏器系数和主要脏器的病理检查,小鼠解剖时,观察脏器色泽、体积、质地等变化;将心、肝、脾、肺、肾脏和脑于10%福尔马林固定,修块、脱水、包埋、切片、HE染色、封片,显微镜下观察组织器官的组织结构和细胞形态。1.5统计方法体质量采用Excel进行统计,实验结果均以均数±标准差(2结果2.1实验报告白桦茸水提物组,通过予小鼠白桦茸水提物最大给药浓度(10g·kg2.2白桦松茸单次给药对小鼠的影响各组给药后发现,对照组无异常,小鼠予白桦茸水提物后,给药当日部分小鼠活动减少,给药次日发现少数小鼠有稀便,持续观察至第3天小鼠恢复正常,至观察期结束未发现小鼠死亡;小鼠予白桦茸发酵液后,给药当日雄性和雌性各有2只小鼠活动减少,持续观察至第3天小鼠恢复正常,至观察期结束未发现小鼠死亡;小鼠予白桦茸醇提物后,给药当日小鼠活动减少,16.0g·kg2.3小鼠体质量的变化小鼠急性毒性实验中,驯化饲养3d小鼠体质量平稳,给药时小鼠初始体质量在22～24g,记录小鼠1、3、7、14d的体质量,各给药组与对照组比较,小鼠予白桦茸水提物组的体质量至3d时,体质量呈下降趋势,至7d和14d体质量与对照组相同呈上升趋势;小鼠予白桦茸发酵液组体质量至3d时,体质量呈下降趋势,至7d和14d体质量呈上升趋势;小鼠予白桦茸醇提物各组小鼠体质量至3d,体质量呈下降趋势,至7d,小鼠予白桦茸醇提物4.0、5.6组小鼠体质量逐渐恢复,小鼠予白桦茸醇提物8.0、11.2组小鼠体质量呈下降趋势,至14d,小鼠予白桦茸醇提物4.0、5.6组小鼠体质量呈上升趋势,小鼠予白桦茸醇提物8.0、11.2组小鼠体质量略有上升。说明白桦茸水提物和白桦茸发酵液单次灌胃予小鼠后,未影响小鼠的生长,白桦茸醇提物单次灌胃予小鼠后,对小鼠的生长有一定的影响,见表3,表4。2.4小鼠脏器指数变化情况小鼠脏器系数是脏器的重量与自身重量的比值,能初步反映小鼠整体营养状态和病变情况,各给药组小鼠脏器指数结果与对照组相比无统计学意义(P>0.05),见表5,表6。初步判定不会对小鼠造成脏器的损伤。2.5对大鼠主要器官的形态的研究通过对照组与白桦茸醇提物11.2g·kg3白桦松茸醇提物不致药物毒性作用的细白桦茸不同提取物小鼠单次经口急性毒性实验研究发现,小鼠予白桦茸水提物未发生死亡,个别小鼠有稀便现象和体质量轻微下降的趋势,可能与给予白桦茸水提物后影响小鼠肠蠕动有关,次日恢复且体质量呈平稳上升趋势,病理解剖观察无异常,结果表明白桦茸水提物最大耐受剂量不低于10.0g·kg组织病理学可以通过形态学的改变来确定药物毒性作用的靶器官,本研究主要对小鼠的心、肝、脾、肺、肾脏和大脑进行HE染色,在显微镜下观察未发现有极显著形态学的改