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菌种保藏的注意事项主讲教师：李蒙123保藏方法的选择细胞菌龄的选择细胞悬液目录CONTENTS4保护剂5冻结和解冻的速度6菌种活化Part01保藏方法的选择微生物的种类很多，不同的微生物其特性可能差异很大；因此，应根据微生物菌种的具体特性、保藏的目的等因素来选择合适的保藏方法；菌种经常使用，可选择斜面低温保藏法；需长期保藏，可选择超低温保藏法或液氮保藏法。1保藏方法的选择Part02细胞菌龄的选择2细胞菌龄的选择对微生物菌种进行保藏时，不同菌龄的微生物细胞对保藏的效果有较大的影响；一般情况下，应选择生长同步且成熟的细胞群体、抗逆性强的孢子或芽孢进行菌种保藏；保藏不产芽孢的细胞、酵母菌时，应选择对数生长期末期到稳定期初期之间的细胞；保藏产芽孢细胞、放线菌、霉菌时，应选择其成熟的芽孢或孢子。Part03细胞悬液3细胞悬液增大菌种的悬液浓度，可提高存活的细胞数量，提高菌种的存活机率；一般情况下，细菌细胞或芽孢的浓度应不低于108个/mL；酵母菌细胞或霉菌孢子的浓度应不低于107个/mL；另外，微生物经过培养后，培养基中可能存在对细胞有害的代谢产物；因此，对使用液态培养基培养的微生物细胞可离心去除培养液，再用无菌水悬浮成菌悬液，斜面菌种则可直接用无菌水洗脱成菌悬液。Part04保护剂4保护剂保藏温度过低时，细胞内的自由水可形成冰晶，会对微生物菌种造成伤害；此时可加入保护剂，适合的保护剂可有效使细胞内的自由水渗出胞外，减少胞内冰晶的形成，有利于提高菌种的存活率，延长保藏期；常用的保护剂一般有甘油、脱脂牛乳、山梨醇、葡聚糖、淀粉、血清等；使用终浓度一般为10%~30%。Part05冻结和解冻的速度5冻结和解冻的速度对于液氮保藏法，冻结速度和解冻速度对保藏的效果影响较大，一般使用慢冻结而快解冻的方式；研究表明，速度在1~10℃/min范围内的程序降温，细胞死亡率低，超过10℃/min的快速冻结，细胞的死亡率大大提高（真核微生物较显著）；解冻时，一般迅速放置于35℃~40℃的温水中快速解冻，接着进行菌种活化相关工作；如果解冻速度较慢，有可能出现细胞内再结冰，对细胞造成伤害，从而影响菌种保藏的效果。Part06菌种活化菌种的活化就是将保藏状态的微生物菌种置于适宜的条件中培养，使其恢复原有生命活力及优良性状的过程；活化菌种时，应使用该菌种的最适合培养基及培养条件，经过2~3代的转接培养，即可达到活化的目的；一般情况下，

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