交叉配血知识讲座

交叉配血知识讲座10/10/20231第1页标本采集及要求一血型二不规则抗体筛选三交叉配血四10/10/20232第2页一标本采集及要求1.标本要新鲜:前三个月内病人输过血或已经妊娠,则配血试验使用标本不得在这次输血48小时前抽取,避免因回忆反应产生抗体漏检。新近输血或妊娠能够引发意外抗体迅速出现,假如对病人输血史或人身史不明,使用标本必须是输血前48小时内抽取。血量约为5ml。2.病人在使用右旋糖酐、pvp等治疗前抽取病人血液标本备用,以避免红细胞缗钱状凝集对试验成果干扰。10/10/20233第3页标本采集及要求3.在二十四小时内输了12单位血后,能够输注未经交叉配血ABO、RH同型血液,由于原始交叉配血用血清已不能代表患者血清情况。4.标本必须有正确标签,要避免血样稀释和溶血产生,溶血标本一般不能使用,由于血清中游离血红蛋白能够掩盖在输血前试验中抗体反应引发溶血。标本标签上内容与血液申请单上内容要一致。10/10/20234第4页标本采集及要求5.血清或血浆均可用于输血前检查,但使用血浆标本时,应注意排除纤维蛋白原干扰,由于血浆有时有少许纤维蛋白凝块,容易造成凝集成果判断。6.输血后所有标本均应妥善保存于2-8℃冰箱中,最少一周。10/10/20235第5页二、血型1.红细胞悬液配制用于血型判定、配血等红细胞最少要用大量生理盐水洗一次,其目标是通过洗涤能够清除红细胞表面物质,如少许血浆蛋白、已溶解红细胞基质,他们有竞争抗体作用,尚有抗凝剂,他们有抗补体作用。10/10/20236第6页2.红细胞悬液常用浓度2%红细胞悬液一般用于抗体效价测定5%红细胞悬液一般用于血型判定、配血试验、及抗球蛋白试验等大多数血型血清学试验10%红细胞悬液一般用于测定抗体亲和力试验10/10/20237第7页3.离心力标准不一样规格离心机，力矩不一样，统一离心转速，但没有统一离心力。离心转速换算公式：RCF=1.118×10-5×(rpm)2×R(cm)将试管成30-45℃角拿在手上，细胞扣朝上，手腕轻轻用力，用液体去冲细胞扣，假如为阴性，则细胞成细沙状沿试管壁流下，假如为阳性，细胞成块状脱落细胞壁或成齿状沿试管壁留下。切不可用力使劲摇试管，那样凝集颗粒会被摇散，弱凝集则会误判为阴性。

4.离心后成果观察注意事项10/10/20238第8页5.加样时先加血清再加红细胞，以避免漏加；抗体和抗原百分比一般为2：1。6.必须要做正反定型试验才能确定血型。7.正定型试验假如有条件可加做抗AB,可用来检测弱A和弱B,反定型一定要加做O细胞,可用来发觉不规则抗体。10/10/20239第9页8.盐水试验多采取立即离心法,正确操作是红细胞悬液加到血清后立即离心并观测成果。反应时间过长而延误立即离心时间对ABO血型系统抗体检出影响较大。①假如在室温放置2分钟后离心,也许使3+-4+凝集削弱为0+-1+,并伴有溶血现象。②假如在室温放置5分钟后离心,原有凝集也许消失,并有溶血。10/10/202310第10页③有标本在延迟离心后,本来应有凝集会变为既不凝集也不溶血,因而难以发觉ABO血型不配合。这多数发生在O型人血清抗体与A型、B型或AB型红细胞反应试验中,发生率为2%-3%。发生上述原因是反应强抗A、抗B和抗原强度强A、B抗原作用,补体C1在有Ca2+存在条件下,固定到红细胞膜上,妨碍了红细胞凝集,深入也许引发溶血。处理办法：A:血清与红细胞混合后立即离心。B:用血浆或灭活血清做试验C:用EDTA盐水配制红细胞悬液,D:稀释血清10/10/202311第11页9.正反定型不一致原因一般正反定型成果不一致有技术原因也有受检红细胞或血清本身问题。■（1）技术和管理错误---ABO定型中产生异常成果主要原因标本和试剂搞错，造成假阳性或假阴性成果。器材不洁产生假阳性成果。试剂污染或不足，产生假阳性或假阴性成果。离心过度或不足，产生假阳性或假阴性成果。阳性反应产生溶血现象未能识别，造成假阴性成果。漏加试剂，产生假阴性成果。成果统计或判断错误，产生假阳性或假阴性成果。10/10/202312第12页正反定型不一致原因■（2）标准血清效价太低、亲和力不强。如抗A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。■（3）红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体百分比不合适，使反应不显著，误判为阴性反应。■（4）血清异常华通胶或血清蛋白异常引发串钱状形成，影响反定性成果。■（5）红细胞致敏在含高蛋白介质试剂中可发生凝集，产生假阳性成果。10/10/202313第13页■（6）近期曾异型输血，使病人血液标本成为不一样型别红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝集”现象。■（7）疾病原因造成抗原削弱某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，检出困难。■（8）红细胞多凝集现象红细胞因遗传或获得性表面异常，发生多凝集现象。■（9）取得性类B由于革兰氏阴性杆菌作用，红细胞可取得“类B”活性。10/10/202314第14页正反定型不一致原因■（10）近期内进行大量血浆置换治疗，影响抗体效价，造成反定型困难。■（11）异常血浆蛋白病人血浆中异常白蛋白、球蛋白百分比异常和高浓度纤维蛋白原等能造成缗钱状形成，造成假凝集现象。■（12）不规则抗体产生受检者血浆中，具有ABO血型抗体以外不规则抗体，如本身抗I，与试剂A、B细胞上对应抗原起反应。10/10/202315第15页■（13）低丙种球蛋白血症也许会因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。■（14）药品等原因药品、右旋糖酐等静脉注射某些造影剂可引发红细胞聚集而类似凝集。■（15）年纪原因如新生儿、老年人等。10/10/202316第16页正反定型不一致处理办法如发觉ABO正反定性不一致，首先要重做试验一次。严格执行操作规程，使用质量合格试剂以及细心观测成果，可处理显著问题，对某些疑难问题需深入检查。可初步采取下列措施：（1）另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样能够纠正因污染或搞错标本造成不符合。（2）将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗A、抗B、抗A+B做试验，能够得到其他有用信息。有条件可加做抗H试验。10/10/202317第17页（3）对受检者作直接抗人球蛋白试验，看红细胞有没有被致敏（4）如疑为A抗原或B抗原削弱，可将受检红细胞与抗A或抗B血清作吸取放散试验（5）如试验成果红细胞成缗钱状排列，加等渗盐水1滴混匀，往往可使缗钱现象消失。（6）做反定型试验时需要加做O细胞10/10/202318第18页常用统计符号及所示凝集强度

4+:一种大凝集块,背景透明,无游离细胞3+:数个大凝集块,背景透明,无游离细胞2+:许多小凝集块,肉眼可见,大小均匀,背景基本透明,有游离细胞1+:很小凝集块,肉眼可见,背景不透明,游离细胞较多,需要用显微镜观测W+:微小凝集块,肉眼很难看清,背景混浊,需要用显微镜观测O:无凝集,无溶血,所有是游离细胞,要用显微镜观测PH:部分溶血H:完全溶血WF:混合外观10/10/202319第19页疑难血型病例1.白血病血型变异2.血浆蛋白紊乱3.类B4.多/全凝集5.冷凝集6.ABO亚型10/10/202320第20页三、不规则抗体筛选

1.所谓不规则抗体是指抗A、抗B以外血型抗体，其多为ＩｇＧ抗体。主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生。进行不规则抗体筛选目标是发觉有临床意义不规则抗体，以确保安全用血，有效用血，有条件或时间允许情况下最佳献血者血清也作不规则抗体筛选，如有发觉不规则抗体，判定此抗体，找出能与其相配合血液，不可随便用于输血。由于多为ＩｇＧ抗体，在盐水介质中不能凝集而只能致敏对应抗原红细胞,必须通过特殊介质(酶、抗人球蛋白、ｐｏｌｙ等)才能使致敏红细胞出现凝集反应，这些办法选择可按抗体血清学行为和试验详细条件来确定。临床上一般所称“同型血”事实上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其他红细胞血型系统未必相同。假如交叉配血不认真,或者只用盐水介质配血,则有也许检查不出ＡＢＯ血型系统之外不规则抗体,而此抗体与对应抗原发生免疫反应,可造成溶血性输血反应发生。10/10/202321第21页2.筛选细胞一般是由2-3个单人份O型红细胞组成一套筛选细胞试剂，包括下列常见抗原：Rh系统、MNSs系统、P系统、Lewis系统、Duffy系统等。3.抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义不规则抗体。某些抗低频率抗原抗体则也许漏检。10/10/202322第22页不规则抗体筛选操作步骤病人/被检血清+抗体筛选细胞→盐水介质非盐水介质（聚凝胺、抗球蛋白、酶）1、取试管四支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和本身对照并向各管加病人血清（血浆）100ul，加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各50ul于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管中和5%本身细胞于本身对照管中。2、各加LIM0.6ML，混合均匀后，静置15秒,再各加Polybrene溶液100ul(约2滴)，并混合均匀。3、以1300G离心，离心15秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ML液体。4、轻轻摇动试管，目测红细胞有没有凝集，如无凝集，则必须重作。5、最后加入Resuspending100ul(约2滴)，轻轻转动试管混合并同步观测成果。假如凝集散开，表达是由Polybrene引发非特异性聚集，抗体筛检成果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合特异性反应，抗体筛检成果为阳性，应深入作抗体判定。10/10/202323第23页①抗筛阴性，交叉配血相容②抗筛阴性，盐水直接离心交叉配血不相容原因有：献血者红细胞是ABO血型不相容存在在室温反应同种异体抗体献血者红细胞是多凝集红细胞4.抗体筛选和交叉配血试验成果分析10/10/202324第24页③抗筛阴性，酶试验、抗球蛋白交叉配血试验等不相容献血者红细胞DAT试验为阳性受血者血清抗体活性很弱，则抗筛试验成阴性抗体与低频率抗原反应④抗筛阳性，交叉配血相容本身抗-H抗-Lebh抗筛阳性，但献血者红细胞也许正好不含与对应抗原，因此配血能够相合。10/10/202325第25页⑤抗筛阳性，交叉配血不相容同种异体抗体存在，本身对照成阴性同种异体抗体存在，本身对照成阳性冷反应本身抗体能引发难以确定阳性温反应本身抗体能引发难以确定阳性“钱串状”红细胞形成引发非真实阳性成果10/10/202326第26页输血前试验“三保险”:血型、抗筛、交叉配血相合%随机64ABO99.4Rh99.8抗筛99.94交叉配血99.95本身输血10010/10/202327第27页四、交叉配血交叉配血试验也称配合性试验，事实上是检查不配合性，使病人，献血者血液之间没有可测到不相配合抗原，抗体成份，试验应在37℃下进行。试验办法除作盐水介质外，尚有抗球蛋白试验法、酶法、聚凝胺法或其改良法。在配血任何步骤中均不产生溶血或凝集献血者血液才能给予病人输注。10/10/202328第28页1.盐水法盐水介质中红细胞上抗原决定族与对应抗体分子上抗原结合位点结合，交叉连接形成肉眼可见凝集块。盐水介质凝集试验用于IgM抗体检出、判定、盐水配血试验以及用盐水抗体判定血型抗原，如ABO、MN、P等血型系统抗原。在盐水介质中，凝集是IgM抗体行为。当ＩｇＧ抗A、抗B浓度足够大时，在盐水介质里也能与对应红细胞发生凝集反应2.低离子聚凝胺试验Poly是一种带高价阳离子多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可中和红细胞表面负电荷，使红细胞之间距离减少，能引发正常红细胞可逆行非特异性凝集。假如是抗体致敏红细胞被聚凝胺，则凝集不可逆。10/10/202329第29页3.酶处理细胞凝集试验红细胞表面有丰富唾液酸，带有负电菏，是红细胞互相排斥原因。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面负电菏。Zata电势减少，红细胞间距缩短，ＩｇＧ抗体分子能与有对应抗原红细胞产生凝集。酶法能显著增强Rh和Kidd系统抗原抗体反应，但蛋白酶能破坏M、N、S、s、Fya和Fyb抗原，酶法不适应这些抗原检测。常用酶有菠萝酶、木瓜酶、无花果酶等。酶浓度为0.5%。10/10/202330第30页酶处理细胞凝集试验措施一期酶法

也称直接法，菠萝酶和木瓜酶适用于一期法。操作时在已标识好试管中加入100ul血清和50ul红细胞悬液，再加50ul酶溶液，37℃孵育15分钟，1000转/分离心1分钟，轻摇后观测成果二期酶法

也称间接法，木瓜酶和无花果酶适用于二期法。二期分两步，第一步是酶处理红细胞：在1份洗涤压积红细胞中加两份木瓜酶溶液，37℃孵育30分钟，用大量Ph7。4PBS洗涤3次，用生理盐水配成5%悬液备用。第二步是在已标识好试管中加受检血清100ul,再加50ul酶处理过红细胞悬液，37℃孵育15-30分钟观测成果，凝集和溶血皆属于阳性反应。10/10/202331第31页4.抗人球蛋白AGT试验又称Coombs试验,是检查IgG抗体最有效办法.抗球蛋白血清除了可测定红细胞上IgG抗体外,还能够测定IgM和IgA,也能够测补体组分(C3、C4).AGT包括直接抗人球试验和间接抗人球试验.直接抗人球试验试验是检查体内致敏红细胞一种办法,用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏,如新生儿溶血病、溶血性输血反应、本身免疫性溶血性贫血.间接抗人球蛋白试验是一种检测血清中不完全抗体办法,常用于血型判定、抗体检出和判定、输血前交叉配血试验等.10/10/202332第32页5.微柱凝胶法微柱凝胶法利用分子筛原理10/10/202333第33页主管次管本身对照＋－＋－＋＋＋＋＋＋＋－＋－－－＋－－－－10/10/202334第34页几个交叉配血办法比较措施长处缺陷盐水法操作方便,费用低廉只能检出不相配合完全抗体,不能检出不相配合不完全抗体酶法增强Rh、Kidd系统破坏MNSs、Fy(a)、Fy(b)抗原,易失活,寿命短,反应时间长聚凝