高效液相色谱法-高效液相色谱的类型（食品仪器分析课件）

高效液相色谱的类型一、液-固吸附色谱1.固定相液固吸附色谱的固定相是固体吸附剂，是一些多孔的固体颗粒物质。液固色谱法采用的固体吸附剂按其性质可分为极性和非极性两种类型。极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁、分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性吸附剂适于分离碱，碱性吸附剂则适于分离酸性溶质。各种吸附剂中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝。在现代液相色谱中，硅胶不仅作为液固吸附色谱固定相，还可作为液液分配色谱的载体和键合相色谱填料的基体。2.流动相液相色谱的流动相必须符合下列要求：应与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性；应有高纯度；性能应与所使用的检测器相匹配；应对样品有足够的溶解能力；应具有低粘度和适当低的沸点；毒性小，不易着火、价格尽量便宜等。

在液-固色谱中，选择流动相的基本原则是极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。为了获得合适的溶剂极性，常采用两种、三种或更多种不同极性的溶剂混合起来使用，如果样品组分的分配比k值范围很广则使用梯度洗脱。二、液-液分配色谱在液液色谱中，一个液相作为流动相，而另一个液相则涂渍在很细惰性载体或硅胶上作为固定相。流动相与固定相应互不相溶，两者之间应有一明显的分界面。

1.固定相液液色谱的固定相由载体和固定液组成。常用的载体有下列几类：（1）表面多孔型载体（薄壳型微珠载体。（2）全多孔型载体。（3）全多孔型微粒载体，又称堆积硅珠。这种载体粒度为5～10m。由于颗粒小，所以柱效高，是目前使用最广泛的一种载体。

2.流动相在液液色谱中，固定液和流动相的性质往往处于两个极端。以极性物质作为固定相，非极性溶剂作流动相的液液色谱，称为正相分配色谱，适合于分离极性化合物；反之，如选用非极性物质为固定相，而极性溶剂为流动相的液液色谱称为反相分配色谱，这种色谱方法适合于分离芳烃、稠环芳烃及烷烃等化合物。三、键合相色谱化学键合色谱适用于分离几乎所有类型的化合物。根据键合相与流动相之间相对极性的强弱，可将键合相色谱分为正相键合相色谱和反相键合相色谱。据统计在高效液相色谱法中，约70～80％的分析任务是由反相键合相色谱法来完成的。1.固定相化学键合固定相一般都采用硅胶（薄壳型或全多孔微粒型）为基体。化学键合固定相按极性大小分为非极性、弱极性、极性三种。非极性烷基键合相是目前应用最广泛的柱填料。

最常用的“万能柱”填料为“C18”，简称“ODS”柱，即十八烷基硅烷键合硅胶填料（Octadecylsilyl，简称ODS）。这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70～80％的分析任务。2.流动相（1）反相色谱最常用的流动相及其冲洗强度如下：

H2O＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜异丙醇＜四氢呋喃＜丙醇＜二氯甲烷（2）正相色谱常用的流动相及其冲洗强度的顺序是：正己烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜异丙醇

化学键合色谱具有下列优点：适用于分离几乎所有类型的化合物。由于键合到载体上的基团不易被剪切而流失，这不仅解决了由于固定液流失所带来的困扰，还特别适合于梯度洗脱，为复杂体系的分离创造了条件。键合固定相对不太强的酸及各种极性的溶剂都有很好的化学稳定性和热稳定性。固定相柱效高，使用寿命长，分析重现性好。四、凝胶色谱凝胶色谱又称分子排阻色谱（或空间排阻色谱），是它一种根据试样分子的尺寸大小顺序进行分离的色谱技术。排阻色谱的色谱柱的填料是凝胶，它是一种表面惰性、含有许多不同尺寸的孔穴或立体网状物质。根据所用流动相的不同，凝胶色谱可分为两类：即用水溶剂作流动相的凝胶过滤色