黄药子醇提物对小鼠急性毒性试验

黄药子醇提物对小鼠急性毒性试验

黄药子是甘薯科的一个单带。它的味道又苦又冷。它具有解粘液、软化、固体结、清热解毒、冷血止血的作用。口服入座量为10.15克。11.1黄药子醇提物昆明种小鼠,雌雄各半,体质量(20±2)g,SPF级,共94只。购于河南省实验动物中心,生产许可证号SCXK(豫)2010-0002。于郑州大学药学院实验动物房适应1周后开始试验,实验动物使用许可证号SYXK(豫)2010-0002。黄药子饮片购自河南省老百姓大药房,经郑州大学药学院刘若庸教授鉴定认为来源于黄独(DioscoreabulbiferaL.)的块茎。黄药子醇提物由郑州大学新药研发中心制备,方法为:黄药子饮片打碎成粗粉,加10倍量75%乙醇浸泡30min后,加热回流提取2h,倾出药液,残渣再加10倍量75%乙醇重复回流提取3次。合并4次提取液,减压浓缩至浸膏,-80℃冷冻干燥至黄色粉末,1g黄药子醇提物相当于饮片6.31g。临用前采用0.6%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液配成所需浓度。DJ-5000C电子天平,中外合资亚太电子天平厂。1.2方法1.2.1给药后观察结果①首次预试取小鼠12只,按体质量、性别分层随机法分为3组,每组4只,雌雄各半。以1∶0.5作为黄药子醇提物剂量等比级数,预试1、2、3组剂量依次为:20.00,10.00,5.00g/kg。给药容量为40mL/kg。禁食(不禁水)12h后1次性ig,给药后记录动物的即时反应并连续观察7d。结果见表1。从表1可见,小鼠死亡率(P)为100%的剂量(Dm)为20.00g/kg;10.00g/kg剂量组动物1只死亡,2只动物观察期内活动少、精神萎靡、毛色无华,至观察期末均呈濒死状。5.00g/kg剂量组动物在给药后至观察期末均未见明显异常症状出现,P=0%。为进一步收集小鼠对黄药子醇提物10.00g/kg剂量的耐受性信息,同时对P=0%的剂量(Dn)作进一步确证,故进行了二次预试验。②末次预试取12只小鼠按体质量、性别分层随机法分为3组,每组4只,雌雄各半;黄药子醇提物剂量等比级数1∶0.65。预试1、2、3组的剂量依次为:10.00,6.50,4.26g/kg。禁食(不禁水)12h后,各组仍按40mL/kg1次性灌胃,给药后记录动物的即时反应并连续观察7d。结果可见,以10.00g/kg的剂量灌胃后,1.2.2单次给药剂量根据预实验结果,按Bliss法设计,在Dm和Dn的剂量范围内(含Dm和Dn)设6个剂量,即20.00、16.00、12.80、10.24、8.19、6.55g/kg,分别依次作为给药1、2、3、4、5、6组的黄药子醇提物的剂量。通过计算22.1u3000活化小鼠单次灌胃黄药子醇提物不同剂量后,多数动物出现消瘦,竖毛,呼吸急促,精神萎靡等异常反应。随时间推移,给药3、4组存活小鼠在7d后,给药5、6组存活小鼠在3d后异常体征趋向恢复。小鼠死亡时间集中在1～3d。其中,0～1d死亡1只,1～3d死亡23只,3～7d死亡8只,7～14d死亡1只。剖检结果显示,0～3d死亡小鼠胃内见药物结块,肝脏呈不同程度的浅黄色,余未见明显异常;3～7d死亡小鼠肝脏肿大,呈不同程度的浅黄色,纹理粗糙;14d时各给药组存活小鼠剖检各脏器未见明显异常。阴性对照小鼠体征和剖检均未见异常。2.2体重体量给药前(0d)各组小鼠体质量比较均无显著性差异(2.3量-毒关系检测试验结束后,统计各组动物死亡率(P),根据表3中的数据可看出,给药1、2组的P值均为100%,给药6组的P值为10%,呈现一定的量-毒关系。用Bliss软件计算黄药子醇提物LD回归方程y(Probit)=-3.2306+8.4889Log(D)LDLDLDLD3动物异常体征恢复的时间本实验按Bliss法设计,测得黄药子醇提物LD单次灌胃黄药子醇提物不同剂量后,多数动物出现消瘦,竖毛,呼吸急促,精神萎靡等异常反应。随时间推移,动物异常体征恢复的时间各给药组有所差异:给药3,4组存活小鼠在7d后,给药5,6组存活小鼠在3d后异常体征趋向恢复。试验同时发现,各给药组存活小鼠在给药后体质量总体较阴性对照组增长缓慢;经14d的恢复,存活