保妇康栓对萎缩性支气管炎模型大鼠阴道上皮细胞修复作用的研究

保妇康栓对萎缩性支气管炎模型大鼠阴道上皮细胞修复作用的研究

萎缩性阴道也称为“性阴道”，经过期后妇女的发病率约为45%。从雌激素制剂长期使用的安全角度考虑，临床上多选择雌激素配合其他药物的联合用药方案。保妇康栓对萎缩性阴道炎症有一定疗效，而相关机制报道很少。本研究旨在探讨保妇康栓在大鼠萎缩性阴道炎模型中对阴道上皮黏膜的修复机制，为该药用于萎缩性阴道炎提供依据。1数据和方法1.1sprague-daw采用2020年8月至2020年12月于首都医科大学附属北京妇产医院进行相关动物实验。选取体重在320～350g之间的4个月龄SPF级雌性Sprague-Dawley(SD）大鼠分笼饲养。本实验经中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会（IACUC）审核批准，审批号：ACU19-1613。1.2g/粒国药保妇康栓（海南碧凯药业有限公司，规格：1.74g/粒，国药准字Z46020058）主要由莪术油、冰片组成。根据前期预实验，保妇康栓大鼠给药剂量为0.020μg/L/d1.3主试剂兔抗大鼠Toll样受体（tolllikereceptors,TLR)2及TLR4购自美国cloud-clone公司。1.4实验方法1.4.1大鼠卵巢前处理40只大鼠随机分为5组：正常组、模型组、保妇康栓组、雌激素组及复合药物组，每组8只。大鼠麻醉后在无菌条件下切除双侧卵巢组织，正常组仅切除卵巢周围少量脂肪组织。术后第5天行阴道涂片检查监测造模过程1.4.2动物重量和器官指数称取大鼠体重、子宫及阴道湿重，器官指数=器官重量（mg）/体重（g）。1.4.3子宫和阴道的组织发育子宫及阴道组织应用4%多聚甲醛固定，行石蜡切片HE染色观察病理学改变，测量阴道黏膜全层厚度及黏膜上皮层数。1.4.4阴道组织中的tr3-2和tr3-4蛋白免疫组化染色检测及评分评估TLR-2及TLR-4的表达1.4.5透射电镜观察组织超微结构环氧树脂包埋的阴道组织块经超薄切片机制成50nm厚电镜切片，醋酸铀-枸橼酸铅染色，JEM-1200EX透射电镜下观察组织超微结构的变化。1.5实验数据的均数标准差采用SPSS13.0进行数据处理，实验数据采用均数±标准差表示。多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA),P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1重量及器官指数去势后大鼠的体重明显升高（P<0.05），子宫、阴道的重量及器官指数均显著下降（P<0.05）。见表1～2。各治疗组对阴道重量及器官指数无显著作用，而雌激素组及复合药物组均显著上调子宫的重量及器官指数（P<0.05）。2.2组织病理学检测正常组大鼠阴道上皮全层结构完整，未见炎细胞浸润。模型组大鼠阴道壁明显变薄，阴道黏膜层数及厚度显著降低，黏膜层及黏膜下层或全层可见炎细胞浸润。保妇康栓组、雌激素组及复合药物组大鼠阴道上皮内少许淋巴细胞浸润，黏膜上皮层数及厚度显著增加（P<0.05），且3组在阴道黏膜层数及阴道上皮厚度差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。2.4阴道组织tlr-2蛋白表达与正常组比较，模型组的TLR-2及TLR-4的表达水平均显著升高（P<0.05）；与模型组比较，各治疗组均能显著下调阴道组织中的TLR-2蛋白的表达（P<0.05），各组间差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较，仅雌激素组显著下调阴道组织中的TLR-4蛋白的表达（P=0.028），保妇康栓组及复合药物组较模型组无统计学意义（P=0.104及P=0.085）。3保妇康栓治疗涣缩性阴道的临床效果本研究用去势大鼠模拟女性绝经状态阴道黏膜屏障主要由黏液层、上皮糖萼和上皮层3部分组成TLR-2/4在固有免疫反应中发挥着极其重要的作用，TLR-4主要识别革兰阴性菌的脂多糖，在正常子宫内膜上皮表达，在子宫颈及阴道上皮不表达或表达较低；而TLR-2主要识别革兰阳性菌的肽聚糖、脂磷壁酸等，在子宫内膜的表达低于输卵管、子宫颈及阴道综上所述，保妇康栓治疗萎缩性阴道炎的疗效与雌激素相当，其机制包括：（1）通过促进细胞表面糖萼恢复，增加阴道上皮细胞层数及黏膜厚度，直接参与受损黏膜屏障的修复（机械屏障）。（2）调节TLRs的表达而发挥其抗炎作用，调节阴道局部免疫应答（化学屏障）。2.3细胞外微绒毛样结构的变化正常大鼠阴道组织中复层鳞状上皮细胞结构完整，子宫内膜表面被覆单层柱状上皮，连接紧密，胞浆内线粒体形态正常，细胞膜外的微绒毛样结构表面被覆细胞外衣。模型组中阴道鳞状上皮变薄，子宫内膜上皮中脂质变性显著，两种