高三生物二轮复习练习基因工程+

专题基因工程1（2021年江苏）某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合表达蛋白M和tag标签的质粒。请结合实验流程回答下列问题。（1）目的基因的扩增①提取真菌细胞，经逆转录获得cDNA,进一步获得基因m片段。②为了获得融合tag标签的蛋白M，设计引物P2时，不能包含基因m终止密码子的编码序列，否则将导致。③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除taqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增。下列叙述正确的有Taq酶最适催化温度范围为50-60℃与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物。两条子链的合成一定都是5’端向3’端延伸。PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性（2）重组质粒的构建①将Smal切开的载体A与添加同源序列的m混合，用特定DNA酶处理形成黏性末端，然后降温以促进，形成A-m结合体。将A-m结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA聚合酶及酶等，完成质粒的环化。②若正确构建的重组质粒A-m,仍能被Smal切开，则Smal的酶切点可能在。（3）融合蛋白的表达①用含有尿嘧啶的培养基培养URA3基因缺失型酵母，将其作为受体菌，导入质粒A-m,然后涂布于无尿嘧啶的培养基上，筛选获得的菌株，其机理是。②若通过抗原-抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含tag标签，说明，后续实验可借助tag标签进行蛋白M的分离纯化。2.(2017·江苏卷)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白,某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因,构建转基因工程菌,用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下,请回答下列问题:(1)从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA,通过获得用于PCR扩增。

(2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2),为方便构建重组质粒,在引物中需要增加适当的位点。设计引物时需要避免引物之间形成,而造成引物自连。

(3)图中步骤1代表,步骤2代表退火,步骤3代表延伸,这三个步骤组成一轮循环。

(4)PCR扩增时,退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关,长度相同但的引物需要设定更高的退火温度。

(5)如果PCR反应得不到任何扩增产物,则可以采取的改进措施有(填标号:①升高退火温度②降低退火温度③重新设计引物)。

3.(2019·江苏卷)下图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图,载体质粒P0具有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。请回答下列问题:图1(1)EcoRⅤ酶切位点为,EcoRⅤ酶切出来的线性载体P1为末端。

(2)用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段,其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理,在两端各添加了一个碱基为的脱氧核苷酸,形成P2;P2和目的基因片段在酶作用下,形成重组质粒P3。

(3)为筛选出含有重组质粒P3的菌落,采用含有不同抗生素的平板进行筛选,得到A、B、C三类菌落,其生长情况如下表(“+”代表生长,“-”代表不生长)。根据表中结果判断,应选择的菌落是(填表中字母)类,另外两类菌落质粒导入情况分别是、。

平板类型菌落类型ABC无抗生素+++氨苄青霉素++-四环素+--氨苄青霉素+四环素+--(4)为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒,拟设计引物进行PCR鉴定。图2为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置,PCR鉴定时应选择的一对引物是。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400bp片段,原因是。

图24.(2016·江苏卷)下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题:限制酶BamHⅠBclⅠSau3AⅠHindⅢ识别序列及切割位点↓GGATCCCCTAGG↑↓TGATCAACTAGT↑↓GATCCTAG↑↓AAGCTTTTCGAA↑图1图2(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒,需将其转入处于态的大肠杆菌。

(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加,平板上长出的菌落,常用PCR鉴定,所用的引物组成为图2中。

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为,对于该部位,这两种酶(选填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。

(4)若用Sau3AⅠ切图1质粒,最多可能获得种大小不同的DNA片段。

5.(2019·江苏卷)下列生物技术操作对遗传物质的改造,不会遗传给子代的是 ()A.将胰岛素基因表达质粒转入大肠杆菌,筛选获得基因工程菌B.将花青素代谢基因导入植物体细胞,经组培获得花色变异植株C.将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵,培育出产低乳糖牛乳的奶牛D.将腺苷酸脱氨酶基因转入淋巴细胞后回输患者,进行基因治疗6.(2020·江苏卷)如果已知一小段DNA的序列,可采用PCR的方法,简捷地分析出已知序列两侧的序列,具体流程如下图所示(以EcoRⅠ酶切为例)。请据图回答问题:(1)步骤Ⅰ用的EcoRⅠ是一种酶,它通过识别特定的切割特定位点。

(2)步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3'-羟基与5'-磷酸间形成;PCR循环中,升温到95℃是为了获得;TaqDNA聚合酶的作用是催化。

(3)若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物,步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是(从引物①②③④中选择,填编号)。

DNA序列(虚线处省略了部分核苷酸序列)已知序列PCR引物①5'—AACTATGCGCTCATGA—3'②5'—GCAATGCGTAGCCTCT—3'③5'—AGAGGCTACGCATTGC—3'④5'—TCATGAGCGCATAGTT—3'(4)对PCR产物测序,经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中(虚线处省略了部分核苷酸序列),结果正确的是。

A.5'—AACTATGCG-------AGCCCTT—3'B.5'—AATTCCATG-------CTGAATT—3'C.5'—GCAATGCGT-------TCGGGAA—3'D.5'—TTGATACGC-------CGAGTAC—3'7.(2018·江苏卷节选)为生产具有特定性能的α-淀粉酶,研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656个碱基对),利用基因工程大量制备α-淀粉酶,实验流程见下图。请回答下列问题:(1)利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前,需先获得细菌的。

(2)为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接,需在引物的端加上限制性酶切位点,且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点,主要目的是。

(3)进行扩增时,反应的温度和时间需根据具体情况进行设定,下列选项中的设定与引物有关,的设定与扩增片段的长度有关。(填标号)

①变性温度②退火温度③延伸温度④变性时间⑤退火时间⑥延伸时间(4)获得工程菌表达的α-淀粉酶后,为探究影响酶活性的因素,以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性,结果如下:缓冲液pH酶相对活性/%50mmol·L-1Na2HPO4-KH2PO46.025.46.540.27.049.87.563.250mmol·L-1Tris-HCl7.570.18.095.58.599.59.085.350mmol·L-1Gly-NaOH9.068.19.563.710.041.510.520.8根据上述实验结果,初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为。

能力1基因工程的操作工具和程序1.限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶和解旋酶的比较种类限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA分子片段脱氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键碱基对间的氢键作用特点切割目的基因及载体,能专一性识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键只能将单个脱氧核苷酸添加到已有的核苷酸链上,形成新的磷酸二酯键将DNA两条链之间的氢键打开作用结果形成黏性末端或平末端形成重组DNA分子形成新的DNA分子形成单链DNA分子2.限制酶的选择方法(1)根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶,如图甲可选择PstⅠ、EcoRⅠ。②不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶,如图甲不能选择SmaⅠ。(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致(1种或2种限制酶),以确保产生相同的末端;如果是2种限制酶则是保证目的基因的正向连接。②质粒作为载体必须具备启动子、目的基因、终止子、标记基因和复制原点等,所以选择的限制酶一定不能破坏启动子、终止子和复制原点,当质粒具有2个或多个标记基因时,一定要根据信息确定不能破坏的标记基因,必须保证重组的质粒至少有一个标记基因。如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因;如果所选限制酶的切割位点不止一个,则切割重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制起点区,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。(3)一般情况下,用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段,但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因,这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的自身连接,且确保目的基因与载体的正向连接。3.基因工程中载体必须具备的条件条件目的稳定并能复制目的基因稳定存在且数量可扩大有一个至多个限制酶切割位点可携带多个或多种外源基因具有特殊的标记基因便于重组DNA的鉴定和选择4.基因工程操作程序中的注意点(1)从基因文库中获取目的基因包括从基因组文库中获取和从cDNA文库中获取,cDNA文库可以反转录合成后再利用PCR技术扩增。(2)基因表达载体的构建是基因工程中最核心的一步,在体外进行。(3)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象。第一步存在PCR技术或逆转录法获得DNA等,第二步存在黏性末端连接现象,第四步存在核酸分子杂交和PCR等的分子水平检测方法。(4)目的基因的插入位点不是随意的,基因表达需要启动子与终止子的调控,所以目的基因应插入启动子与终止子之间。当需要目的基因在特定细胞中表达时,需要换成特定的启动子,如目的基因要在乳腺细胞中表达时,启动子要换成乳蛋白基因的启动子。(5)植物细胞的全能性较高,可经植物组织培养过程成为完整植物体,因此植物基因工程的受体细胞可以是受精卵也可以是体细胞;高度分化的动物细胞的全能性受到限制,动物基因工程中的受体细胞一般是受精卵。要合成糖蛋白、有生物活性的胰岛素则必须用真核生物,如酵母菌(需内质网、高尔基体的加工、分泌)等。(6)基因表达载体中,启动子(DNA上基因的首端,RNA聚合酶识别和结合的部位)不等于起始密码子(在mRNA上);终止子(DNA上基因的尾端,使转录在所需要的地方停止)不等于终止密码子(在mRNA上)。(7)个体水平上的检测和鉴定是最简单、最有效的方法。能力2PCR技术1.原理:利用DNA双链复制的原理,在体外将基因的核苷酸序列不断地加以复制,使其数量呈指数方式增加。2.条件条件作用缓冲液提供相对稳定的pH环境4种dNTP(脱氧核苷酸三磷酸)作为合成DNA子链的原料,同时提供能量DNA作为DNA复制的模板热稳定DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)催化合成DNA子链(耐高温)引物使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始延伸DNA链3.过程变性90-95℃,使DNA片段双链解开复性55-60℃,使解链的两条DNA单链分别与相应的引物结合(退火)延伸70-75℃,TaqDNA聚合酶催化子链合成4.相关数据项目n轮循环DNA分子数2n含引物A(或B)的DNA分子数2n-1同时含引物A、B的DNA分子数2n-2共消耗的引物数量2n＋1－2两端等长的DNA分子数2n-2n◉深度指津(1)PCR技术中,不需解旋酶,需耐高温的DNA聚合酶。(2)关于引物:依据目的基因两端的部分核苷酸序列设计。两种引物之间以及每种引物内部不能发生碱基互补配对。复制n次,需每种引物的数量是2n-1个。有时候引物5'端需要含有某种限制酶的识别序列。(3)第3次循环后,才会出现两端等长的目的基因片段。考向1基因工程的基本操作工具和程序1(多选)科学家对红细胞膜上的一种蛋白质(CHIP28)进行测序并克隆到该蛋白的cDNA,并且将含有CHIP28表达质粒的非洲爪蟾卵细胞放到低渗溶液中后,发现细胞迅速发生膨胀,而没有CHIP28表达质粒的卵细胞形状没有变化。此外,他们还将CHIP28重组到脂质体上,结果发现该脂质体也能吸水膨胀。有关叙述正确的是 ()A.构建基因表达载体时需要使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶B.构建表达质粒的目的是使CHIP28基因能够在卵细胞中复制和表达C.可以利用农杆菌转化法将CHIP28表达质粒导入非洲爪蟾卵细胞D.结果表明CHIP28参与细胞膜上水分子运输,该方式属于协助扩散2科研人员利用大肠杆菌构建了抗虫基因文库。最新研究发现漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有显著的杀虫效果,现以p-B质粒为载体,构建AH基因的cDNA文库。图1表示p-B质粒,其中Cmlr表示氯霉素抗性基因,ccdB基因表达产物能抑制大肠杆菌DNA复制。图中箭头表示相关限制酶的酶切位点,且不同种限制酶识别序列不同,其中AiuⅠ、XbaⅠ、SspⅠ和MfeⅠ识别的碱基序列和酶切位点分别是AG↓CT、T↓CTAGA、AAT↓ATT、C↓AATTG。请分析回答:图1图2(1)为获得AH基因的cDNA,先要从漏斗蜘蛛毒素肽分泌细胞中提取,再利用反应体系中添加,从而准确合成出AH基因的cDNA,排除其他提取物的干扰。若从漏斗蜘蛛其他组织细胞提取,则难以成功,原因是其他组织细胞中。

(2)利用图中的质粒和AH基因构建重组质粒时,宜选用双酶切质粒,再选用切割目的基因,将切割后获得的DNA片段混合,经DNA连接酶处理后,再与大肠杆菌混合培养,在含有适量氯霉素的培养基中添加适量冷的,以促进转化。

(3)经上述处理培养后,获得存活的大肠杆菌中应含有的质粒是,原因。

考向2基因工程的应用1下列关于基因工程的叙述,正确的是 ()A.若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶,则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定B.抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系,抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。表明一定是抗盐性的改变与抗除草剂基因的转入无关C.抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株,其DNA检测均含目的基因,抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂。表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNAD.已知不同分子量DNA可分开成不同条带,相同分子量的为一条带。用某种限制性核酸内切酶完全酶切环状质粒后,出现3条带。表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置考向3PCR技术1为了对重金属污染的土壤进行生物修复,研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白(HMA3)基因与外源高效启动子连接,导入杨树基因组中(如图)。为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因,同时避免内源HMA3基因的干扰,在进行PCR扩增时,应选择的引物组合是 ()A.①+③ B.①+② C.③+② D.③+④2为增加油菜种子的含油量,研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连,导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。请回答:图1图2(1)构建的基因表达载体中,目的基因酶D基因的上游应有,它是酶识别并结合的部位,驱动酶D基因的转录。

(2)研究人员依据基因的已知序列设计引物,采用法从陆地棉基因文库中获取酶D基因、从拟南芥基因文库中获取转运肽基因,该技术所需的工具酶是,所需引物有种,从理论上推测第四轮循环产物中含有某种引物(引物A)的DNA片段所占比值为,在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

(3)在体外利用PCR技术扩增酶D基因时,使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用陆地棉DNA聚合酶的主要原因是

。

(4)酶D基因和转运肽基因所含三种限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的切点如图1所示。则用和酶处理两个基因后,可得到端与端(填图中字母)相连的融合基因。用两种不同的酶切割目的基因和质粒,是为了防止。

(5)将上述融合基因插入图2所示Ti质粒的中,构建基因表达载体(重组质粒)并导入农杆菌中。构建的基因表达载体组成包括启动子、和复制原点。将获得的农杆菌接种在含的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落,再利用液体培养基振荡培养,可以得到用于转化的侵染液。

(6)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间,此过程的目的是,进一步筛选后获得转基因油菜细胞,其中融合基因是整合到油菜细胞上。(7)用法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

强化训练1.下图1是限制酶BamHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点示意图,图2表示质粒pZHZ11(总长为3.8kb,1kb=1000对碱基)的结构,其中,Ap'为链霉素抗性基因,lacZ基因编码β-半乳糖苷酶,该酶催化生成的化合物能将白色的大肠杆菌染成蓝色。请分析回答问题:图1图2(1)图1表明,酶的作用具有性,利用图2构建成基因表达载体,还必须加入的组成元件是(2)若先用限制酶BamHⅠ切开pZHZ11,然后灭活BamHⅠ酶,再加酶进行连接,最后将连接物导入足够数量的大肠杆菌细胞中,则可使细胞呈蓝色的质粒的最短长度是。

(3)若将两端分别用限制酶BamHⅠ和BglⅡ切开的单个目的基因片段置换pZHZ11中0.5kb的BamHⅠ酶切片段,形成4.9kb的重组质粒,则目的基因长度为kb。

(4)上述4.9kb的重组质粒有两种形式,若用BamHⅠ和EcoRⅠ联合酶切其中一种,只能获得1.6kb和3.3kb两种DNA片段;那么联合酶切同等长度的另一种重组质粒,则可获得kb和kb两种DNA片段。

(5)若pZHZ11上基因表达时的碱基序列方向是逆时针的,为使目的基因定向插入,并获得在含链霉素的培养基上存活且显白色的大肠杆菌,则切割目的基因编码区下游的限制酶应为(从题图涉及的限制酶中选择)。

2.乳糖不耐症是由于乳糖酶(LCT)分泌少,不能完全消化分解母乳或牛乳中的乳糖所引起的非感染性腹泻。科研工作者利用生物技术培育出转基因低乳糖奶牛新品种,给患乳糖不耐症患者带来福音。下图1为转基因低乳糖奶牛培育流程,图2是使用限制酶BamHⅠ切割DNA产生的结果。请分析回答问题:图1…TAGGATCCTCGATC…

…ATCCTAGGAGCTAG……TAGGATCCTCGATC…

…ATCCTAGGAGCTAG…图2(1)科学家在构建重组质粒T时,首先采用PCR技术对LCT基因进行扩增,在扩增目的基因的操作过程中,加入的物质有:模板DNA、引物、4种脱氧核苷酸以及酶;若一个该DNA分子在PCR仪中经过4次循环,需要个引物,产物中共有个等长的LCT基因片段。

(2)图1中的牛胎儿成纤维细胞无法直接发育成个体,需要利用去核卵母细胞构建重组细胞才能培育出新个体,其依据的原理是。

(3)据图2分析,BamHⅠ的识别序列以及切割位点(用“↓”表示)是。

(4)图1中,切割质粒S用的酶是,切割后形成1.8kb和8.2kb(1kb=1000对碱基)两种片段。若用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶切割重组质粒T,获得1.6kb和8.8kb两种片段,则转入的LCT基因长度为kb。

(5)在转基因低乳糖奶牛的乳腺细胞中,可检测到的物质有(填字母)。

A.LCT基因B.LCTmRNAC.LCT1.3.基因工程为培育抗病毒植物开辟了新途径,下图为研究人员培育转花叶病毒外壳蛋白基因(CMV-CP基因,长度为740个碱基对)番茄的主要过程示意图(Kanr为卡那霉素抗性基因)。请回答:(1)将CMVCP基因导入番茄细胞后,培育的番茄植株具有抗CMV感染能力,这种现象属于植物的特异性免疫,该免疫过程中抗原是。

(2)过程①接种的农杆菌细胞中,Kanr及CMV-CP基因应整合在Ti质粒的T-DNA内部,这是由于。使用液体培养基培养农杆菌的目的是(3)为确定用于筛选的Kan适宜浓度,研究人员进行实验,结果如下表所示。最终确定过程③④加入的Kan浓度为35mg·L-1,该浓度既可,又不至于因Kan浓度过高影响导入重组DNA细胞的生长发育。

Kan浓度/(mg·L-1)接种外植体数形成愈伤组织数外植体状况05549正常形成愈伤组织25662只膨大、不易形成愈伤组织35660变褐色死亡50640变褐色死亡(4)过程③④所需的培养基为(选填“固体”或“液体”)培养基。过程⑤再生植株抗性鉴定时,引物序列设计的主要依据是,引物序列长度及G+C比例直接影响着PCR过程中(选填“变性”“退火”或“延伸”)的温度。

(5)过程⑤电泳结果如下图所示,其中1号为标准参照,2号为重组Ti质粒的PCR产物,36号为抗性植株DNA的PCR产物,可以确定36号再生植株中号植株基因组中整合了CMV-CP基因。

4.锦鲤疱疹病毒是一种双链DNA病毒。下图为TaqMan荧光探针技术的原理示意图,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时该探针被Taq酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增1个DNA分子,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。请回答下列问题:(1)在基因工程中,目前获取目的基因的常用方法除了利用PCR技术扩增外,还有和两种类型。

(2)引物的化学本质是,其与模板DNA的结合具有性。

(3)通常情况下,探针中的GC含量比引物中的略高,这有利于保证退火时与模板DNA结合。

(4)用TaqMan荧光探针技术检测锦鲤疱疹病毒时,在反应体系中要加相应的病毒遗传物质、引物、探针和、酶等,其中酶发挥的具体作用是延伸DNA链和。

(5)若最初该反应体系中只有一个病毒DNA分子,经n次循环后,需要消耗TaqMan荧光探针个。5.PCR是利用体内DNA复制的原理,进行生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。请回答有关问题:(1)PCR反应的基本步骤是。

(2)科学家研究发现DNA聚合酶只能催化方向的聚合反应。图1表示细胞内染色体DNA的复制过程,有一条子链是先合成短的DNA片段(称为冈崎片段),再形成较长的分子,可推测参与以上过程的酶有。在PCR过程中无冈崎片