保泰松与人血清白蛋白作用机理的分子对接模拟

保泰松与人血清白蛋白作用机理的分子对接模拟

宝泰松（pbz）也被称为白托酮，它的化学名字为1、2-氨基-4-丁基-3-5-二羟基吡啶。这是20世纪40年代形成的一种含有一定抗炎药物的非酮类抗炎药物。它具有一定的解热、镇痛和显著的抗炎作用。在临床上PBZ被广泛用于治疗炎症性疾病，如风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、强直性脊椎炎、丝虫病急性淋巴管炎和急性痛风等人血清白蛋白（HumanSerumAlbumin,HSA）约占血浆总蛋白的60%，是人血浆中含量最高的胞外蛋白质。HSA带有较多的极性基团，能显著可逆结合内源性和外源性化合物，在体液中承担多种物质的储存和运输功能。药代动力学研究表明，口服PBZ能迅速吸收进入血液，其血浆蛋白结合率高达98%。Sudlow和Birbett等人1实验部分1.1htis-hsa实验溶液F-280型荧光分光光度计（天津港东科技发展有限公司）；UV-2550型双光束紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；DC-4006型高精度低温恒温槽（上海菁海科技有限公司）；DELTA320型pH计（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。PBZ（纯度≥99%，南通飞宇生物科技有限公司）用无水乙醇配制成2.0mmol/L储备液，使用前用无水乙醇稀释成0.1mmol/L。HSA（纯度≥99%,Sigma公司）储备液用0.05mol/LTris-HCl缓冲液（pH7.40,0.1mol/LNaCl）配制，浓度为0.1mmol/L。实验用水为18MΩ/cm超纯水，所用其他试剂均为分析纯。1.2实验方法1.2.1蛋白数据库结构表达PBZ的3D结构由有机小分子生物活性数据（PubChem数据库）获得，其CID编号为4781。HSA的晶体结构取自蛋白质结构数据库（ProteinDataBank),PDB编号为1H9Z。使用AutoDock4.2.5.1软件对PBZ和HSA进行分子对接模拟，应用LamarckianGeneticAlgorithm(LGA）遗传算法得到PBZ与HSA结合构象，用PyMOL2.3.1.0软件对药物和蛋白质分子构象进行可视化分析。1.2.23d荧光谱室温下，在两个Tris-HCl缓冲体系中分别加入0、240μL1.0×101.2.3荧光和同步荧光光谱配置HSA∶PBZ（浓度比）分别为1∶0,1∶1,1∶3,1∶5和1∶7混合液，总体积为4mL，溶液获得过程同三维荧光光谱。充分混合，在298K（或310K）恒温水浴中静止30min，测量荧光光谱或同步荧光光谱。其中，荧光光谱测量条件为：激发波长（λ1.2.4荧光光谱和吸收光谱1.0μmol/LHSA和PBZTris-HCl溶液分别测量荧光光谱和吸收光谱，荧光光谱测量参数同1.2.3节，吸收光谱波长范围290～410nm。2结果与分析2.1分子定位模拟分子模拟是研究分子之间特别是生物分子复合物（如药物与受体）之间相互作用的一种有效方法，它能获得配体和受体结合构象、位点和作用力等信息2.2hsa与pbz体系的三维荧光三维荧光具有高选择性，它能够获得化合物的完整荧光信息，可用于HSA构象及微环境的分析。1.0μmol/LHSA与PBZ作用前、后的三维荧光光谱如图3和图4所示。可以看出，HSA有两个荧光谱峰（峰1和峰2）和一级瑞利散射（峰a，λ2.3光pbz诱导hsa内源荧光加强机理HSA含有色氨酸（1个）、酪氨酸（18个）和苯丙氨酸（30个），这些具有芳香结构氨基酸令其具有内源荧光PBZ诱导HSA内源荧光猝灭机理可以根据Stern-Volmer方程进行描述式中，F282nm和295nm两激发波长下，由PBZ-HSA体系F可以看出，随着温度升高，PBZ-HSA体系的荧光猝灭常数K根据Förster理论，荧光物质与受体间发生非辐射能量转移亦可能导致HSA内源荧光猝灭原因之一2.4pbz和hsa之间的相结合常数和相结合长度荧光物质与猝灭体之间形成非荧光复合物时，可利用Lineweacr-Burk双对数方程2.5参数和力场药物分子与HSA间可逆结合化学键主要涉及：静电作用、氢键、范德华力和疏水键2.6荧光团微环境的变化同步荧光光谱被广泛用于多组分物质分析，它可以提供关于色氨酸（Trp214，Δλ=60nm）和酪氨酸（Tyr，Δλ=15nm）残基的荧光团微环境变化的有用信息，而这些荧光团与蛋白质的构象变化密切相关3pbz-hsa体系综上所述，通过多光谱技术与分子对接，研究了PBZ与HSA间的相互作用。结果表明，两者间的疏水作用力推动了PBZ-HSA复合物的形成。结合过程使HSA构象改变，色氨酸和酪氨酸残基微环境极性均有所增加，两者间结