烟嘧磺隆安全性检测

烟嘧磺隆安全性检测

磺酰胺是20世纪80年代开发的一种新型杂草。具有高度的杂草活性、少量的草、广泛的杀草谱和长期的长期疗效等特点。这是消毒超标时代的象征，对消毒发展史具有里程碑意义。烟嘧磺隆(nicosulfuron)是磺酰脲类除草剂商品化品种之一,是一种高效、低毒玉米田苗后专用一次性除草剂,具有用量低、杀草谱广、除草效果好等特点,并对野高梁、野黍子有特效,为了保证其安全使用,我们从遗传毒理学方面进行了鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)、小鼠骨髓多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验、V79细胞基因突变试验,探讨其有无致突变作用。11.1实验动物和动物烟嘧磺隆原药(国内某单位提供),纯度>95%;2,4,7-三硝基-9-芴酮(Fluka公司);MMS(Merck公司);二羟基蒽醌和2-AF(上海试剂厂);培养基和胰酶(Gibco公司);环磷酰胺(上海华联制药有限公司);丝裂霉素C、氧化型辅酶Ⅱ、6-磷酸葡萄糖钠盐、6-巯基鸟嘌呤(6-TG)、胸苷、次黄嘌呤、氨甲喋呤、甘氨酸(Sigma公司)。鼠伤寒沙门氏菌株TA97、TA98、TA100、TA102,由美国Ames实验室提供,经特性鉴定符合要求;肝微粒体酶S9(多氯联苯诱导)本实验室按Ames方法制备。三级昆明种小鼠,购自中国药品生物制品检定所实验动物中心[京动许字(2000)第017号]。中国仓鼠肺细胞株(V79细胞),本实验室液氮保存。1.2制备阳性对照和回变性对照采用平板掺入法,剂量为8、4、2μg/皿,同时设自发回变、溶剂对照(无菌蒸馏水)和阳性对照。在加和不加S9条件下分别进行试验。1.3h经口染毒试验昆明种小鼠体重25~30g,每组10只动物(雌雄各半)。间隔24h经口染毒两次,剂量为1000、500、250mg/kgbw。于第二次给药后6h取胸骨骨髓常规制片,Giemsa染色,每只动物观察1000个多染红细胞(PCE),并计数含有微核细胞数。1.4小鼠睾丸常规片昆明种雄性小鼠体重25~30g,每组5只动物。连续5d经口染毒,剂量为2500、1250、625mg/kgbw。于第一次给药后第14d处死动物,取出两侧睾丸常规制片,Giemsa染色。每只动物每侧睾丸观察50个中期分裂精母细胞,记录染色体畸变细胞数和畸变类型并计算畸变率。1.5小鼠血清中型mds-pcr检测细胞集落形成率根据细胞毒性测定试验确定5个测试剂量,依次为:5000、2500、1250、625、312.5μg/ml。细胞于含THMG的MEM培养液中培养一周(以杀灭自发HGPRT座位突变体)后,接种于无血清MEM培养液中,在加和不加S9条件下与受检样品接触5h,置含10%小牛血清的MEM培养液中培养,进行集落形成率测定和突变体的选择。集落形成率测定:表达结束的细胞,以400个细胞/瓶密度接种,每剂量组5瓶细胞,培养7d后,用甲醇固定、姬姆萨染色,计数各瓶的细胞集落数并计算集落形成率(CFE)。表达和突变体的选择:表达结束的细胞,按2.5×1022.1回变菌落数测定烟嘧磺隆原药在加与不加S9时,诱发鼠伤寒沙门氏菌株回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍;各剂量组回变菌落数与溶剂对照比较无显著性差异(P>0.05),各剂量组间无明显的剂量-反应关系(见表1)。2.2组溶剂对照比较烟嘧磺隆原药各剂量组的微核细胞率为3.2‰~5.2‰,与溶剂对照比较无显著性差异(P>0.05);阳性对照与溶剂对照比较有显著性差异(P<0.01,见表2)。2.3两组阳性对照和不阳性对照的比较见表1烟嘧磺隆原药各剂量组的染色体畸变率为0.8%~1.0%,与溶剂对照比较无显著性差异(P>0.05),阳性对照与溶剂对照比较有显著性差异(P<0.01,见表3)。2.4试验结果的选择各试验剂量组的突变频率为24.77/10每种体外短期检测系统均会受到实验条件(如有限的体外代谢活化系统)、实验设计、不同受试农药的特殊性等因素影响,使试验结果存在一定比例的假阴性或假阳性的可能,任何一项遗传毒性试验中的阳性/阴性结果不能完全说明受试农药对人体具有/无突变性,需结合遗传毒性方面的多项检测试验结果全面考虑,以提高对农药是否具有诱变性及潜在致癌性评价的可靠性。因此,我们选择Ames试验、小鼠骨髓多染红细胞微核试验、