灰树花子实体多糖对糖尿病小鼠降血糖作用的影响

灰树花子实体多糖对糖尿病小鼠降血糖作用的影响

灰木花的学术分类属于红景天、亚门、层菌、无芒菌亚门、非褶皱菌和多孔菌属的大型真菌。这是一种具有药物和食物的珍稀菌。该物质包括氨基酸、糖、养分和其他养分，其中糖是主要的生物活性成分。目前灰树花多糖已被开发成保健食品,主要作为生物反应调节剂,成为癌症患者放化疗过程中重要的辅助药物雷红等1材料和方法1.1实验动物相同菌株,scxk产品KKay小鼠,雌性,40~45g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,合格证号:SCXK(沪)2003—0003。C1.2生物酶活性试剂格列吡嗪(glipizide)海南赞邦制药有限公司;罗格列酮片(rosiglitazone)成都恒瑞制药有限公司;临用时研碎用1g/100mL羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液混悬至所需质量浓度。α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)Sigma公司;4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)E.merk公司;还原型谷胱甘肽中科院上海生物化学研究所;糖原测定试剂盒南京建成生物工程研究所;其余试剂均为分析纯。JPS-3+型血糖仪及试纸北京怡成生物电子技术有限公司;YP202N电子天平上海精密科学仪器有限公司;722型分光光度计上海精密科学仪器有限公司。1.3mt--glucan的分离纯化从人工培养的灰树花子实体粉经乙醇乙醚回流、水提、醇沉、干燥得粗多糖,选用DEAESepharoseFastFlow阴离子交换树脂和ToyopearlHW-75分子筛分离纯化得到MT-α-glucan。MT-α-glucan多糖含量为98.7%。紫外扫描在260、280nm波长处均无明显特征吸收峰。高效凝胶过滤色谱法(HPGPC)测定分子质量为40×101.4阴性组和阴性组f48只雌性KKay小鼠,随机分为6组,即MT-α-glucan剂量分别为0(阴性对照组)、28、56、112、225、450mg/kgbw,每组8只。分别于给药前、给药后4、8、12、24h测定随机血糖值,观察MT-α-glucan降血糖作用的量效关系和时效关系。1.5随机血糖的测定根据上述实验结果,找出最佳的药物作用时间和剂量。40只雌性KKay小鼠,随机分为5组,即模型组、MT-α-glucan高、中、低3个剂量组、格列吡嗪(Glipizide,875μg/kgbw)组,每组8只。分别于给药前、给药后8h测定小鼠随机血糖值。观察MT-α-glucan单次给药对KKay小鼠的降血糖作用。1.6glucan单次给药后g/ls-glucan检测雌性KKay小鼠32只,随机分为4组:模型组、MT-α-glucan高、低剂量组(450、150mg/kgbw)、阳性对照组(罗格列酮,Rosiglitazone,1mg/kgbw),每组8只。另取8只雌性C1.6.1影响cpay大鼠空腹血糖的影响禁食4h后,尾尖取血,用血糖仪测定血糖值,于给药前1d、给药后4、8、14d进行。1.6.2连续服用大鼠后，大鼠的动态变化随著性减少于连续给药后第12天,给药前、给药后4、8、12、24h尾尖取血,测定随机血糖值,观察当天24h内血糖的动态变化。1.6.3大鼠胃葡萄糖的抗量实验ogtt小鼠于给药14d禁食4h,灌胃给予葡萄糖2g/kg,于灌糖前、灌糖后30min、1h、2h尾尖取血测定血糖含量。1.6.4影响cpay大鼠糖原含量的影响取小鼠后肢骨骼肌样本,生理盐水漂洗后,滤纸吸干,称质量。采用糖原测定试剂盒进行肌糖原含量的测定。1.7mt--glucan的制备酶活力单位的定义:在37℃、pH6.8条件下,1min内水解PNPG释放1μmol对硝基酚(PNP)所需的酶量。参照文献[8]的方法并加以改进,以PNPG为底物,反应体系为:67mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH6.8)中加入MT-α-glucan50、100、150、200、250、300μL(30mg/mL),总体积2mL,再加入还原谷胱甘肽50μL(1mg/mL),α-葡萄糖苷酶5μL(20mg/mL),摇匀后37℃温浴10min;然后加入底物PNPG50μL(0.116mol/L)37℃水浴反应10min后,加入0.1mol/LNa式中:A1.8数据的统计处理数据均用2结果与分析2.1降血糖作用比较MT-α-glucan降血糖作用的量效关系实验结果见图1,随着剂量的增加,降血糖作用逐渐增强,以112、225、450mg/kgbw剂量组降血糖作用较为明显。MT-α-glucan降血糖作用的时效关系实验结果见图2,450mg/kgbw剂量组给予后4、8、12h血糖浓度明显下降,以给药后8h降血糖作用最为明显,随后血糖水平逐渐上升,给药后24h恢复到给药前水平。2.2降血糖作用前后小鼠血糖由表1可知,MT-α-glucan高、中剂量(450、225mg/kgbw)可使KKay小鼠血糖明显降低(P<0.05或P<0.01),以高剂量作用更为明显;低剂量组给予前后血糖值虽无统计学差异,但有下降趋势。格列吡嗪(875μg/kgbw)亦可使KKay小鼠血糖明显降低。2.3mt-i-gacumu甘贝尔多次影响大鼠腹部血糖由图3可知,KKay小鼠空腹血糖明显高于正常对照组C2.4mt--glucan单次给药对pkoa小鼠24h内随机血糖的影响由表2可知,MT-α-glucan(450,150mg/kgbw)及罗格列酮连续给药12d均可使KKay小鼠24h内随机血糖明显下降,以MT-α-glucan高剂量作用更为明显。说明MT-α-glucan多次给药可使24h内随机血糖维持在较低的稳定水平。2.5mt--glucan多次给予对药大鼠葡萄糖的影响由表3可知,MT-α-glucan(450、150mg/kgbw)及罗格列酮均可使KKay小鼠灌胃给予葡萄糖后的血糖浓度明显降低,提示MT-α-glucan可促进糖代谢,提高对葡萄糖的耐受性。2.6mt-pgc-worm进一步影响了cpay大鼠的糖原含量由表4可知,KKay小鼠肌糖原含量明显低于正常对照组C2.7mt--glucan对-葡萄糖苷酶的抑制作用α-葡萄糖苷酶是一种存在于小肠绒毛黏膜细胞刷状缘的酶类,通过水解α-1,4糖苷键,可以从淀粉和其他有关多糖的非还原端水解葡萄糖。人体对摄入的淀粉、蔗糖等碳水化合物的吸收利用,依赖于小肠内该酶的活性。α-葡萄糖苷酶抑制剂通过抑制小肠刷状缘上α-葡萄糖苷酶的活性,延缓或抑制葡萄糖在肠道内的吸收,从而有效地降低了餐后血糖的峰值不同量的MT-α-glucan对α-葡萄糖苷酶的抑制作用如图4所示。结果表明,MT-α-glucan(质量浓度30mg/mL)加入50μL即可产生约40%的抑制活性,且抑制作用随着剂量的增加逐渐增强,加入300μL可产生60%以上的抑制活性,呈一定的量效关系,表明MT-α-glucan对α-葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用。3mt--glucan多次给予对kay小鼠血糖的影响3.1M-α-glucan对KKay小鼠降血糖作用的量效关系实验结果表明,随着给予剂量的增加,降血糖作用逐渐增强,以112、225、450mg/kgbw剂量组降血糖作用较为明显。时效关系实验结果表明,给予后4、8、12h血糖明显下降,以给予后8h降血糖作用最为明显,随后血糖水平逐渐恢复,给予后24h恢复到给予前水平。3.2MT-α-glucan(450、225mg/kgbw)单次给予可使KKay小鼠血糖明显降低。在动物不禁食的情况下,MT-α-glucan单次给予即可使血糖明显降低,说明MT-α-glucan的降血糖作用可能与抑制肠道糖吸收的酶有关。3.3MT-